溶剂诱导固相合成MAGE-2表位多肽异构的LC-MS研究

近年来随着黑色素瘤特异性免疫治疗研究的不断深入,其肿瘤特异性抗原的发现及其细胞毒性T细胞(CTL)表位的预测及鉴定成为特异性免疫治疗及其多肽疫苗研制的重要前提.预测黑色素瘤抗原基因-2(MAGE-2)的HLA-A2限制性CTL表位的方法也日显成熟,预测出的表位其组成通常为10个氨基酸左右的多肽,随后进行固相合成.因不同氨基酸活化方式及偶联效率的差异,通常对合成的表位多肽进行梯度反相高压液相色谱(RP-HPLC-UV)分析制备,以确保下一步细胞功能性研究即细胞杀伤验证的特异性;MAGE-2众多表位多肽都表现较强的疏水性,虽然分析制备前可供疏水肽选择的有机溶剂系统较多,乙醇及甲醇溶剂系统可能最具代表性.当用乙醇或甲醇溶解众多MAGE-2疏水性表位多肽样品后进行色谱分析时发现,合成的MAGE-2表位多肽的RP-HPLC分析时,214 nm峰面积积分百分比都偏小,显示其合成时氨基酸偶联率较低,由此色谱分析结果推出的合成的低偶联率与理论上单个氨基酸99.5%的平均偶联率差距太大;随后的表位氨基酸组成分析也未发现有诸如半胱氨酸等可能导致折叠异构的氨基酸存在;如何消除这一困惑?正基于此,本实验随机选用了固相合成MAGE-2表位(161-169),通过不同溶剂处理后,在LC-MS技术平台上对其反相行为作了初步的研究.     

HLA-A*0201限制性CTL表位肽的三维定量构效关系的研究

运用比较分子力场(CoMFA)和比较分子相似性指数分析(CoMFA)方法研究了50个HLA-A^*0201限制性CTL表位九肽结构与亲和性间的关系，另外15个表位九肽作为预测集用于检验模型的预测能力.结果表明采用CoMSIA得到的构效关系模型(q^2=0.628，r^2=0.997，F=840.419)要明显优于采用CoMFA得到的构效关系模型.在CoMSIA计算中，当引入疏水场时，三维构效关系模型得到明显改善，通过该三维构效关系模型，可较精确地估算预测集中15个CTL表位肽与HLA-A^*0201间的亲和力(r^2pred=0.743).通过分析分子场等值面图在空间的分布，可以观察到表位肽分子周围的立体及疏水特征对表位肽与HLA-A^*0201间结合亲和力的影响，从而为进一步对CTL表位肽进行结构改造并基于此进行治疗性疫苗分子设计提供理论基础.     

溶剂诱导黑色素瘤抗原基因-2特定表位多肽异构的LC/MS研究

 研究乙醇、甲醇两种常用溶剂系统对固相合成的黑色素瘤抗原基因 2 (MAGE 2 )的特定表位多肽 (171 179)异构的影响。分别运用乙醇、甲醇溶剂体系以及极性溶剂二甲基亚砜 (DMSO)作对照预处理固相合成的黑色素瘤抗原特异性MAGE 2表位多肽 (171～ 179) ,然后用反相高效液相色谱 /质谱联用技术 (RP HPLC/MS)对合成的表位多肽的m/z进行Q1正离子监测扫描分析 ,观察其在不同溶剂系统预处理下的异构情况 ,以选择合理的预处理条件。结果发现采用乙醇及甲醇溶样时MAGE 2表位多肽有异构体产生 ,极性溶剂DMSO溶样的表位多肽未有异构现象发生。     

Lewisx五糖的有效合成: 发展DC-靶向疫苗的有效分子

将选择性保护的乳糖二醇与Lewis^x三糖在N-碘代丁二酰亚胺(NIS)/TfOH催化下高立体、高区域选择性糖苷化得Lewis^x五糖, 后者脱保护后获得目标五糖, 总收率67.7%. 化合物结构经NMR, MS和元素分析确证.     

计算机辅助筛选酪氨酸激酶相关蛋白TRP-2 CTL模拟表位

运用多项式方案、量化基序方案等经典的CTL表位筛选方案, 初步筛选了酪氨酸激酶相关蛋白TRP-2 CTL表位TRP-2_180～188 (SVYDFFVWL)的模拟表位, 以通过表位改造提高其与HLA-A2.1分子结合的能力, 从而提高其免疫原性. 根据打分结果, 合成了4个得分较高的九肽序列, 亲和力实验结果表明所筛选的4个序列较原序列均有较高的亲和力, 但对2位的单突变结果较1和2位双突变结果理想, 进一步运用分子模拟方法对4个序列与HLA-A2.1分子间的相互作用进行了分子模拟分析, 分子模拟结果较好地解释了上述实验现象, 从而为进一步的结构改造提供了理论依据. 本研究提供了一个合理高效的模拟表位筛选方法.     

多肽序列的结构特征与其MHC限制性

从多肽序列的一级结构出发,基于多肽序列中氨基酸侧链间距离和氨基酸侧链的电性特征,构建了多肽序列特征矢量,简称ζ矢量,选取文献中主要组织相容性复合物(MHC)中的14个A^d限制性和14个非A^d限制性多肽序列作为训练集建立辅助性T细胞(helperTlymphocytc,Th)表位预测的定量模型,为了检验该预报系统的精确性,进行了随机抽样检验和交互检验.结果表明,该预报系统具有稳定性好、预测能力强的特点,该方法可用于人的MHCⅠ和Ⅱ类表位的预测、蛋白质抗原免疫识别、亚单位疫苗分子设计及研制.