人工模拟加卤酶 Ⅰ.半抗原合成、表征和生物活性测定

卟啉衍生物;酶联免疫吸附法;人工模拟加卤酶 Ⅰ.半抗原合成、表征和生物活性测定     

稀土离子诱导钙调蛋白构象变化后的单克隆抗体制备

采用单克隆抗体技术研究了三价稀土离子与钙调蛋白作用后对其与靶分子识别能力的影响。牛脑钙调蛋白经2.4-二硝基氟苯修饰后再结合三价的铕离子,然后免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后在小鼠血清中检测到相应的抗体,抗体效价为1:12000;用杂交瘤细胞技术制备出一株抗钙调蛋白的单克隆抗体细胞株2C3;酶联免疫吸附法(ELISA)测定结果证实钙调蛋白结合稀土离子前后对该抗体的识别能力存在显着差异,表明该抗体可以用于进一步研究金属离子对钙调蛋白构象变化及其对靶分子识别的影响。     

人工模拟加卤酶 Ⅱ.酶学性质

全抗原;卟啉;人工模拟加卤酶 Ⅱ.酶学性质     

单克隆抗体1F2的制备、纯化及质谱测定

用小分子meso -四 (α,α ,α ,α -O -苯乙酰苯 )卟啉免疫Balb/c小鼠 ,用单克隆抗体技术得到细胞株 1F2和单抗 1F2 ,这是对传统免疫理论的一个突破 .利用高效液相色谱和基质辅助激光解吸质谱 (matrixassistedlaserdesorptionionizationtime_of_flightmassspectography ;缩写为MALDI/TOFMS)证明了纯化得到单抗体 1F2的纯度很好 ,同时得到的单抗 1F2的相对分子量为 15 6 6 78.8Da .MALDI/TOFMS提供了一种测定蛋白质相对分子量和纯度快速准确的方法     

活力高于天然谷胱甘肽过氧化物酶的含硒抗体酶

还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基和两个羧基分别与2,4-二硝基氯苯(DNCB)和甲醇反应,合成出半抗原Hp2;通过戊二醛将Hp2连到牛血清白蛋白(BSA)上,合成出全抗原Ag2;吸收光谱法测出Hp2在BSA上的平均连接量为30.2mol/mol.用标准的单克隆抗体(McAb)制备技术,制备出阳性McAb(IgG)-4G3;4G3对GSH和半抗原Hp2的解离常数(K_D)表明,单克隆抗体4G3对GSH具有较强的亲和力.对4G3进行两步化学诱变(Chemical Mutation),诱变后即为具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的含硒抗体酶(m4G3),m4G3的GPX活力为9337U/μmol,是兔肝GPX(RL-GPX,5780U/μmol)的 1.6倍,曾报道的含硒抗体酶m4A4(1239 U/μmol)的7.5倍,制备出活性高于天然酶的抗体酶,证实了半抗原设计思想.将m4G3拆分成Fab和Fc片段,发现m4G3的活性中心位于Fab片段上,m4G3的硒代半胱氨酸(Se-Cys)含量为1.9 mol/mol.