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W 7-agarose是常用的细胞外CaM功能的拮抗剂,本实验采用荧光光谱法研究了水溶液中钙调素拮抗剂W 7-agarose与植物胞外钙调素的相互结合反应。W 7-agarose是一种将W 7-共价连接到颗粒型agarose(琼脂糖)的粒子。W 7-agarose颗粒较大且容易沉淀,静置5m in后,溶液中的荧光强度完全由游离的CaM产生。在溶液中加入W 7-agarose后,溶液中一部分CaM与其结合后沉降至荧光比色皿底部,导致溶液中CaM的荧光强度下降。由此可以确定溶液中游离CaM的浓度。根据公式lg{[Q]t(F0-F)/F0}=nlg{[Q]tF/F0} lgnK[B]t,从而计算出配位体系的结合常数和配比。研究表明:二者以摩尔比1∶1结合,其平衡常数为4.9×105。由此进一步计算了W 7-agarose对胞外钙调素的拮抗率,在拮抗剂W 7-agarose浓度达到15~20μmol/L时,拮抗率可达到90%以上,与文献报道的生物学体内实验结果一致,从分子水平上解释了W 7-agarose与CaM的结合作用。 相似文献
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Tb3+离子发光探针研究Ca2+,La3+和Al3+与拟南芥钙调素的竞争结合 总被引:2,自引:0,他引:2
利用Tb3 离子的发光, 研究了Tb3 与拟南芥钙调素 (CaM)结合的荧光光谱及荧光滴定曲线特点, 然后利用Tb3 4*CaM系统在221 nm直接激发和280 nm敏化激发的光谱变化研究了Ca2 , La3 和Al3 与拟南芥钙调素 (CaM) 的竞争结合作用. 结果表明: Tb3 , La3 与钙调素的竞争结合能力强于Ca2 , 而Tb3 的竞争结合力又大于La3 , Ca2 与钙调素的结合力远大于Al3 . 竞争实验的结果从分子水平上揭示了Tb3 , La3 和Al3 等金属离子生物效应可能的分子机制. 相似文献
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合成了3种化合物 [2-ClPyH]2CoCl4(1), [2-ClPyH]2NiCl4(2)和[2-ClPyH]2CuCl4(3), 单晶X射线衍射法晶体结构测定结果表明, 这3种化合物是同形加合物, 在它们的结构中, [2-ClPyH]+离子呈平面状, 而[MCl4]2-离子为变形的四面体. 晶体结构分析发现晶体中存在N—H…Cl和C—H…Cl氢键, 以及Cl…Cl分子间相互作用和π-π堆积作用. 对自由状态下独立的配位离子进行的几何构型优化, 以及三维周期性条件下几何结构优化的量子化学计算结果表明, 标题化合物中具有方向性和选择性的氢键决定延伸性结构的方向, 而相对较弱的卤素…卤素作用在最终晶体结构的确定中扮演很重要的角色. 相似文献
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优选亳桑皮的最佳炮制工艺。以桑根酮C含量为指标,对亳桑皮干燥方法和蜜炙方法进行系统研究。分别于60℃烘干、晒干、阴干、霉变后60℃烘干4种不同干燥方法下对亳桑皮质量进行评价,结果表明,于60℃烘干的亳桑皮中桑根酮C含量最高,亳桑皮采收后应进行烘干处理;采用正交试验,确定亳桑皮的最佳炮制工艺:药材与蜜的比例为4∶1,闷润时间为20 min,在120~150℃温度下中火炒制15 min。采用高效液相色谱法测定所炮制的亳桑皮中桑根酮C的含量,桑根酮C含量在0.73~3.65μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 9,方法的检出限为0.001 8 mg/mL。测定结果的相对标准偏差为1.47%(n=6),样品加标回收率为96.75%~100.03%。该工艺稳定可行,重现性好,可为亳桑皮的规范化生产提供科学理论依据。 相似文献
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探索了2种新型荧光蛋白MiCy、Citrine作为荧光共振能量转移技术(FRET)传能对的可能性.首先通过基因工程方法表达纯化了这2种蛋白,并对其进行了光谱学研究,由于MiCy具有高的量子产率,且MiCy与Citrine的光谱重叠积分J较大,计算表明MiCy与Citrine的Forster距离为R0=5.81 nm,比CFP-YFP的大(R0=5 nm).进一步以Ni2+-NTA-agarose为FRET模型,结果表明:无论在荧光分光光度计还是在激光共聚焦显微镜上,都可以明显地检测到MiCy与Citrine的能量转移.由于二者较文献报道的其它FRET对具有更大的Forster距离,而且更适合以激光作为激发光进行测量,因此该FRET对应有更加广泛的应用前景. 相似文献
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采用方波极谱法研究了重金属Pb2+与钙调素(CaM)的结合反应, 直接检测到Pb2+-CaM配合物的存在, 并进一步利用循环伏安法研究了Pb2+-CaM的电极反应. 在pH=6.5时, 用方波极谱法在Pb2+-CaM体系中检测出2个还原峰, 峰电位分别为-0.44~-0.47 V和-0.73~-0.77 V, 说明在Pb2+-CaM体系中铅有2种存在形式, -0.44~-0.47 V的还原峰对应于游离态Pb2+, 电位更负的还原峰对应于配合物[Pb2+-CaM]. 2个还原峰的峰电流均随着cPb2+/cCaM比值增大而增大; 至cPb2+/cCaM≥10后, 配合物[Pb2+-CaM]的峰电流基本不再变化, 而游离态Pb2+的峰电流则继续增大. 利用极谱滴定曲线的拐点可判断出Pb2+在CaM中有10个结合位点. 进一步的测量结果表明, 循环伏安曲线出现游离态Pb2+的氧化峰和还原峰, 而络合态的[Pb2+-CaM]只有其还原峰, 反向电压扫描时不出现阳极波, 即没有相对应的氧化峰出现. 相似文献
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水合Ce^3+离子发射强荧光,而用Ce^3+滴定植物钙调素(CaM)时,Ce^3+离子荧光被完全淬灭,据此建立了测定Ce^3+离子与植物钙调素结合位点数及逐级结合常数的方法。实验表明,Ce^3+离子与植物钙调素的荧光激发光谱及发射光谱形状与光谱强度都有显著差别,前者的荧光强度远大于后者,故CaM存在时可以测定游离Ce^3+的浓度。Ce^3+离子荧光淬灭法测定结果说明,在0.5 mol·L^-1KCl溶液中,CaM有4个Ce^3+离子结合位点。进一步通过Ce^3+滴定植物钙调素的实验,并结合Excel规划求解法,计算出Ce^3+与CaM的结合常数,K1=4.17×10^7,K2=1.26×10^7,K3=1.89×10^6,K4=2.04×10^6。 相似文献