荧光各向异性法均相检测酸性、中性和碱性介质中的蛋白酶

荧光各向异性;罗丹明;蛋白酶;胰蛋白酶;胃蛋白酶;菠萝蛋白酶;蛋白酶抑制剂     

以四磺基铝酞菁-牛血清白蛋白为底物的荧光恢复均相法测定胃蛋白酶

酸性介质中,红区荧光探针四磺基铝酞菁(AlS4Pc)的荧光被白蛋白显著猝灭,加入胃蛋白酶后,体系荧光明显回复。基于此现象,建立了荧光恢复均相测定胃蛋白酶的新方法。考察了各种影响因素,在最佳实验条件(pH2.5、反应温度50℃、反应时间1h)下,本方法的线性范围为0.04～4mg/L,检出限为20μg/L。用本方法测定实际样品中胃蛋白酶,取得了满意的结果。     

谷氨酸钠对大鼠胃粘膜细胞的保护作用

本文报道了谷氨酸钠对0.6N HCl所致的粘胃膜损伤的影响.0.6N HCl给饥饿大鼠灌胃,可引起严重的胃粘膜损伤,但提前15min以0.25g/kg和0.5g/kg谷氨酸钠溶液灌胃,再给予0.6NHCl,均可防止由盐酸所致的胃粘膜损伤。消炎痛提前60min皮下注射,可阻断谷氨酸钠的细胞保护作用,此外谷氨酸钠     

CdSe量子点的合成及标记胃蛋白酶的研究

以硒粉及镉盐为反应前体,通过固相/液相沉淀反应及室温乙二胺溶剂体系两种方法合成了平均粒径为8～10nm的CdSe量子点,以巯基乙酸修饰量子点使之可溶,并标记胃蛋白酶。CdSe量子点在350和380nm附近有明显尖锐的紫外吸收,有481.6nm的荧光带边发射,标记胃蛋白酶后,紫外吸收峰位不变而吸光度增强,荧光峰位蓝移至467.2nm,荧光强度降低。在最佳实验条件下,胃蛋白酶浓度在5～50mg/L范围内与荧光降低值之间呈线性关系;检出限(3σ)为0.36mg/L(n=10),方法已用于人体胃液胃蛋白酶的测定。     

Al-CAS-β-CD-CTMAB四元络合体系光度法测定水中微量铝

铝作为自然界中常量元素，过量摄入铝会干扰磷在体内的代谢，同时对胃蛋白酶的活性有抑制作用，且对中枢神经有不良影响。饮用水是人体摄入铝的主要来源，因此准确测定日常饮用水中铝的含量十分必要。     

秋水仙碱与胃蛋白酶相互作用的光谱性质研究

采用紫外光谱法和荧光光谱法研究了秋水仙碱与胃蛋白酶的结合作用。观测到秋水仙碱使胃蛋白酶的紫外吸收峰增强,特征荧光峰淬灭。Stem-Volmer淬灭曲线显示,秋水仙碱对胃蛋白酶的荧光淬灭很可能是一个单一的静态淬灭过程。当λmax=295nm时,秋水仙碱可以淬灭胃蛋白酶中95．5％的Trp残基。     

光谱法研究变性剂诱导的猪胃蛋白酶和牛血清蛋白折叠中间态的分布和过渡

利用紫外光谱和荧光光谱分别测定了变性剂诱导的猪胃蛋白酶和牛血清蛋白的残余活性,并根据它们的两个特征展开参数定量描述了猪胃蛋白酶和牛血清蛋白天然态、折叠中间态和完全展开态随变性液中变性剂浓度的分布和过渡。结果表明,在盐酸胍诱导的猪胃蛋白酶"三态"去折叠过程中,当盐酸胍浓度约为1.5mol/L时,折叠中间态的浓度达到最大,约占溶液中总猪胃蛋白酶的12%;在脲诱导的牛血清蛋白"三态"去折叠过程中,当脲浓度约为2.0mol/L时,折叠中间态的浓度达到最大,约占溶液中总牛血清蛋白的41%;而在盐酸胍诱导的牛血清蛋白"四态"去折叠过程中,当盐酸胍浓度约为0.4mol/L、1.2mol/L时,第一和第二折叠中间态浓度分别达到最大,约占溶液中总牛血清蛋白的20%和70%。     

二甲基亚砜和四氢呋喃对胃蛋白酶催化动力学和分子光谱的影响

为了研究二甲基亚砜(DMSO)和四氢呋喃(THF)对胃蛋白酶(Pepsin, PP)催化活性的影响及其作用本质, 测定了在这两种有机溶剂的作用下胃蛋白酶的催化活性、 动力学参数、 紫外吸收光谱、 紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化. 结果表明, 体积分数为9%的DMSO使PP活性提高83.4%; 而体积分数为1%的THF只能使PP活性提高3.59%. 在盐酸溶液中, PP的动力学参数K_m=2.22 mg/mL, v_max=1.1×10⁶ U/mg Pro; 在9%DMSO中, 其K_m=1.50 mg/mL, v_max=0.5×10⁶ U/mg Pro; 在1%THF中的K_m=1.91 mg/mL, v_max=0.51×10⁶ U/mg Pro. 9%DMSO强烈抑制PP分子肽键的紫外吸收, 而对芳香族氨基酸无影响; 1%THF则对PP的紫外吸收光谱影响不大. 9%DMSO和1%THF都使PP的紫外差示光谱出现明显的负吸收峰和正吸收峰. 9%DMSO使酶分子的荧光发射峰向短波方向移动1 nm; 而1%THF则对其无影响. 实验结果表明, 在9%DMSO和1%THF中, PP分子的立体构象发生了变化, 使酶分子的K_m下降, 酶分子对底物的亲和力有所升高, 从而导致酶分子的催化活性有不同程度的提高.     

对磺酸基杯芳烃与胃蛋白酶相互作用的光谱研究

模拟人体生理条件,利用荧光光谱和UV-Vis吸收光谱研究对磺酸基杯芳烃与胃蛋白酶的作用机理。由Stern-Volmer方程及UV-Vis吸收光谱得其荧光猝灭类型为静态猝灭,求出结合常数。由热力学参数判断其作用力主要为静电作用。同时根据能量转移理论得出荧光给体和受体间的距离r。并由同步荧光光谱研究得出对磺酸基杯芳烃存在下胃蛋白酶的构象发生了变化。