多酚氧化酶电化学发光生物传感器的研制及其应用

通过超声诱导法提取土豆浸取液中的多酚氧化酶.收集上层清液与纯石墨粉混合,经阴干并与液态石蜡研磨均匀后,将此混合物装入空心碳电极中,由此制成多酚氧化酶电化学发光生物传感器.以此传感器对肾上腺素进行电化学发光检测,肾上腺素在多酚氧化酶存在下被溶液中的溶解氧所氧化而产生过氧化氢,而所产生的过氧化氢与鲁米诺反应产生化学发光,此乃生化传感器的作用机理.由于肾上腺素的存在而使化学发光强度的增加与其质量浓度在2×10-4～3×10-3g·L-1范围内呈线性关系;该方法的检出限为6.0×10-5g·L-1.对4.0×10-4g·L-1肾上腺素分别测定8次,所得结果的相对标准偏差小于5%.用此方法分析了肾上腺素注射液样品,测得结果与标准值相符.在此注射液的基础上作加标回收试验,测得回收率在94%～99%之间.     

脉冲电场对脂肪氧化酶及多酚氧化酶构象影响的光谱分析

以多酚氧化酶(Polyhenol oxidase, PPO)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase, LOX)为研究材料, 利用圆二色谱(CD)和荧光光谱分析了脉冲电场(PEF)对此两种酶蛋白二级和三级构象的影响。PPO和LOX酶活在电场强度为20 kV·cm-1的同轴处理室内处理320 μs分别降低了60.3%和21.7%,并且,随着电场强度的增大, 脉冲处理时间的延长, PPO与LOX酶的活性进一步降低。通过CD光谱图发现, PEF处理后,PPO和LOX的α-螺旋含量显著降低, 而β-折叠含量则呈现增长, 表明PPO与LOX酶蛋白中的二级构象在PEF处理后发生了极大的改变, 酶活钝化和二级结构的破坏之间存在对应关系。PEF处理后LOX的荧光强度增加, 随电场强度增强荧光强度增加幅度显著增大,表明PEF破坏了LOX三级构象,酶活钝化和三级结构的破坏之间存在对应关系。     

近红外光谱法快速检测烟草中总多酚含量

应用傅立叶变换近红外漫反射光谱仪,采集340个样品光谱图,经优化挑选出具代表性的244个烟草样品建立了近红外光谱与烟草中的多酚含量间的数学模型,用建立的模型对20个样品进行预测,结果表明,各成分近红外预测值与实测值之间的平均标准偏差为0.10;且近红外预测值与化学法不存在显著性差异,可用近红外光谱快速检测烟草中的多酚含量,具有简便、快速、低成本、无污染以及样品的非破坏性等优点.     

高交联双酯树脂制备、表征及性能研究

聚双甲基丙烯酸乙二醇酯(PEGDMA)大孔吸附树脂是一类含酯基的中极性吸附剂,通过调节致孔剂的种类和比例,制备了一系列均聚PEGDMA及EGDMA-DVB共聚物双酯树脂.用简易BET低温氮吸附法测定了树脂的比表面积.结果表明,甲苯作致孔剂制备的PEGDMA树脂比表面积在单体:致孔剂(体积比)为1:1~1:2时变化不大,甲苯致孔剂量增大所得树脂在各种溶剂中的溶胀率增大;EGDMA-DVB共聚物双酯树脂的比表面积随DVB量增加稍有下降.以苯酚和苹果多酚为吸附质研究了该系列树脂对极性有机分子的吸附行为与吸附机理,静态吸附等温线数据分析结果表明,制备的树脂与2种商品树脂(XAD-7和HP2MG)比较,树脂ED2-T对苹果多酚的平衡吸附量超过了商品树脂,初始浓度Co=1.1935mg/mL时,ED2-T树脂的平衡吸附量为135mg/g,XAD-7和HP2MG分别为113mg/g和120mg/g.树脂对苹果多酚的吸附等温线与Langmuir方程拟合较好,对苯酚的吸附Freundlich方程拟合得更好.     

Crystal Structure of Complex [Cu（BBA）（NO_3）]（NO_3）_2 and Its Polyphenol Oxidase Mimic Activity

The title complex [Cu（BBA）（NO3）]（NO3）2（BBA = [2-（benzotriazol-1-yl）ethyl][2（benzotriazol-2-yl）ethyl] amine） has been synthesized and structurally characterized.Its crystallizes in triclinic,space group P1 with a = 10.003（3）,b = 11.399（3）,c = 18.186（5）,α = 77.184（4）,β = 88.573（5）,γ = 72.306（5）o,V = 1924.4（9）3,Z = 2,F（000） = 894,Dc = 1.493 Mg/m3,Mr = 865.31,μ = 0.644 mm-1,the final R = 0.0733 and wR = 0.1722 for 4349 observed reflections with I 2σ（I）.Its polyphenol oxidase（PPO） mimic activity was studied spectroscopically by using pyrogallol as the substrate.The results showed that the kinetics of pyrogallol catalyzed by the complex obeyed the Michaelis-Mentent equation,showing that the PPO catalytic activity of the complex increased with increasing the reaction temperature and pH values.     

pH诱导烟草多酚氧化酶二级结构变化的光谱学研究

为了获得更多的关于多酚氧化酶二级结构和活性中心结构的信息 ,应用FT -IR以及去卷积技术、荧光光谱、紫外差光谱研究了溶液 pH的变化对烟草多酚氧化酶的二级结构的影响并对其活性中心的光谱跃迁进行了归属 .实验结果表明 ,随着 pH值的降低或提高 ,多酚氧化酶的二级结构发生了变化 ,浕 螺旋和反平行 β 折叠含量减少 ,无规卷曲含量有所增加 ,同时色氨酸和酪氨酸残基的微环境发生了一定的变化 ;随pH的降低 ,活性中心的Cu2 + 与配位的组氨酸咪唑基的作用加强 ;此外 ,归属和讨论了酶活性中心金属离子与配体间全部电荷转移谱带     

盐酸胍变性烟草多酚氧化酶的复性

盐酸胍变性烟草多酚氧化酶的复性;多酚氧化酶;复性;盐酸胍;β-环糊精;溴化十六烷基三甲基铵     

漆酚-酪氨酸功能基树脂的合成及对多酚氧化酶的固定化

漆酚-酪氨酸功能基树脂的合成及对多酚氧化酶的固定化     

一步法合成取代-1, 2-苯醌类化合物

应用固定化多酚氧化酶催化的氧化-迈克尔加成反应,一步合成了4,5-二取代-1,2-苯醌类化合物:4,5-N,N-二(苯胺基)-1,2-苯醌,4,5-N,N-二(对甲苯胺基)-1,2-苯醌,4,5-N,N-二(间氯苯胺基)-1,2-苯醌,4,5-N,N-二(对溴苯胺基)-1,2-苯醌。用化学法(I~2-KI)进行氧化-迈克尔加成反应也成功地合成了4,5-二取代-1,2-苯醌类化合物。应用紫外光谱方法证明了氧化-迈克尔加成反应的机制。     

固相萃取高效液相色谱法测定茶叶中多酚

研究了用固相萃取预分离,高效液相色谱法测定茶叶中多酚的方法。茶多酚提取液用Sep-Park-C18固相微萃取小柱预分离纯化,以Nova-Pak-C18色谱柱为固定相,0.05 mol.L-1磷酸二氢钾缓冲溶液和甲醇梯度洗脱为流动相,在该条件下茶叶中主要的植物多酚均达到基线分离;用紫外二极管矩阵检测器检测,各组分均用最大波长色谱图的峰面积定量,并用二极管矩阵检测器记录的紫外光谱图对主要多酚进行辅助定性。方法标准回收率为94%~106%,相对标准偏差为1.22%~1.57%。方法应用于茶叶样品中多酚的测定,结果满意。