人凝血因子Ⅸ在家兔体内的持续表达

本文报道用构建有人凝血因子Ⅸ cDNA的重组质粒(pCMV Ⅸ)或重组反转录病毒(XLⅨ和N2CMVⅨ)转染家兔原代培养的皮肤成纤维细胞(RSF),经过选择后将转有人Ⅸ因子cDNA的细胞包埋于胶原基质,然后进行自体或同种异体移植。腹腔移植有RSF-XLⅨ转化细胞的家兔血浆中人Ⅸ因子表达水平可达100ng/ml,表达持续5个半月;腹腔移植有RSF-pCMVⅨ细胞的家兔血浆中人Ⅸ因子水平可高达2.95ng/ml,表达至今已超过10个月,而且仍在继续检测中。在移植方法上,我们做了进一步改进,将收缩后的细胞胶原块移植改为细胞胶原液注射,使移植方法更简便有效,无需进行手术,用此法皮下移植有RSF-N2CMVⅨ转化细胞的家兔血浆中,人Ⅸ因子表达水平可高达480ng/ml,表达至今已有3个多月,其持续表达的趋势仍很乐观,为基因治疗的临床试验提供了一条更加切实可行的技术路线。     

Real-time monitoring of DNAzyme cleavage process using fluorescent assay

Detection of deoxyribozyme(DNAzyme) cleavage process usually needs complex and time-consuming radial labeling,gel electrophoresis and autoradiography.This paper reported an approach to detect DNAzyme cleavage process in real time using a fluorescence probe.The probe was employed as DNAzyme substrate to convert directly the cleavage information into fluorescence signal in real time.Compared with traditional approach,this non-isotope method not only brought a convenient means to monitor the DNAzyme cleavag...     

聚电解质复合物在药物控释中的应用

近年来聚电解质复合物在药物控释领域受到重视。对聚电解质复合物在响应型药物控释、细胞免疫隔离移植、多肽蛋白质药物的缓释及其基因治疗等领域的应用进行了综述。     

鱼类DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗是继灭活疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗和重组多肽疫苗之后的又一新型疫苗，同传统的疫苗相比具有多方面的优越性。本文综述了近年来国内外对鱼类DNA疫苗基础研究和应用研究的新进展，并探讨了鱼类DNA疫苗当前需要解决的问题及发展前景。     

高聚物基因载体的功能化研究

寻找安全、高效的基因载体是基因治疗的关键问题之一，聚合物基因载体具有低毒、低成本、可设计性强等优良的性质，是未来基因载体发展的方向。传统的高聚物作为基因载体时，功能单一，不能完全满足基因治疗的需要，因此对载体进行功能化修饰是十分必要的。本文在分析基因治疗过程的基础上，详述了基因载体应具有的四种基本功能——在细胞外保持稳定的功能、进入细胞的功能、逃离溶酶体的功能、进入细胞核的功能，并详细介绍了有关基因载体功能化修饰的方法和目前国际上的进展情况，最后本文总结了高聚物载体目前存在的主要问题及未来的发展方向。     

带有人Ⅸ因子cDNA的反转录病毒载体的构建及其在血友病B患者皮肤成纤维细胞中的高效转移和表达

本文报道对血友病B实施基因治疗的可能性,首先将由SV40早期启动子,小鼠MT-1启动子和反转录病毒LTR启动子控制的Ⅸ因子cDNA构建到反转录病毒载体,然后用电穿孔法将构建的4个反转录病毒载体分别转入一株Amphotropic辅助细胞,PA317细胞,再用一株人纤维肉瘤细胞,HT1080细胞,测定这些辅助细胞的产病毒滴度,可得到2×10~4CFU/ml到5×10~5CFU/ml左右的病毒感染颗粒,用ELISA分别测定转有不同病毒载体的PA317细胞的Ⅸ因子蛋白产量,发现LTR启动子的表达效率最高,Ⅸ因子蛋白的分泌速率可达584ng/10~6细胞/24h,而SV40早期启动子和MT-1启动子的表达效率分别只有它的1/10和1/20,将表达效率最高的反转录病毒载体pXL—Ⅸ 1转入一株取自血友病B患者原代培养的皮肤成纤维细胞后同样能产生较高浓度的Ⅸ因子蛋白,其分泌速率可达549ng/10~6细胞/24h,其中75％以上的Ⅸ因子具有凝血活性,从而达到了首先在体外培养细胞纠正Ⅸ因子基因缺陷的目的,实现了血友病B基因治疗的第一步。     

O-羧甲基壳聚糖的制备及应用研究进展

O_羧甲基壳聚糖是壳聚糖的一种衍生物 ,具有比壳聚糖更优良的特性 ,有着更广阔的应用前景。本文对它的制备、性质、应用 ,特别是其在药物释放及基因治疗方面应用的研究进展进行了综述。     

基于ATRP法研制多糖基因载体

通过对天然多糖进行化学修饰,制备具有ATRP引发位点的多糖引发剂,然后通过原子转移自由基聚合,制备以天然多糖为骨架,以不同链长的阳离子聚合物为侧链的阳离子非病毒基因载体。对合成的材料进行细胞转染、细胞毒性测试,并对其它各种性能进行表征。各项表征的结果证明基于ATRP法合成的多糖基因载体能够很好地络合DNA,并且具有良好的pH缓冲能力以及生物相容性,与PEI和商业化转染试剂相比,转染效率更高,细胞毒性更低,在基因治疗中具有很好的应用前景。     

特异性抗癌因子——凋亡素

凋亡素是一种抗癌因子, 能以非p53依赖性途径诱导不同类型人肿瘤细胞的凋亡, 不受Bcl 2的抑制作用, 且对正常细胞不起作用。 根据凋亡素的肿瘤特异性, 可将其作为一种极具潜力的抗肿瘤生物制剂, 在人体内大量传递给肿瘤细胞, 有选择性地根除肿瘤细胞。 论述了凋亡素抗肿瘤细胞的作用机理, 并对其应用现状、 前景及进一步研究的主要问题予以简要评述。Apoptin is an anti cancer gene. It can induce p53 independent,Bcl 2 insensitive type of apoptosis in various human tumor cells,and fails to induce programmed cell death in normal cell. Because of having tumor specificity, apoptin can be transferred enough to tumor cell in vivo,selectly kill the tumor as a potential anti tumor biological preparation. In this paper, we provide a brief review on the anti cancer mechanism of apoptin, current status and application prospect, and the main issues in apoptin studies.     

基因兴奋剂检测的现状与展望

生物技术在取得巨大成就的同时也导致了兴奋剂的发展。从体外重组蛋白到潜在的基因兴奋剂的出现,给兴奋剂检测工作带来了巨大的挑战。基因治疗的发展以及一些功能基因对运动技能提高的潜力,加大了基因兴奋剂使用的可能性。本文在介绍基因兴奋剂的基础上,阐述了基因兴奋剂检测方法的研究现状,展望了基因兴奋剂检测技术的发展策略。