新型连续棒状疏水色谱柱的制备及其色谱性能研究

采用连续棒柱制备技术,制备了一种甲基丙烯酸缩水甘油酯-甲基丙烯酸丁酯-已二酸二甲基丙烯酸酯三元共聚物连续棒疏水色谱柱。考察了聚合条件对聚合物孔结构及介质疏水性的影响。应用该色谱柱对标准蛋白混合样及基因工程药物γ-INF和胰岛素的前驱体Pro-insulin提取液进行了分离纯,效果良好。     

一种金属螯合连续棒色谱柱的制备及色谱性能

金属螯合色谱（IMAC）在生物大分子的分离和纯化中有广泛的应用,通过改变IMAC的洗脱条件和被螯合的金属离子种类,生物大分子可获得选择性分离。目前,IMAC通常以有机和无机微球作固定相,由于柱死体积的存在,使色谱柱空间利用率低,且降低了蛋白质分离的柱效。近年报道的连续棒色谱柱是由直径1μm左右的微粒堆积而成的整体,消除了色谱柱的死体积,该类色谱柱用于蛋白的反相、疏水、离子交换和亲和色谱分离均可获得高的分离效率。然而,至今尚未见到对金属螯合连续棒色谱柱制备及应用的研究报道。对蛋白的IMAC分离机理研究中,研究流动相pH对分离的影响是主要手段之一,但通常研究的pH值的5.0-9.0的窄范围内。本文提出和制备了以交联聚甲基丙烯酸缩水甘油酯连续棒为基质的金属螯合色谱柱,并研究了pH在2.0-11.0的较宽范围内对蛋白保留的影响。     

反相液相色谱中溶剂强度规律的研究

 以溶质计量置换保留模型 (SDM R)为依据 ,通过研究 3种正链醇同系物溶剂置换剂对 14种正链醇同系物溶质色谱保留行为的影响 ,发现计量置换参数Z(对应 1mol溶质被吸附时从溶质与固定相接触处释放出的溶剂的总摩尔数 )、lgI(与 1mol溶质对固定相亲和势有关的常数 )和 j(与 1mol溶剂对固定相亲和势有关的常数 )均随着同系物置换剂相对分子质量的增大而减小 ,并呈现出线性变化 ,表明溶剂强度与溶剂分子的大小有关 ,分子愈大 ,溶剂洗脱能力愈强 ,并遵循同系物规律。     

反相液相色谱中同系物结构参数收敛的热力学表征

以液相色谱中的溶质计量置换保留模型为理论基础,从热力学角度对反相液相色谱中同系物四种分子结构参数的收敛性进行了研究,推导出计算收敛点的坐标方程,并从热力学角度阐述了收敛点坐标的物理意义。这些参数收敛点纵坐标的自由能变均为０。基于任何常数值与２．３０３ＲＴ之乘积均带有能量量纲,故横坐标为分别用Ｚ和这些参数表征自由能时两者之间的补偿自由能。并进一步讨论了同系物收敛性存在的实质是在收敛点时,溶质的总保留     

反相液相色谱中同系物收敛的热力学表征

以液相色谱中的溶质计量置换保留模型(SDM-R)为理论基础,从热力学角度进一步对反相液相色谱中同系物的收敛性进行了研究。建立了溶质平均收敛点坐标的计算方程,并从自由能变的角度表征了收敛点坐标的物理意义,阐明了收敛点的纵坐标相等的原因是溶质在收敛点处的自由能变为零。浓度收敛点的横坐标是1mol纯溶剂的解吸附自由能;而碳数收敛点的横坐标为当流动相中有机溶剂的浓度为纯有机溶剂浓度的十分之一时的同系物端基的保留自由能的负值。并以实验数据对该方程进行了验证,两者符合程度甚佳。     

在内渗水滤纸上进行低浓度组分的点滴反应研究

一个多世纪以来,点滴反应仅在滤纸和不渗透表面上进行。前者具有毛细作用,后者可以加热方式浓集低浓度组分,两者之长不能兼备。现代科学技术的发展要求点滴反应能快速检测溶液中浓度低于通常点滴反应最低浓度以下组分。(我们称其为低浓度组分,它是一个相对量而无确定的浓度值或浓度范围)。尖端富集法以研究者Skalos的名字命名,它被誉为是对提高点滴反应灵敏度的一大贡献,但此法操作不甚方便且仅能用于定性检出。Weisz的环炉技术可用于组分分离、半定量的测定,现已广泛推广使用,但在通常情况下,仅能提高纸上点滴反应灵敏度3-10倍。     

新型高效疏水相互作用色谱填料的合成及性能的研究

]本文介绍了在硅胶基质上键合聚乙二醇、聚丙二醇、聚四氢呋喃和改性聚乙二醇等多类疏水色谱填料的合成及其分离蛋白质的色谱特性。其中改性聚乙二醇、聚1,2-丙二醇、聚四氢呋喃型配基的疏水填料为首次合成。文中探讨了硅胶孔径、聚乙二醇链长、改性聚乙二醇配基的端基和不同的聚醚链对蛋白质的保留值、活性回收率、分离度、填料稳定性和键合密度的影响,发现了在聚醚链单元上引入支链改变生物大分子与填料疏水区的接触面积可以改变蛋白质的保留时间和选择性。此外,还介绍了在硅胶上包裹有机胺类化合物再与环氧交联的疏水色谱填料的制备。