豌豆多糖对DSS诱导结肠炎小鼠的保护作用

结肠炎发病率和流行率较高且其治疗药物存在一定副作用,因此人们逐渐寻求包括多糖在内的天然来源化合物作为治疗结肠炎的新手段。本研究采用水提醇沉提取、制备豌豆多糖,分析其基本理化性质特征,进一步构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎模型,研究低、中、高(200,400,600 mg·kg-1小鼠体重)剂量豌豆多糖对小鼠溃疡性结肠炎的干预效果。结果显示,纯化后的豌豆多糖总糖含量可达85.1%,主要组分重均分子量为610 kDa,主要由Ara(20.1%)、Gal(15.1%)和GalA(13.1%)等单糖组成,是一种果胶类多糖。动物实验结果显示,相比于低剂量和高剂量,中剂量豌豆多糖表现出更好的保护作用,能够在一定程度上延缓体重下降和DAI值上升,抑制结肠缩短,降低结肠组织炎症浸润,保护其结构完整。豌豆多糖干预降低了促炎细胞因子IL-6、IL-1β水平,提高了抗炎细胞因子IL-10、IL-22(P<0.05)水平。综上所述,豌豆来源多糖是一种果胶类多糖,可通过调节炎症因子表达进而发挥对DSS诱导结肠炎小鼠的保护作用,上述结果为开发天然来源的结肠炎辅助治疗产品提供理论依据。     

鼠伤寒沙门氏菌对肠道屏障的破坏作用

为了研究鼠伤寒沙门氏菌对肠道屏障的破坏作用,应用小鼠结肠病理组织切片技术、蓝色葡聚糖2000渗透量检测并结合transwell细胞层模型和荧光定量PCR方法探寻鼠伤寒沙门氏菌破坏肠道屏障的可能机制。病理切片结果显示:鼠伤寒沙门氏菌感染可导致肠上皮细胞受损,Babl/c小鼠小肠外蓝色葡聚糖2000渗透量在2、4和6h升高(P0.05),昆明小鼠小肠外其渗透量在2和4h时显著升高(P0.005);细胞跨膜电阻值降低(P0.05);细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1基因mRNA转录水平下调(P0.005)。结果表明,鼠伤寒沙门氏菌能够通过下调肠上皮细胞紧密连接蛋白的表达来破坏细胞间的紧密连接结构,从而达到破坏肠道屏障的作用。补充阐明了鼠伤寒沙门氏菌感染对肠道屏障的影响,对揭示研究鼠伤寒沙门氏菌的致病机制提供一定依据。     

草果挥发油对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用

建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,探讨了草果挥发油对肿瘤质量、胸腺指数和脾脏指数的影响,采用HE染色法观察肿瘤细胞形态变化,免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达.结果发现,草果挥发油各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p0.05);高剂量组(300 mg·kg-1)有些微毒副作用,各剂量组胸腺指数和脾脏指数较环磷酰胺(CTX)组有明显升高(p0.05);推测草果挥发油能够抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞生长的机制是通过上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达来诱导细胞凋亡.     

益生菌发酵对胡萝卜水溶性多糖调节小鼠免疫功能的影响

采用水提醇沉法从益生菌发酵前后的胡萝卜汁中提取水溶性多糖(分别记为WSP-n和WSP-p),并基于环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型,评价它们的免疫调节功能差异。结果显示,WSP-n与WSP-p均能提高胸腺指数、减缓脾脏肿大、抑制T淋巴细胞亚群分化异常和提高NK细胞毒性作用,同时能提高脾脏中细胞因子水平和血清中免疫球蛋白含量,并且WSP-p的作用强于WSP-n。表明胡萝卜多糖能有效改善机体的免疫机能,且益生菌发酵可增强胡萝卜多糖的免疫调节功能。     

利用噬菌体展示技术制备识别酵母RNR_3原核表达片段的单链抗体

选取酵母细胞RNR_3蛋白序列中高保守片段:145-298位氨基酸序列,命名为RNR_3h进行原核表达.并利用噬菌体展示技术从非免疫小鼠噬菌体展示抗体库中淘选到能与该原核表达产物特异性结合的单链抗体.得到的3种单链抗体均识别原核表达片段的空间抗原位点.为寻找酵母RNR1和RNR_3的诱导表达水平与DNA损伤信号的相互关系,将真核生物RNRs发展为检测环境化学致痛物DNA损伤效应的生物标志物进行了尝试.     

发酵虫草菌粉对免疫抑制小鼠的免疫调节和抗氧化作用

构建免疫抑制小鼠模型,将小鼠随机分为6组,即正常组、模型组、阳性组及发酵虫草菌粉高、中、低剂量组。小鼠以灌胃的方式给予不同剂量发酵虫草菌粉后,CCK-8法测T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖,ELISA法测脾淋巴细胞上清IgM、IL-6、IL-10和TNF-α含量,ELISA法测血清IgM,测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。发现与模型组相比,发酵虫草菌粉各剂量组均能提高小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。随着菌粉剂量的升高,IgM、IL-6、IL-10和TNF-α的含量均升高,SOD活性增强,MDA含量降低。结果表明,发酵虫草菌粉能有效拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用,并能提高免疫抑制小鼠的抗氧化能力。 更多还原     

丙烯酰胺对小鼠肠道屏障损伤作用

从分子水平、细胞水平、蛋白水平对不同剂量丙烯酰胺诱导的小鼠肠道屏障损伤进行评估。通过不同浓度下丙烯酰胺小鼠染毒模型,观察了丙烯酰胺剂量与肠道屏障损伤的关系,结果表明10～30 mg·kg-1·bw剂量范围内丙烯酰胺连续灌胃30天均会对小鼠小肠屏障造成不同程度的损伤。此研究为丙烯酰胺的日常防控、生产抑制和膳食预防提供了理论基础和研究依据。     

紫心甘薯多糖对四氯化碳肝损伤小鼠的保护作用

研究紫心甘薯多糖对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用及可能作用机制.以不同剂量的紫心甘薯多糖200、400、800 mg.(kg.d)-1分别给予小鼠灌胃,设立对照组,连续10 d作预处理,腹腔注射0.1%的CCl410 ml.kg-1建立CCl4诱导小鼠肝损伤模型.测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)酶活力、总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)含量,测定肝组织中超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,并进一步观察肝组织病理组织学变化.紫心甘薯多糖各剂量组均能明显地抑制血清中ALT、AST、LDH、TBIL的升高和TP的下降,降低肝脏中MDA的含量,提高肝组织中SOD和GSH活性,减轻CCl4对肝脏细胞的病理损伤.紫心甘薯多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤具有明显保护作用,其作用机理可能与抗氧化作用有关.     

可诱导肺部特异表达白介素22转基因小鼠模型的建立

建立了一种肺部特异性、高效表达鼠源白介素22(mIL-22)的转基因小鼠模型.将TRE-Tight-mIL-22转基因片段显微注射入C57BL/6J小鼠受精卵细胞中,得到转基因小鼠,与能够控制TRE-Tight下游基因在肺部特异性表达的CC10-rtTA-hGH转基因小鼠交配,获得同时含有CC10-rtTA-hGH和TRE-Tight-mIL-22这两段基因的双阳性子代转基因小鼠(IL-22转基因小鼠).使用强力霉素(Dox)持续诱导6周龄IL-22转基因小鼠6周,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肺部灌洗液中IL-22蛋白的表达量.结果表明,在野生型和未诱导的IL-22转基因小鼠的肺部均未发现IL-22表达,而经Dox诱导后,与野生型C57BL/6J小鼠(10ng·L-1)比较,IL-22转基因小鼠肺部发现高表达量IL-22(~400ng·L-1,p0.05).免疫组化染色结果显示,经Dox诱导,IL-22主要在IL-22转基因小鼠的肺部气道上皮细胞特异性表达.     

κ-卡拉胶协同三硝基苯磺酸致鼠结肠炎症的研究

为了研究κ-卡拉胶(CGN)协同加强三硝基苯磺酸(TNBS)对BALB/c小鼠结肠炎症的作用, 利用TNBS诱导BALB/c小鼠结肠炎模型, 分析了κ-卡拉胶处理后, 小鼠存活率及组织学变化, 随后应用表达谱芯片技术分析差异表达基因. 结果发现, κ-卡拉胶增加了TNBS诱导的小鼠死亡率及结肠损伤. 芯片数据发现: κ-卡拉胶协同TNBS处理后, 较之TNBS处理组出现619个变化基因, 部分炎症相关基因继续上调, 炎症应答程度出现增强. 而κ-卡拉胶单独处理不具有致炎性, 仅影响代谢系统等相关基因的变化. 表明κ-卡拉胶可通过增强上调炎症相关基因, 加重TNBS诱导小鼠结肠炎症反应.     

五味子乙素对心肌细胞的氧化应激损伤的保护作用及其机制

研究了五味子乙素(Schisandrin B,SchB)对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠原代心肌细胞体外氧化应激损伤的保护作用,并对其作用机制进行探讨。结果发现:与对照组相比,H_2O_2诱导组中心肌细胞的增殖明显受到抑制,氧化损伤产物丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)、促氧化蛋白p67-phox和p47-phox以及信号通路蛋白Trfa6和p-TAK1水平显著升高,而超氧化物歧化酶(SOD)及抗氧化蛋白HO-1水平显著降低,差异均有统计学意义(p0. 01);与H_2O_2诱导组相比,SchB诱导心肌细胞增殖呈现浓度依赖性,显著抑制MDA、NO、p67-phox、p47-phox、Trfa6及p-TAK1的表达,显著诱导SOD和HO-1的表达,差异均有统计学意义(p0. 05)。研究表明,SchB增强心肌细胞的抗氧化能力与抑制Traf6/TAK1信号传导有关。     

肠道微生态失调对小鼠海马星形胶质细胞的影响

精神分裂症是一种多病因的精神疾病。流行病学研究表明,肠道微生物与精神分裂症发生有关。繁育了精神分裂症易感基因Nrg1基因敲除(Nrg1-/-)小鼠,用抗生素破坏野生型和(Nrg1-/-)小鼠的肠道微生物系统,通过观察肠道微生态失调对小鼠大脑海马区星形胶质细胞的影响,来研究肠道微生态与精神分裂症发生的关系。将20d的C57BL/6雄性小鼠随机分成4组:对照组、肠道微生态失调组、易感基因Nrg1/敲除组、肠道微生态失调与易感基因互作组,每组12只。处理30d后,采用免疫荧光技术定量分析各组小鼠大脑海马区星形胶质细胞的分布与形态。结果显示,肠道微生态失调和敲除易感基因Nrg1都能激活星形胶质细胞,细胞膨大（P<0.05）,分支增多（P<0.01）。在一定程度上,肠道微生态失调与易感基因Nrg1交互作用加剧星形胶质细胞的活化（P<0.05）。     

乌骨鸡黑色素的体外抗氧化活性及其对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

通过测定乌骨鸡黑色素对DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基清除率,研究乌骨鸡黑色素的体外抗氧化能力,同时建立H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞氧化损伤模型,MTT法测定HUVEC细胞存活率,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,研究乌骨鸡黑色素对HUVEC细胞氧化损伤的保护作用。结果表明:乌骨鸡黑色素清除DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基的IC50值分别为0.18,0.40,2.37 mg·mL~(-1)。乌骨鸡黑色素可降低H_2O_2诱导损伤的HUVEC细胞LDH漏出量和MDA含量,提高SOD活性,并呈一定浓度依赖性。因此,乌骨鸡黑色素具有一定的体外抗氧化活性,可保护H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤。     

纳米二氧化硅体内与体外氧化应激及细胞毒性实验研究

研究了纳米二氧化硅(SiO2)体内及体外氧化应激损伤及细胞毒性作用及机制.体内实验采用ICR小鼠,纳米SiO2经口灌胃染毒3次,检测肺组织中MDA(丙二醛)和SOD(超氧化物歧化酶)含量,观察纳米SiO2对小鼠肺的氧化应激毒性.采用体外培养的小鼠上皮细胞(JB6细胞),观察不同质量浓度纳米SiO2染毒后的细胞形态改变,通过蛋白免疫印迹实验检测纳米SiO2是否通过FAS信号途径引起细胞凋亡.研究结果表明:纳米SiO2经口染毒后对小鼠肺具有氧化应激损伤作用,表现为随染毒剂量的升高,肺组织中MDA产生量增加,呈一定的剂量-反应关系.同时,肺组织内SOD水平总体趋势降低,但是差别未见统计学意义.体外培养细胞实验中,纳米SiO2染毒后可引起细胞出现凋亡并呈空泡样变.蛋白免疫印迹实验中,纳米SiO2可引起FAS信号蛋白表达量明显上升,但是FADD表达水平并不升高.     

LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

分别从幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增ltB和hpaA基因,构建ltB-hpaA融合基因及其原核表达系统,鉴定其表达产物的免疫原性、佐剂活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用.采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和ltB基因片段,构建ltB-hpaA融合基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.采用质粒pQE32和宿主菌E.coli M15构建ltB-hpaA融合基因表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导表达.采用western blot和GM1-ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐剂活性.建立HpSS1株感染BALB/c小鼠模型,检测rLTB-HpaA的免疫保护效果.采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况.与GenBank登录的相关序列比较,所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94.25%～99.71%和95.38%～99.19%.所构建的表达系统pQE32-ltB-hpaA-M15的目的重组蛋白(rLTB-HpaA)表达量高达细菌总蛋白的1/3左右.rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能产生特异性抗体.GM1-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合.rH-paA免疫小鼠的保护率仅为66.7%,rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83.3%.81.6%患者血清(102/125)HpaA抗体检测结果阳性,所有菌株均含有HpaA.本文成功地构建了itB-hpaA融合基因高效原核表达系统,所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性,并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用.     

SMS沉默对HepG2细胞炎症和CD14表达的影响

肝细胞的炎性损伤与全身性炎症引起的多器官功能障碍的发生相关,LPS可致全身性炎症,在炎症发生过程中,CD14是LPS的膜受体,可通过激活NF-κB诱导炎症相关因子的表达,CD14主要分布于细胞膜脂筏部位,脂筏是由鞘磷脂(SM)和胆固醇相互锚定,并与相关蛋白质组成的一种微空间结构,因此降低SM的合成,会降低SM在脂筏部位的含量,进而改变脂筏结构及CD14在脂筏部位的分布,最终影响炎症的发生。本研究利用干扰载体pSUPER-SMS沉默HepG2细胞鞘磷脂合酶(SMS)的表达,并检测SM在脂筏部位的含量及CD14和TNF-ɑ的表达,结果显示SMS1和SMS2的mRNA水平表达和酶活都有显著下降(P<0.001,n=3),SM在脂筏部位含量和CD14的表达均有显著降低(P<0.001,n=3),导致LPS所致HepG2细胞TNF-ɑmRNA水平的表达下降。可见SMS可通过改变CD14在脂筏部位的含量,最终影响和炎症发生相关分子TNF-ɑ的表达。     

植物乳杆菌WLPL01艾草发酵液干预鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的作用

研究了植物乳杆菌WLPL01艾草发酵液对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的影响。通过构建鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠模型,采用低剂量(5 mg·mL~(-1))、中剂量(15 mg·mL~(-1))和高剂量(50 mg·mL~(-1))的艾草发酵液以及植物乳杆菌WLPL01菌悬液进行干预,监测小鼠体重、各组织中鼠伤寒沙门氏菌数量、结肠和回肠的HE染色以及相关炎症因子的表达和分泌,探究了艾草发酵液对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的干预作用。结果表明,通过高剂量(50 mg·mL~(-1))和中剂量(15 mg·mL~(-1))艾草发酵液的干预,能有效缓解由鼠伤寒沙门氏菌感染引起的体重下降,减少肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结中的鼠伤寒沙门氏菌的数量;并通过下调结肠和回肠中相关炎症因子(TNF-α,IFN-γ和IL-10)的转录水平及血清中TNF-α和IFN-γ的分泌量,减轻结肠、回肠的炎症及肠道损伤。     

miR-17-5p调节肝脏胰岛素敏感性的作用机制

探讨miR-17-5p对肝脏胰岛敏感性调节作用及其机制。通过脂质体瞬时转染的方法,将miR-17-5p mimics及inhibitor分别导入HepG2、Hepa1-6及小鼠肝原代细胞中,通过qRT-PCR验证获得microRNA功能获得性及功能缺失性的细胞株,在此基础上进一步检测胰岛素刺激下相关信号通路蛋白表达。在HepG2、Hepa1-6及小鼠肝原代细胞过表达miR-17-5p后,胰岛素信号通路相中p-AKT、p-GSK3β磷酸化增强;反之,p-AKT、p-GSK3β磷酸化减弱。同时发现,过表达miR-17-5p可降低PTEN蛋白表达,抑制miR-17-5p表达后PTEN的蛋白表达量上调。细胞中过表达PTEN可抑制因miR-17-5p过表达增强的p-AKT、p-GSK3β蛋白水平。本研究结果初步证明miR-17-5p通过靶向调节PTEN表达,从而参与调节肝细胞胰岛素敏感性。     

猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFV ns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化E.coli BL21-codonPlus (DE3),IPTG诱导重组蛋白表达.采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3(NS3)重组蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体.ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示,该多克隆抗体效价在1×105以上,能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应.制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原 ;NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定.     

壬基酚异构体对小鼠Sertoli TM4细胞内黏着连接、雄激素结合蛋白和抑制素B的影响

研究了壬基酚异构体[4-(1-乙基-1-甲基-己基)酚](4-NP65)对小鼠睾丸Sertoli TM4细胞黏着连接相关分子表达和分泌雄激素结合蛋白(ABP),抑制素B(Inhibin B)的作用。不同浓度4-NP65(0、0.1、1、10、20、40μmol·L-1)作用于TM4细胞24h,MTT法测定细胞存活率,RT-PCR测定TM4细胞波形蛋白(Vimentin),N-钙黏着蛋白(N-cadherin),黏着斑蛋白(Vinculin)mRNA的表达情况;Elisa法测定细胞上清液中ABP和Inhibin B的含量。结果4-NP65在低剂量(0.1、1、10、20μmol·L-1)对细胞存活率无显著影响,在高剂量(40、80、100μmol·L-1)能显著降低TM4细胞存活率(P<0.01);4-NP65剂量依赖性增加Vimentin mRNA表达,降低Vinculin、N-cadherin mRNA的表达;4-NP65呈剂量依赖性降低ABP的分泌量,与对照组比较,在20、40μmol·L-1处理组有显著差异(P<0.05),而Inhibin B的含量在20、40μmol·L-1 4-NP65处理组有显著降低(P<0.05)。4-NP65对小鼠Sertoli TM4细胞具有生殖毒性作用,黏着连接是其作用的可能靶点之一,4-NP65可能通过影响TM4细胞黏着连接相关分子的表达和TM4细胞分泌ABP、Inhibin B引起雄性生殖系统损伤。