毛细管电泳技术在线酶分析研究进展

生物酶是生物体内活细胞产生的生物催化剂,控制着生物体的新陈代谢、营养和能量转换等反应过程.建立生物酶活性及催化反应或抑制反应动力学的快速、准确和有效的测定方法,对于理解生物反应过程、药物研发以及疾病诊治等具有重要意义.毛细管电泳技术由于其具有分离效率高、分析速度快、操作简单和样品消耗少等优点,在酶分析研究中越来越受到关注,正逐渐发展为生物酶快速分析的技术平台.根据酶的存在形态,毛细管电泳在线酶分析可分为均相模式(包括电泳媒介微分析法和在线连续监测酶分析)和异相模式(固定化酶反应器),本文综述了近10年来这2种不同模式及其在酶抑制剂筛选、酶动力学研究和底物定量检测等方面的应用.     

毛细管电泳序列分析技术用于在线酶分析研究进展

毛细管电泳技术具有操作简单、样品消耗量少、分离效率高和分析速度快等优势,不仅是一种高效的分离分析技术,而且已经发展成为在线酶分析和酶抑制研究的强有力工具。酶反应全程的实时在线监测,可以实现酶反应动力学过程的高时间分辨精确检测,以更准确地获得反应机制和反应速率常数,有助于更好地了解酶反应机制,从而更全面深入地认识酶在生物代谢中的功能。此外,准确、快速的在线酶抑制剂高通量筛选方法的发展,对加快酶抑制类药物的研发以及疾病的临床诊断亦具有重要意义。电泳媒介微分析法（EMMA）和固定化酶微反应器（IMER）是毛细管电泳酶分析技术中常用的在线分析方法。这两种在线酶分析法的进样方式通常为流体动力学进样和电动进样,无法实现酶反应过程中的无干扰序列进样分析。近年来,基于快速序列进样的毛细管电泳序列分析技术已经发展成为在线酶分析的另一种强有力手段,以实现高时间分辨和高通量的酶分析在线检测。该文从快速序列进样的角度,综述了近年来毛细管电泳序列分析技术在线酶分析的研究进展,并着重介绍了各种序列进样方法及其在酶反应和酶抑制反应中的应用,包括光快门进样、流动门进样、毛细管对接的二维扩散进样、流动注射进样、液滴微流控进样等。     

毛细管电泳法在酶抑制剂筛选中的应用

毛细管电泳法以其分离效率高、耗时短、样品用量少、灵敏度高以及易于实现自动化等诸多特点,在筛选酶抑制剂研究中有着不可替代的优势.本文综述了毛细管电泳法在酶抑制剂筛选中的应用.主要介绍了应用最广泛的离线分析(Off-line assay)和在线分析(In-line assay),即柱前酶反应(Pre-capillary enzyme reaction)和在柱酶分析(In-capillary enzyme reaction).并对该领域的未来发展进行了展望.     

基于毛细管电泳酶微反应器的吉非替尼对表皮生长因子受体抑制率的测定

采用共价键法将表皮生长因子受体固定在毛细管内壁,制备了一种毛细管电泳酶微反应器。结合毛细管电泳高效分离技术,以三磷酸腺苷为底物,吉非替尼为抑制剂,利用表皮生长因子受体酶微反应器在线测定了吉非替尼对皮生长因子受体的抑制性能。结果显示,吉非替尼可竞争性的抑制三磷酸腺苷与表皮生长因子受体的结合,从而影响三磷酸腺苷与表皮生长因子受体的结合量以及产物二磷酸腺苷的生成量。根据不同浓度吉非替尼下三磷酸腺苷峰面积的变化计算了吉非替尼对表皮生长因子受体的抑制率。同时绘制了抑制曲线,得到IC50值为32.44±0.82μmol/L。实验表明该酶微反应器可实际用于酪氨酸激酶抑制剂的抑制率的快速测定。     

基于毛细管电泳的天然产物中酶抑制剂筛选研究进展

人类疾病的发生往往与体内各种酶的功能失调密切相关,因此酶一直是目前新药研发的重要靶标。天然产物是发现新药的宝贵资源,但是由于成分复杂,活性筛选一直受制于耗时费力的分离纯化过程。毛细管电泳（CE）技术由于具有样品和试剂消耗少、灵活多样的分离模式且不受样品基质干扰的特点,可以直接从粗提物开始筛选活性成分,在复杂样品活性筛选中显示出独特的优势。该文综述了近十年来CE在天然产物中酶抑制剂筛选的研究进展。其中重点介绍了CE应用于重要药物靶标,包括转移酶（激酶）、水解酶以及氧化还原酶等方面的应用,总结了用于酶抑制剂筛选的电泳分离模式和酶动力学研究,并展望了CE用于天然产物中活性成分筛选的应用前景。     

二氢叶酸还原酶抑制剂的高效毛细管电泳法筛选模型的建立与应用

建立了一种采用毛细管电泳法(CE)测定二氢叶酸还原酶(DHFR)反应动力学参数的新方法。以含0.002%Brij-35的50 mmol/L 的硼砂缓冲溶液（pH 9.18）作为电泳介质,检测波长280 nm,于19 min内实现了体系中各组分的基线分离。根据酶反应过程中反应物和反应产物的浓度变化计算有关反应动力学参数。将已知的氨甲喋呤、甲氧苄胺嘧啶和叶酸3种抑制剂作用于所建立的二氢叶酸还原酶体系,测得抑制剂的半数抑制浓度与文献值相接近,证明本体系可用于二氢叶酸还原酶抑制剂(DHFRI)的筛选。     

用高效毛细管电泳测定二(2'-脱氧-2'-氟)嘧啶核糖核苷酸对蛇毒磷酸二酯酶的稳定性

本文报道用高效毛细管电泳测定蛇毒磷酸二酯酶催化的二(2'-脱氧-2'-氟)嘧啶核糖核苷酸的水解速度。高效毛细管电泳用于这个目的有分辨率高、样品需要量'、使用不含有机溶剂的缓冲液和操作方便等优点。用来测定具有中等反应速度的反应是很方便的。     

用高效毛细管电泳测定二(2'-脱氧-2'-氟)嘧啶核糖核苷酸对蛇毒磷酸二酯酶的稳定性

本文报道用高效毛细管电泳测定蛇毒磷酸二酯酶催化的二(2'-脱氧-2'-氟)嘧啶核糖核苷酸的水解速度。高效毛细管电泳用于这个目的有分辨率高、样品需要量'、使用不含有机溶剂的缓冲液和操作方便等优点。用来测定具有中等反应速度的反应是很方便的。     

微流控芯片毛细管电泳在蛋白质分离分析中的应用研究进展

重点介绍了近年来国内外在微流控芯片毛细管电泳法用于蛋白质分离分析方面的研究进展。按照分离模式的不同,综述了各种应用于蛋白质分离的微流控芯片毛细管电泳系统,讨论了抑制芯片中的蛋白吸附的各种方法,并展望了芯片毛细管电泳系统在蛋白质分离领域的发展前景。引用文献47篇。     

芯片毛细管电泳中组分的迁移行为及其特征

在自组装的芯片毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置上,以单个染料和一组荧光素异硫氰酸酯(FITC)标记的氨基酸为对象,研究了芯片毛细管电泳与传统毛细管电泳之间的差别,考察了玻璃芯片上微通道内的伏安特性以及抑制电压、进样方式和检测点的位置等对芯片毛细管电泳分离分析的影响,特别注意到了其有别于传统毛细管电泳的各种行为特征.     

Determination of the mechanism of the oxidation of the trichloromethyl radical by the photolysis of chloral in the presence of oxygen

The photooxidation of chloral was studied by infrared spectroscopy under steady-state conditions with irradiation of a blackblue fluorescent lamp (300 nm < λ < 400 nm, λ_max = 360 nm) at 296 ± 2 K. The products were hydrogen chloride, carbon monoxide, carbon dioxide, and phosgen. The kinetic results reveal that the reaction proceeds via chain reaction of the Cl atom: The results lead to the conclusion that mechanism (B) is confirmed to be more likely than mechanism (A), which was favored at one time by Heicklen for the mechanism of the oxidation of trichloromethyl radicals by oxygen molecules: The ratio of the initial rates of CO and CO₂ formation gave k₇/k₆ = 4.23M^?1, and the lower limit of reaction (5) was found to be 3.7 × 10⁸M^?1 sec^?1.     

Investigation of the influence of the polarity of the solvent on the composition of the extractive substances and post-extraction residues of the bark ofAbies sibirica

The chemical compositions of the initial bark of the Siberian firAbies sibirica and of the solid residues after extraction with carbon dioxide, water, and alcohol have been studied. On successive extraction, the yield of extractive substances amounted to 25.05% of the absolutely dry bark. The carbon dioxide, aqueous, and alcoholic extracts obtained have been investigated. The carbon dioxide extract was found to contain 34.97% of essential oil, while only traces of it were detected in the aqueous and alcoholic extracts.Krasnoyarsk State Technological Academy. Translated from Khimiya Prirodnykh Soedinenii, No. 1, pp. 42–45, January–February, 1996. Original article submitted August 14, 1995.     

Determination of the c-terminal amino acid residues of the proteins of the hormones of the hypophysis

Chemistry of Natural Compounds -