用于疫苗输送的功能化磷酸钙纳米载体的制备

利用高碘酸钠(NaIO_4)氧化甘露聚糖(mannan,MN)得到了多醛基氧化甘露聚糖,再以帕米膦酸二钠(Pa)修饰,获得带有双磷酸根的甘露聚糖(Pa-MN).以此产物为基础,利用双磷酸根与钙离子的特异亲和作用通过共沉淀法制备了功能化磷酸钙(CAP)纳米粒,并研究了该纳米粒作为模型抗原鸡卵清蛋白(OVA)佐剂的免疫刺激效果.采用核磁共振、元素分析技术证明甘露聚糖被成功修饰.与伴刀豆球蛋白A(ConA)的特异性结合实验表明,合适的修饰度可保持甘露聚糖结构的完整性.通过动态光散射(DLS)粒度仪、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)表征发现,该功能化纳米粒平均粒径为130.4±1.9 nm,且分散性良好.Elisa实验测定血清中抗OVA的IgG水平,结果表明该功能化纳米粒具有良好的免疫刺激效果.     

2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物自由基选择性氧化反应用于羟丙基化半乳甘露聚糖C-6位取代度的表征研究

TEMPO (2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物自由基)-NaClO-NaBr是一种对伯羟基具有很高选择性的氧化反应体系, 系统研究了该体系对半乳甘露聚糖及其衍生物的氧化反应过程, 通过对氧化反应中NaOH消耗量的适时跟踪测定, 确定了氧化反应进程以及氧化反应终点, 利用FTIR和13C NMR对氧化产物的结构进行了表征, 进一步确证了TEMPO氧化体系可高选择性地将C-6位伯羟基完全氧化为羧酸. 首次将TEMPO氧化法用于羟丙基化半乳甘露聚糖C-6位取代度的测定, 利用氧化反应NaOH的消耗量计算出不同摩尔取代度的羟丙基半乳甘露聚糖C-6位伯羟基的取代度. 以此为依据, 对半乳甘露聚糖的羟丙基化反应机理进行了初步探讨, 从实验上进一步验证了半乳甘露聚糖羟丙基取代反应优先发生在C-6位伯羟基上.     

气相色谱法分析蔗渣半纤维素的糖组成

用一根2米×4毫米螺旋形不锈钢色谱柱,分段装入3％XE—60和3％OS—138固定相,氮作载气,在半小时内可将鼠李糖、岩藻糖、来苏糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等糖腈乙酰酯分离开。4,4′—二异丙基联苯作内标,配制已知浓度的阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和内标的吡啶溶液,在不同反应条件下制备糖腈乙酰酯,测定各单糖糖腈乙酰酯对4,4′—二异丙基联苯的相对S′值,研究反应条件对糖腈乙酰酯得率的影响。定量分析了不同碱浓度抽提得的蔗渣半纤维素的糖组成,指出蔗渣半纤维素中除绝大部分为阿拉伯木聚糖外,尚有少许的阿拉伯半乳聚糖和葡萄甘露聚糖。     

甘露聚糖肽的结构鉴定

采用离子交换柱层析和凝胶柱层析从甘露聚糖肽原料中分离纯化得到4种均一糖肽MT1-A,MT1-B,MT2-A和MT2-B;通过单糖组成分析、甲基化分析、氢核磁共振谱(~1H NMR)、红外光谱(IR)和氨基酸组成分析等手段对均一糖肽MT1-A,MT1-B和MT2-B的结构进行了鉴定.结果表明,3种均一糖肽的单糖组成、糖残基的连接方式与MT2-A相同,但是分子量以及氨基酸总量有所不同.测定了不同批次甘露聚糖肽原料的~1H NMR谱,以MT2-A的~1H NMR谱图为标准谱,以异头氢区域为鉴定区域,通过计算不同批次甘露聚糖肽原料以及其它3种均一糖肽与MT2-A的~1H NMR谱的相关系数,定量评价了不同批次甘露聚糖肽原料与4种均一糖肽的相似程度.结果表明,甘露聚糖肽是由糖链结构一致、分子量和氨基酸含量不同的几种均一糖肽构成的混合物.     

聚合度3～6甲壳寡糖的制备与TOF-MS分析

本文用自制酸性蛋白酶粗酶液降解壳聚糖,研究了降解过程中温度、pH值、反应时间、酶用量及壳聚糖脱乙酰度(DD)对酶降解能力的影响。以85.5%脱乙酰度(DD)、分子量(Mw)为56.0×104的壳聚糖为底物,45℃、pH4.6降解数小时,降解产物由红外光谱、分子量测定(GPC)和基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)表征。主要降解产物的脱乙酰度有所降低;酶解8h,其水解产物用NaOH调至pH9无沉淀,9h分子量降为0.93×103,经MALDI TOF MS分析产物为聚合度3～6的甲壳寡糖,3～6糖中各糖含量分别为13.3%、27.3%、49.0%、10.1%。     

酵母来源甘露聚糖的提取纯化及其对水果保鲜

以市售酵母细胞壁为原料,考察不同提取工艺条件下酵母甘露聚糖的得率.结果表明,最佳提取条件为:料液比1∶60,115℃,浸提90 min,此时甘露聚糖最大得率可达到18.71%,影响因素的重要性依次为:料液比浸提温度浸提时间.对甘露聚糖进行初步纯化,结果显示Polar MC 60-Q型预装纯化柱的多糖损失率较低(38.21%),而蛋白去除率最高(90.97%),显示出较好的纯化效果.经初步纯化的甘露聚糖涂膜处理苹果显示出较好的抗褐变性能;保鲜剂组分为0.2%甘露聚糖、0.3%丙酸钙、0.3%抗坏血酸时,对葡萄进行涂膜处理,测得五日失重率为3.95%,较对照组降低19.70%,五日好果率77.78%,该配方保鲜效果明显优于其他测试组.     

乙酰解方法测定痕量糖链中α1→6联接的分枝点

乙酰解能使糖链中的α1→6联接键优先断离, 本文报道糖链的还原端接上对氨基苯甲酸乙酯(ABEE)后, 应用HPLC分离部分乙酰解的复杂断离产物, 正离子LSIMS测定它们的分子量并判断α1→6联接点。异麦芽八糖α1→6联结序列的测定证实改进后的乙酰解方法能获得满意的结果。此外还测定了μmol IgM样品中寡糖链的两个分枝点。     

以苯硼酸为识别物质的电化学阻抗糖传感器的制备

以苯硼酸为识别物质,利用巯基自组装法将半胱胺与4-甲酰基苯硼酸反应形成的Schiff’s碱固定于金电极表面,构建了检测葡萄糖、乳糖、甘露聚糖的电化学阻抗传感器。根据传感器结合糖前后电子转移阻抗值的变化(ΔR et),分别进行了葡萄糖、乳糖、甘露聚糖的分析测定。以pH 9.0的5 mmol/L K3[Fe(CN)6]-5 mmol/L K4[Fe(CN)6]平衡电对溶液作为检测溶液,ΔR et与葡萄糖的浓度在5.05×10#9~5.05×10#5mol/L之间呈良好的线性关系,检出限为9.7×10#10mol/L(S/N=3);ΔR et与乳糖的浓度在2.78×10#9~2.78×10#5mol/L之间呈良好的线性关系,检出限为8.1×10#10mol/L(S/N=3);ΔR et与甘露聚糖的浓度在4.35×10#9~4.35×10#5mol/L之间呈良好的线性关系,检出限为3.4×10#10mol/L(S/N=3)。该方法简单、灵敏、成本低,可用于不同种类糖的分析检测。     

苧麻果胶及半纤维素糖基组成的研究

苧麻用草酸铵抽提果胶,用氢氧化钾和氢氧化钠抽提半纤维素。果胶和半纤维素水解成单糖,再制备成糖腈乙酰酯和二硫缩醛硅烷化衍生物,作气相色谱分析,研究其糖基组成。实验结果表明,苧麻果胶糖基以半乳糖醛酸及半乳糖醛酸甲酯为主,其次为鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖,还有少量的岩藻糖、葡萄糖和木糖等。苧麻半纤维素中存在着葡萄甘露聚糖和鼠李半乳糖醛酸聚糖等多糖,前者糖基组成以葡萄糖和甘露糖为主,后者则以鼠李糖、半乳糖及半乳糖醛酸为主,它与果胶的糖基组成相似,但中性糖基占主要成份,用草酸铵难以将其抽出,用碱抽提则比葡萄甘露聚糖容易。     

利用β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶快速酶切分析中国仓鼠卵巢细胞表达的西妥昔单抗抗原结合区的聚糖比例

西妥昔单抗具有较复杂的糖基化修饰,在抗原结合片段(Fab)和可结晶片段(Fc)的重链上都含有2个N-糖基化位点,其中Fab段的糖基化最为复杂,要研究清楚该位点的糖基化修饰,开发专一性切糖技术和稳定的聚糖比例分析方法是当前迫切需要解决的难题。以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达的西妥昔单抗为研究对象,使用β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(Endo F2)开发了一种快速Fab段聚糖释放的方法,利用超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)进行了定性和聚糖比例分析。第一步对抗体原液进行非变性酶切,抗体原液经超纯水稀释后,加入糖苷酶Endo F2进行酶切,通过质谱对质量数的解析,结果表明Endo F2酶切时间5 min, Fab段的聚糖就能完全切除,而Fc段的聚糖不受影响,实现了快速酶切,而且切糖具有很好的专一性。第二步对Fab段聚糖进行比例分析,将释放的聚糖经对氨基苯甲酰胺(2-AB)荧光标记后使用超高效液相色谱联用荧光检测器(FLR)进行检测,在亲水作用色谱(HILIC)柱上得到良好的分离并可以进行稳定地聚糖比例分析。3次独立试验结果表明,酶切后的质谱图基本一致,且聚糖的比例结果也基本一致,表明Endo F2酶切方法和聚糖比例分析方法都具有较好的稳定性和可靠性。此外,通过测定来自两个不同工艺生产的样品,数据显示两者的糖谱上具有非常明显的差异,表明利用开发的方法可以实现对抗体生产工艺进行监测研究,对抗体生产工艺的评估具有非常重要的意义。     

水溶性超高效聚合物色谱法测定木质素磺酸盐分级分离产物的相对分子质量分布

以木质素磺酸盐及其超滤分级分离产物为研究对象,系统考察了流动相pH值、离子强度等测试条件对超高效聚合物色谱（APC）法分析水溶性天然高分子相对分子质量的影响,并重点探讨了影响分析结果的非体积排阻效应。以pH6.8的0.1 mol/L NaNO₃水溶液为流动相,采用3根Waters水溶性色谱柱串联,进样量为10 μ L,流速为0.5 mL/min,木质素磺酸盐在色谱柱中获得了精细分离,其相对分子质量分布在8个相对分子质量区间。采用优化获得的测试条件表征木质素磺酸盐的超滤分级分离产物,测试结果表明,超滤法分离的3个组分实现了很好的色谱分离,对应的数均相对分子质量（M_n）分别为40410、12208和1516 Da,证明超滤法对木质素磺酸盐实现了高效分离。该方法为木质素磺酸盐分级分离产物的进一步应用提供了测试基础。     

Characterization of synthetic polyelectrolytes by capillary electrophoresis

Capillary electrophoresis in entangled polymer solutions was applied to determine the molecular mass and polydispersity of polyelectrolytes. The separation selectivities of different polyethylene glycols as buffer additive can be correlated to their average molecular mass. A universal curve correlating the selectivity and the molecular mass could be obtained by using the instrinsic viscosity of the polyethylene glycol. The separation of poly(2-vinylpyridine) standards was compared to the separation of poly(4-vinylpyridine) standards. An indirect detection system was developed to characterize the cationic polyelectrolyte polydiallyldimethyl ammonium chloride. Various polymers with oppositely charged groups (polycarboxybetaines) were investigated with respect to structure dependence, pH dependence and molecular mass dependence of interand intramolecular association.     

利用物质磁化率和磁导率性质定性分析不同相对分子质量的大分子聚丙烯酰胺

介绍了一项正在研发中的创新分析技术“电磁感应式磁化率化学定性分析方法”的原理和装置结构。采用该技术定性分析不同相对分子质量的大分子-聚丙烯酰胺样品,并对实验数据进行了分析讨论。该技术利用不同单组分样品磁化率、磁导率性质不同的原理,采用电磁感应电动势方法检测样品在磁场中所产生的附加磁场变量强度,以进行定性分析。实验结果说明,磁化率定性分析技术可以分析800万相对分子质量以下的大分子-聚丙烯酰胺样品。     

红收获蚁杜氏腺体细胞壁成分的气相色谱/质谱鉴定

用气相色谱/质谱联用技术对红收获蚁Pogonomyrmex barbatus和Pogonomyrmex maricopa的杜氏腺体(Dufour gland)细胞壁的化学成分进行了鉴定。结果表明：其杜氏腺体的主要成分是烃类化合物。根据红收获蚁Dufour腺体的气相色谱，质谱的谱图，讨论了生物种属的气相色谱/质谱化学分类的可能性。研究表明：同一物种的生物体给出的图谱有一一对应的直观样式，生物组织化学成分的鉴定是生物化学分类的关键，相对峰高或峰面积百分含量不易表征图谱样式。     

Isoelectric focusing nonporous silica reversed-phase high-performance liquid chromatography/electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry: a three-dimensional liquid-phase protein separation method as applied to the human erythroleukemia cell-line

A liquid-phase three-dimensional protein separation method has been developed that is used to separate the cytosolic fraction of a HEL cell lysate via isoelectric focusing (IEF), nonporous silica (NPS) reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry (ESI-TOFMS), respectively. Several hundred unique protein molecular weights were observed in a pI range from 4.8 to 8.5 and a mass range from 5 to 85 kDa. Proteins were positively identified by analysis of the pI (+/-0.5 pI units), an intact protein molecular weight (+/-150 ppm), and peptide mass mapping results. Using the molecular weight (MW) and peptide mapping results of identified proteins it was possible to characterize their posttranslational (PTMs) and/or sequence modifications. PTMs were detected on both forms of cytosolic actin, heat shock 90 beta, HINT and alpha-enolase. Sequence modifications or conflicts were observed for beta-and gamma-actin, ATP beta-synthase and heat shock 90 beta. IEF-NPS-RP-HPLC/ESI-TOFMS was used to determine experimental pI, MW and relative hydrophobicity values for each protein detected. This data was used to generate a 2-D pI-MS protein map, where proteins are displayed according to their pI and molecular weight. Protein molecular weight peaks are represented as bands in the 2-D pI-MS image where the gray scale of each band is proportional to the intensity of the protein molecular weight peak. In addition, a third hydrophobicity dimension (%B) was added as the % acetonitrile elution to generate a 3-D pI-MS-%B plot where each protein can be tagged according to three parameters.     

高效液相色谱–质谱法分析僵蚕蛋白酶解多肽

分析僵蚕蛋白酶解多肽类成分的相对分子质量和氨基酸组成。采用高效液相色谱–质谱联用正离子模式进行分析,以Hola C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm)为分离色谱柱,以0.05%甲酸水溶液和0.05%甲酸–乙腈溶液为流动相,根据质谱一级、二级碎片离子信息,确定酶解多肽类相对分子质量信息和氨基酸组成。僵蚕样品经酶解后得到相对分子质量在500~1 000之间的多肽,经LC–MS分析,多肽由低于10个的氨基酸组成。高效液相色谱–质谱法分析平台可用于分析多肽化合物的相对分子质量和氨基酸组成,这有利于酶解多肽的生物活性分析。     

碱性离子液体催化金属调节的甲基丙烯酸甲酯的电子转移活化原子转移自由基聚合

通过电子转移活化原子转移自由基聚合（AGET ATRP）,以2-溴代异丁酸乙酯（EBiB）为引发剂、维生素C（VC）为还原剂。 以碱性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氢氧化盐([Bmim][OH])分别和FeCl3·6H2O、CuCl2及RuCl3形成的配合物为催化剂催化甲基丙烯酸甲酯（MMA）的本体和溶液聚合。 催化量的[Bmim][OH]即可提高聚合速率,并且得到相对分子质量分布可控的PMMA（Mw/Mn为1.20～1.40）。 研究了[Bmim][OH]的加入量对聚合速率和相对分子质量分布的影响,3种催化体系催化性质通过循环伏安曲线表征。 扩链反应证明了碱性离子液体催化甲基丙烯酸甲酯的聚合为“活性”/可控自由基聚合。 碱性离子液体良好的溶解性使其成为活性自由基聚合的良好催化剂。     

凝胶渗透色谱用聚丙烯酸标样的制备

以二氧六环为良溶剂,石油醚为沉淀剂,通过等温沉淀分级,制得8种不同分子量的聚丙烯酸标样。 采用渐近校正法测定了它们的峰值分子量和分子量分布,建立了GPC校正曲线,并将其用于聚丙烯酸试样的测定。 结果表明,由渐进校正法测得的粘均分子量与粘度法测得的分子量之间的平均相对误差为7%,由渐进校正法测得的数均分子量与端基滴定法测得分子量之间的平均相对误差为9%。 将上述标样用于实际聚丙烯酸试样的测定,测得试样的粘均分子量与粘度法测定结果之间平均相对误差小于10%,优于以聚乙二醇为标样测定的平均相对误差（30%左右）。 本标样可用于具有与聚丙烯酸相似结构的阴离子聚电解质分子量分布的测定。     

Hydrophobic interaction chromatography for the purification of a mycobacterial heat shock protein of relative molecular mass 60,000.

A recombinant mycobacterial heat shock protein of relative molecular mass 60,000 was purified by hydrophobic interaction chromatography. Chromatographic media with ligands of medium hydrophobicity, such as phenyl-Sepharose, bound too strongly to be used for the purification of this heat shock protein. Butyl-Sepharose, with weak hydrophobicity, allowed binding and elution with decreasing concentrations of ammonium sulphate, but only alkyl-Superose allowed the separation of two similar proteins from the Escherichia coli clone expressing the recombinant heat shock protein (relative molecular mass 60,000) of Mycobacterium bovis BCG. The binding parameters of recombinant human heat shock proteins of relative molecular mass 60,000 and 70,000 indicate that phenyl-Sepharose also binds too strongly for the separation of these two heat shock proteins.     

Sequential ultrasonic extraction of a Chinese coal and characterization of nitrogen‐containing compounds in the extracts using high‐performance liquid chromatography with mass spectrometry

Dongming lignite was sequentially extracted with petroleum ether, carbon disulfide, methanol, acetone, and isometric carbon disulfide/acetone mixed solvent at room temperature to afford extracts 1–5, respectively. High‐performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization time‐of‐flight mass spectrometry was used to separate and characterize heteroatomic species in the extracts at molecular level. Molecular mass of compounds in the extracts is mainly distributed from 300 to 800 u, and the relative abundance of compounds with molecular mass over 800 u in the carbon disulfide extract is 135 times of that in the petroleum ether extract. The acetone extract has the highest relative abundance for organonitrogen compounds. Double bond equivalence numbers of detected species indicate that most of the organonitrogen compounds contain N‐heterocyclic aromatic rings, including pyridine, quinoline and pyrrole. Some organonitrogen isomers in Dongming lignite were separated and identified by high‐performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization time‐of‐flight mass spectrometry, and the corresponding structural information was proposed.