液相色谱-大气压化学电离质谱法分析人参中的人参皂甙

研究了用反相高效液相色谱-大气压化学电离质谱(HPLC/APCI-MS)分析人参皂甙的方法。液相色谱采用乙腈-水流动相进行梯度洗脱,质谱采用正负离子同时扫描并结合二级质谱进行定性,用选择反应离子模式(SRM)测定检测限。实验发现虽然人参皂甙是热不稳定物质,但在大气压化学电离质谱的高温汽化过程中仍能检测到很强的负离子分子离子峰,而且随着汽化温度的升高,人参皂甙的负离子分子离子峰的强度增加。该方法对人参皂甙Rb1和Rg1的检测限分别为1.2×10-13 g和3.0×10-14 g,并检测出白参中包括丙二酰人参皂甙在内的29种人参皂甙。该法灵敏度高,重复性好,结果准确,能有效地对药材提取物中的多种人参皂甙进行检测和结构分析。     

高效液相色谱-二极管阵列检测/质谱法分析生脉饮煎剂中的人参皂甙类成分

采用高效液相色谱-二极管阵列检测/质谱（HPLC-DAD/MS）联用技术,以10 mmol/L醋酸铵和乙腈混合溶液梯度洗脱 系统为流动相,应用C18色谱柱对生脉饮煎剂中人参皂甙类成分进行分离鉴定。分析结果表明:生脉饮煎剂中主要含有17个 人参皂甙类成分,即20(R)-人参皂甙Rh1、Rh2、Rg3、Rg2,20(S)-人参皂甙Rh1、Rh2、Rg3、Rg2,人参皂甙Rf、Rg6、Rg5 、F4、Rk1、Rk3、Rh4,20(S)-和20(R)-原人参三醇。人参皂甙成分在煎煮过程中发生了很大变化,主要变成了一些中低 极性产物,这是因为煎煮过程中发生了水解、差向异构、脱水等反应。该方法简便、精确、灵敏度高,可以用来分析生脉 饮煎剂中人参皂甙的变化。     

胶束电动毛细管色谱法同时测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1

建立了西洋参中人参皂苷Rg1、Re及Rb1同时分离测定的胶束电动毛细管色谱新方法,以解决西洋参样品中难溶于水的3种人参皂苷的准确定量问题。以40.2 cm(有效长度30 cm)×50 μm的熔融石英毛细管柱为分离柱,分离缓冲液的组成为V(15 mmol/L Na2B4O7+30 mmol/L H3BO3 (pH 9.0)+100 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)+30 g/L聚乙二醇35000):V(甲醇):V(异丙醇)=2:1:1,于214 nm下检测。详细研究了影响分离的因素。Rg1、Re及Rb1检出限(信噪比(S/N)为3)分别为30、40及30 mg/L,定量限(S/N=9)分别为90、120及90 mg/L,加标回收率为87.4%～95.2%。用该法测定了西洋参标准物质,并与高效液相色谱法的检测结果进行了比对,结果吻合。应用该方法分别测定了中国、加拿大及美国的西洋参,获得满意的结果。     

高效液相色谱质谱质谱法分析人参皂甙

 以反相高效液相色谱法分离了 9种人参皂甙。操作条件为乙腈 水梯度洗脱 ,二极管阵列检测器检测并在2 0 2nm下提取色谱图。利用三级四极杆质谱研究了 9种人参皂甙的一级质谱 (主要给出相对分子质量信息 )和二级质谱 (提供碎片结构信息 )。通过它们质谱图的差异对其进行了鉴别 ,并将方法用于实际样品中的 9种人参皂甙的定性。     

HPLC-ELSD测定茜芷胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的含量

利用HPLC-ELSD对茜芷胶囊中的活性成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的含量进行测定.三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1分别在0.13~2.60、0.30~6.00、0.38~7.60μg范围内呈现良好的线性关系,平均回收率分别为98.0%(RSD1.7%),97.1%(RSD1.8%),97.0%(RSD1.5%).该方法简便、准确、重现性好,可用于茜芷胶囊的质量控制.     

人参皂甙的反相高效液相色谱多台阶梯度优化方法

建立了一种反相高效液相色谱多台阶梯度分离人参皂甙的方法.该方法以乙腈-水溶液为流动相,通过一系列等度实验,获得了8种人参皂甙Rg1,Re,Rf,Rg2,Rb1,Rc,Rb2和Rd的色谱保留参数,发现两参数保留方程不适合用于人参皂甙这种天然产物的分离条件的优化,而三参数保留方程的高精度才可满足预测的要求.在三参数保留方程的基础上,通过计算确定了8种人参皂甙(包括3台阶梯度)的液相色谱分离条件.通过实验对此优化条件进行了验证,实验结果显示了较好的预测精度和分离度.将本方法用于分离人参皂甙,分析时间短且分离度高,显示了等度台阶梯度优化方法对确定色谱分离条件的优越性.     

9种人参皂苷同时测定方法及在人参质量鉴别中的应用

建立可同时测定人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Re、Rb2、Rb3和Rd含量的反相高效液相色谱（RP—HPLC）方法。采用Agilent Zorbax SB-C18柱,以乙腈-水-0．05％磷酸为流动相,流速1．5mlMmin,柱温35℃,检测波长203nm。在此色谱条件下,各组分在60min内均得到较好分离,回收率符合含量测定要求。运用该方法对不同产地人参进行含量测定,道地药材主根中9种人参皂苷总含量为1．19—1．45％,须根为5．47—6．90％,3个非道地药材主根分别为1．03％、1．04％、1．85％。聚类分析结果表明,根据测定的9种皂苷含量能准确区分人参的主根与须根,并判断其道地性。     

基于HPLC-HRMS/MS~n/QqQ技术的人参皂苷Rb_1化学转化产物的结构与途径分析

利用液相色谱-质谱联用技术分析了Keggin型12-磷钨酸化学转化人参皂苷Rb1产物的结构与转化途径.基于高效液相色谱对转化产物的快速分离,利用Q Exactive高分辨质谱的Full MS-AIF模式快速鉴定了产物结构,并利用多级串联质谱进行结构验证.进一步结合人参皂苷异构体在反向C18色谱柱上的相对保留时间,快速分析鉴定出Rb1的10种转化产物为20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,20(S)-25-OH-Rg3,20(R)-25-OH-Rg3,25-OH-Rk1,25-OH-Rg5,Rg5,Rk1,(20S,25)-环氧-Rg3和(20R,25)-环氧-Rg3.根据转化产物的结构初步推断了人参皂苷的转化途径:在12-磷钨酸产生的酸性环境中,Rb1主要通过C20位去糖基化、差向异构化和烯烃链的水合、消除及环合反应转化为稀有皂苷.采用三重四极杆质谱的选择反应监测模式准确定量分析了Rb1的转化效率和稀有皂苷20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,Rk1和Rg5的产率.定量分析结果显示,与生物转化相比,12-磷钨酸对Rb1有更高的转化效率,反应40 min后转化率达到100%.本文结果表明,HPLC-HRMS/MSn/Qq Q技术是人参皂苷等天然产物结构解析与定量分析的有效方法.     

液质联用技术研究人参与干姜或赤芍配伍前后人参皂苷及其抗氧化活性的变化

采用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS),对不同质量比的人参与干姜或赤芍配伍过程中人参皂苷的变化进行了研究,发现随加入的干姜量增加,共煎液中的人参皂苷含量依次降低;少量的赤芍可以使各皂苷的溶出量增加;同时测定了人参单煎液、人参与干姜、赤芍共煎液中正丁醇提取物和水提物的抗氧化活性。 以抗坏血酸(500 μmol/L)作对照,人参与干姜、赤芍配伍溶液的抗氧化活性比人参单煎液要好,同时人参与干姜、赤芍共煎液中正丁醇提取物的FRAP(铁离子还原/抗氧化能力测定)值分别为1562.29和2969.78 μmol/L,高于人参与2种药单煎液（1260.27和2502.07 μmol/L）之和。     

反相高效液相色谱法测定人参皂甙Compound-K的含量

人参皂甙compound-K(C-K)在人参中的含量极低,但它是其他含量较高的人参皂甙Rb1和Rb2等在人体肠道内的主要 降解产物和最终吸收形式,具有很高的生物活性。采用反相高效液相色谱法测定了人参总皂甙发酵液中C-K的含量。色谱 条件为:反相C18柱;乙腈-水(体积比为48∶52)溶液为流动相,流速1.0 mL/min;紫外检测波长203 nm;柱温35 ℃;外标法 定量。结果表明:C-K的质量浓度为0.05~0.8 g/L时,其峰面积与质量浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9998。方法 的检测限(S/N=3)为2.5 mg/L,峰面积测定值的相对标准偏差(n=6)为2.20%。测定栽培人参总皂甙及三七茎叶总皂甙微生 物发酵液中C-K的平均加标回收率(n=3)分别为98.6%和99.7%。该方法快速简便,准确可靠,可用于C-K的制备研究及药物 开发。     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法检测保健食品中9种人参皂苷

建立了以固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时检测保健食品中9种原人参二醇型和原人参三醇型人参皂苷的方法。保健食品中人参皂苷经过提取后,通过Alumina-N/XAD-2 SPE柱净化,在Hypersil Gold C18色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9 μm)上分离,利用乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用负离子扫描,多反应监测模式测定,外标法定量。研究通过对不同填料的固相萃取小柱的考察,最终选择了Alumina-N/XAD-2复合填料,其能对保健食品复杂基质中的人参皂苷进行有效富集和净化;通过考察人参皂苷的电离裂解过程,确定人参皂苷一级质谱准分子离子和相应的碎片离子,并经过色谱条件的优化,使质谱条件下一级质谱准分子离子和相应的碎片离子均一致的3种原人参二醇型人参皂苷Rb2、Rb3、Rc同分异构体实现完全分离。结果表明,9种人参皂苷在0.005~0.5 μg/mL范围内具有很好的线性关系,相关系数均大于0.9950。方法的加标回收率为81.1%~114.2%,相对标准偏差为0.4%~8.0%。所建立的方法采用XAD-2大孔吸附树脂和中性氧化铝的复合固相萃取材料,保健食品经过简单提取可直接作为固相萃取的上样溶液进行人参皂苷的富集和净化,通过超高效液相色谱-串联质谱不仅缩短了分析时间,也能对复杂基质样品中含量相对较低的人参皂苷进行准确定性和定量。该方法通量高,简单快速,重复性好,适用于保健食品中9种人参皂苷的定性和定量分析。     

A method for the analysis of ginsenosides, malonyl ginsenosides, and hydrolyzed ginsenosides using high-performance liquid chromatography with ultraviolet and positive mode electrospray ionization mass spectrometric detection

A high-performance liquid chromatographic separation coupled to diode array absorbance and positive mode electrospray mass spectrometric detection has been developed for the analysis of ginsenosides, malonyl ginsenosides, and hydrolyzed ginsenosides in extracts of Asian ginseng (Panax ginseng) and American ginseng (P. quinquefolius). The method is capable of separating, identifying, and quantifying the predominant ginsenosides found in heated alcoholic extracts of Asian and American ginseng roots routinely sold as nutraceuticals. It also separates and identifies the malonyl ginsenosides often found in cold alcoholic extracts of ginseng root and has the potential to quantify these compounds if pure standards are available. Furthermore, it can separate and identify ginsenoside hydrolysis products such as those readily produced in situations mimicking gastric situations, including those used for dissolution studies (i.e., 0.1 N HCl, 37 degrees C).     

亲水作用液相色谱脱除人参提取物中农药残留

亲水作用液相色谱法(HILIC)是一种用于改善强极性物质的保留和分离选择性的方法,广泛应用于药物分析、代谢组学、蛋白质组学等领域。该文利用农药分子与皂苷成分在HILIC上的保留行为差异,开发了一种农药残留脱除方法。以市售高纯人参提取物为例,该文评价了农药分子和人参皂苷在亲水色谱柱上的保留行为,并考察了上样量、淋洗体积、上样体积等因素对农残脱除效果的影响。实验结果证明:7种人参皂苷由于糖链上的羟基与亲水色谱固定相上的羧基形成氢键作用而具有较强保留,而农药分子由于亲水性较差且相对分子质量较小,保留很弱,从而一步实现了7种人参皂苷的富集与14种农残的脱除。在优化所得的最佳脱除工艺条件下,最终制备得到的人参总皂苷样品中,总皂苷的含量由59.87%提高到69.61%;总皂苷的回收率为94.4%;通过气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS/MS)对样品中的农残进行定量检测,发现原人参提取物中14种农残均得到了有效脱除,其中5种含量降至0.05 mg/kg以下,9种完全脱除。本研究是亲水色谱在中药提取物中农残脱除领域的应用,为天然产物的精制提供了一种新的技术手段,该技术对人参提取物中的农残脱除率高、人参总皂苷回收率高且安全、高效、无污染,为高品质人参提取物的研制提供了新的思路。     

Analysis of Low-polar Ginsenosides in Steamed Panax Ginseng at High-temperature by HPLC-ESI-MS/MS

A high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization-tandem mass spectrometry( HPLC-ESI-MS/MS) method was developed for the analysis and identification of ginsenosides in the extracts of raw Panax ginseng(RPG) and steamed Panax ginseng at high temperatures(SPGHT). A total of 25 ginsenosides were extracted include of which 10 low-polar ginsenosides, such as ginsenosides F4, Rk3, Rh4, 20S-Rg3, 20R-Rg3 and so on, were identified according to their HPLC retention time and MS/MS data. The results indicated that the low polar ginsenosides were seldom found in RPG. For the exploration of the transformation pattern of the ginsenosides in steam processing, the standards of ginsenosides Re, Rg1, Rb1, Rc, Rb2, Rb3 and Rd were selected and hydrolyzed at a temperature of 120 ℃. The results show that these polar ginsenosides can be converted to low-polar ginsenosides such as Rg2, Rg6, F4, Rk3 and Rg5 by hydrolyzing the sugar chains.     

支链聚乙烯亚胺辅助硼酸功能化磁性纳米粒子的制备及其用于人参皂苷的特异性富集

为了实现更高效的人参皂苷富集,以硼亲和色谱为核心,结合支链聚乙烯亚胺放大硼酸配基数量,合成了支链聚乙烯亚胺辅助硼酸功能化磁性纳米粒(PEI-BA-MNPs),用于实际样品中人参皂苷的选择性富集,结合高效液相色谱,建立了一种分析实际样品中的人参皂苷的方法。以人参皂苷Re为代表,在优化的磁性固相萃取的条件下,该方法在50~800 μg/L的范围内呈现良好的线性,线性相关系数(R²)为0.9681。添加水平在0.1~10 mg/L时,回收率为91.5%~117.3%,相对标准偏差为7.2%~13.4%。由于所得材料对于人参皂苷的高亲和力,经所建立的方法富集过后,人参皂苷Re的灵敏度提高了约50倍。同时,所得材料重复使用5次以后还可以保持至少72%的原始吸附量。最后,将该方法用于启脾口服液中人参皂苷Re的含量分析,并与2015版《中国药典》的标准方法做对比。结果显示,所建立的方法检测出的人参皂苷Re含量为0.27%,虽然与标准方法测得的含量(0.31%)有些微差距,但该法极大地节约了实际操作中样品前处理的步骤和时间。结果表明,所制得的PEI-BA-MNPs可以用作磁性固相萃取吸附剂实现实际样品中人参皂苷的选择性富集。该方法亲和力强,选择性好,灵敏度高,操作快速简便且准确度高,具有很大的应用价值和发展前景。     

HPLC-MS结合多元统计分析区分人参产地及筛选皂苷类标志物

利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术结合多元统计分析方法, 区分中国人参主产区5个不同产地的45个人参样本, 筛选出差异性皂苷类标志物. 根据人参总皂苷在反相C₁₈色谱柱中的洗脱顺序, 结合串联质谱分析和标准品比对, 在提取的人参总皂苷中鉴定出15种原人参三醇型、 24种原人参二醇型和2种齐墩果酸型共41种皂苷. 对人参总皂苷的HPLC-MS全扫描数据进行了多元统计分析. 正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)结果表明, 所建立的分析模型具有良好的数据描述能力和预测能力. 所有人参样本能够根据产地被区分, 并筛选得到同时区分5个产地的差异性皂苷类组分18种; 能够区分任意2个产地人参样本的差异性组分主要为在人参中含量较高的人参皂苷Rb1, Rg1, Re, Rc, Rd, Ro和m-Rb1等. 分层聚类分析(HCA)结果显示, 黑龙江和吉林两省的样本能够独自聚类, 但是绥化市的样本更接近于吉林省. 初步推断原因为绥化市地理位置较接近吉林省, 两地人参生长环境相似并可能存在种质资源交换.     

Determination of ginsenosides in Panax ginseng roots by liquid chromatography with evaporative light-scattering detection

A liquid chromatographic method was developed and validated for the determination of ginsenosides in Panax ginseng roots by using evaporative light-scattering detection. Eighteen ginsenosides were separated on a reversed-phase C18 column with water-ammonium acetate-acetonitrile as the mobile phase. The method is suitable for the routine determination of ginsenosides in P. ginseng roots and extracts. The validation of the method was comprehensive for efficiency and recovery optimization of the P. ginseng roots extraction, specificity by liquid chromatography/mass spectrometry, linearity, stability, reproducibility, repeatability, intermediate precision, and robustness.     

人参皂苷的基质辅助激光解吸质谱研究

利用MALDI-TOFMS测定了八种人参皂苷的分子量, 并分析了西洋参总皂苷的组成。同时, 进行了灵敏度实验, 并探讨了基质及碱金属离子的影响, 证明该方法灵敏度高, 重复性好, 结果准确。是测定极性小分子分子量的有效方法。