miR-130a和miR-125b在川崎病外周血细胞中的表达及意义

目的 通过检测miR-130a 和miR-125b 在伴或不伴冠脉扩张（CAD）川崎病（KD）患儿与正常健康儿童外周血单核细胞（PBMC）中的表达差异,探讨两者可否作为KD 和CAD诊断及预后评估的全新血清生物标志物。方法 利用基因芯片技术筛选出KD 患儿与正常健康儿童之前具有差异表达的miRNAs,通过生物信息学分析,确定候选基因。进一步选取KD 患儿30 例（伴或不伴CAD 各15 例）、正常健康儿童15 例,采用茎环RT-PCR 的方法,验证候选基因miR-130a 和miR-125b 在PBMC 中的表达情况。结果 （1）通过基因芯片技术,分析KD 患儿与正常健康儿童PBMC 中存在明显差异表达的miRNA 共63 条,经过生物信息学分析,确定候选基因;（2）通过茎环RT-PCR 验证发现miR-130a 和miR-125b 在患儿IVIG 治疗前表达明显下调,而IVIG治疗后表达明显上调（P＜0.05）;（3）伴CAD 的KD 患儿miR-130a 及miR-125b 表达较不伴CAD 明显升高,且呈正相关性（R2 =0.734,mir-130a;R2 =0.709,miR-125b）;（4）ROC 曲线分析表明miR-130a（特异度87.5%和敏感度77.5%）和miR-125b（特异度83.3%和敏感度76.6%）对KD 及CAD 的判断有较高的特异度和敏感度。结论 PBMC 中的miR-130a 和miR-125b 参与了KD的发生与发展,可作为KD 及CAD诊断及预后评估的一项全新血清生物标志物,并为KD冠脉扩张的防治提供新的思路。     

长链非编码RNA UCA1 在胃癌组织中的表达及其效应分析

目的 分析胃癌组织特征长链非编码RNA（lncRNA）表达谱,并探讨长链非编码RNA UCA1 在胃癌中的表达及效 应。方法 采用基因芯片检测6 例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织LncRNA表达水平,分析胃癌组织特征lncRNA 表达谱,进一步通过定量PCR 检测40 例胃癌及其对应的癌旁正常组织中UCA1的表达并分析淋巴结转移、肿块大小、细胞分化程度及病理分期等临床病理特征的关系。在此基础上,利用siRNA 下调AGS 胃癌细胞内UCA1 表达水平,利用CCK-8 试剂盒检测UCA1干预对胃癌细胞增殖能力的影响。结果 LncRNA 基因芯片检测到胃癌组织1 021条差异＞2倍的lncRNA（P＜0.05）,定量PCR 验证明显差异表达的UCA1在胃癌组织中的表达显著高于正常组织（P＜0.01）。此外,临床病理相关分析显示,UCA1表达水平还与胃癌的细胞分化程度及病理分期相关。分化低的胃癌组织中UCA1表达水平明显高于中、高分化的胃癌组织（P＜0.05）;病理分期Ⅲ/Ⅳ期胃癌组织的UCA1 表达水平明显高于Ⅰ/Ⅱ期的标本（P＜0.05）。此外,下调UCA1 胃癌细胞表达可明显抑制细胞增殖。结论 异常表达的lncRNA 参与了胃癌的发生、发展,其中肿瘤组织上调表达的UCA1是胃癌重要的促癌基因。     

多梳基因Bmi-1 在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的 研究多梳基因Bmi-1 在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。方法 分别采用免疫组化法、Westernblot 法和RT-PCR 法检测30 例甲状腺乳头状癌组织、30 例结节性甲状腺肿组织及30 例正常甲状腺组织中多梳基因Bmi-1 及其mRNA 的表达情况,并分析Bmi-1与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系。结果 免疫组化法检测发现Bmi-1 在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率73.3%,与结节性甲状腺肿（36.7%）及与正常组织（16.7%）的阳性表达率相比差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot 法检测甲状腺乳头状癌中Bmi-1 表达量与结节性甲状腺肿组织及正常组织相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR法检测甲状腺乳头状癌中Bmi-1mRNA 表达量与结节性甲状腺肿组织及正常组织相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。Bmi-1 阳性表达在甲状腺乳头状癌有无淋巴结转移中的差异有统计学意义（P＜0.05）,在年龄、性别、肿瘤大小、分期等差异无统计学意义。结论 Bmi-1 在甲状腺乳头状癌中表达升高,可能在甲状腺乳头状癌的发生、发展过程中起重要作用,并可望作为甲状腺乳头状癌临床诊断的标记物之一。     

c-Met蛋白在甲状腺癌中的表达及其临床病理意义

目的 检测c-Met 蛋白在甲状腺癌及癌旁甲状腺组织中的表达,并分析c-Met 蛋白表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学En Vision二步法检测81 例甲状腺癌组织及52 例癌旁甲状腺组织中c-Met 蛋白的表达。结果 甲状腺癌和癌旁甲状腺组织中c-Met 蛋白阳性率分别为46.9%（38/81）和7.7%（4/52）,两者比较有统计学差异（P＜0.01）。其中甲状腺乳头状癌中c-Met 蛋白阳性率50.8%（31/61）,髓样癌中阳性率60.0%（3/5）,均高于滤泡癌26.7%（4/15）,但均无统计学差异（均P＞0.05）。甲状腺乳头状癌c-Met蛋白表达与患者各项临床病理特征均无相关性（均P＞0.05）。结论 甲状腺癌中c-Met 表达增强,其高表达可能与甲状腺癌发生相关,有望成为抗甲状腺癌治疗的一个潜在靶点。     

子宫内膜异位症中miR-143、miR-145和miR-126的差异表达

目的探索子宫内膜异位症（EMs）中miR-143、miR-145和miR-126的差异表达,以及不同月经周期的影响。方法利用realtimeRT-PCR技术,比较miR-143、miR-145和miR-126在EMs患者在位内膜（EU,2例）、异位内膜（EC,14例）、配对EU+EC（14例）,与非EMs患者内膜（EN,28例）中的表达差异;并分析EN和EC组不同月经周期对miR-143、miR-145和miR-126表达的影响。结果不同月经周期的影响分析,发现仅EN标本中miR-143增生期表达量高于分泌期,差异有统计学意义（P＜0.05）。与EN相比,miR-143和miR-145在EU中均表达上调（P＜0.05）,miR-143、miR-145和miR-126在EC中均表达上调（P＜0.01）。配对EU-EC中,miR-143、miR-145和miR-126在EC中均表达上调（P＜0.01）。结论miR-143、miR-145和miR-126在EMs中表达高于非EMs,在EC中表达高于EU。     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

柯萨奇-腺病毒受体在扩张型心肌病患者外周血白细胞表面的表达及意义

目的观察柯萨奇-腺病毒受体（CAR）在扩张型心肌病（DCM）患者外周血白细胞表面的表达及意义。方法选择DCM患者50例作为观察组,同期选择30例正常体检者作为对照组。入选后分别采用流式细胞术（FCM）检测外周血白细胞表面CAR表达水平;RT- PCR技术测定柯萨奇B组病毒-核糖核酸（CVB- RNA）表达;ELISA法检测CVB抗体效价。在客观比较病毒检测方法的同时,分析CAR在DCM患者中的表达及意义并探讨FCM在临床病原学检测中的价值。结果（1）经FCM技术检测,观察组外周血白细胞表面CAR表达水平较对照组升高（P＜0.01）,观察组CVB- RNA阳性22例（44.0%）,对照组阳性6例（20.0%）,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组CVB抗体阳性32例（64.0%）,对照组阳性10例（33.3%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）CVB- RNA阳性者中外周血白细胞表面CAR表达水平较阴性者明显升高（P＜0.01）;22例CVB- RNA阳性者中CVB抗体全部阳性,而28例CVB- RNA阴性患者中CVB抗体阳性者亦有16例。结论外周血白细胞表面CAR高表达的DCM患者可能存在病毒持续感染;FCM技术检测白细胞表面CAR表达水平可以作为DCM患者病毒感染的定量指标。     

肛周脓肿局部组织及外周血中IL-22 的表达及临床意义

目的 探讨细胞因子IL-22 在肛周脓肿局部组织及外周血中的表达和意义。方法 选取50例肛周脓肿患者（肛周 脓肿组）和50例无感染的混合痔患者（对照组）,两组患者均行手术治疗,并术中留取病变组织标本。术后观察患者转归,免疫组织化学法检测IL-22 表达、RT-PCR 法检测外周血单核细胞中IL-22 mRNA 的表达,观察IL-22 表达的变化及其与患者临床病理特征之间的关系。结果 IL-22在肛周脓肿组的表达阳性率高于对照组（P＜0.01）;肛周脓肿组根据不同转归分为治愈组、脓肿复发组、肛痿组,3 组患者IL-22 表达阳性率比较,治愈组显著降低,而肛瘘组最高（P＜0.01）。肛周脓肿组外周血单核细胞中IL-22 mRNA表达水平显著高于对照组（P＜0.01）;在肛周脓肿组中随着疾病的进展,肛瘘组患者外周血单核细胞中IL-22 mRNA表达水平显著高于治愈组（P＜0.01）。肛周脓肿组中IL-22的表达与患者性别、年龄均无关（均P ＞0.05）,而与脓肿直径（P＜0.01）、创面愈合时间（P＜0.05） 及进展为肛瘘有关（P＜0.05）。结论 IL-22在肛周脓肿局部组织及外周血中表达增强,在其发病机制中起了重要作用。     

硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响。方法以单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将54只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（UUO）组（B组）、U-UO+硒组（C组）,每组18只。C组给予亚硒酸钠0.2mg/（kg·d）灌胃。A、B组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃。术后第7、14、21天各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE、Masson染色评定肾间质纤维化程度,免疫组织化学半定量法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）的表达。Western印迹法检测肾组织CTGF蛋白表达。化学比色法检测肾组织氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH- Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达水平。结果术后各时点C组肾间质纤维化程度较B组明显减轻（P＜0.05）,肾组织CTGF和α- SMA的表达强度明显低于B组（P＜0.05或0.01）、GSH- Px和SOD水平明显高于B组（P＜0.05）,MDA含量明显低于B组（P＜0.05）。B组肾组织中CTGF、a- SMA表达量之间呈正相关（P＜0.05）,CTGF和a- SMA表达量与肾间质纤维化病变程度呈正相关（P＜0.05）。结论硒可以减轻UUO模型大鼠肾间质纤维化程度,其机制可能与硒的抗氧化作用、下调肾组织CTGF的表达、抑制肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分化有关。     

CT在腺瘤性结节性甲状腺肿和乳头状甲状腺癌鉴别诊断中的价值

目的探讨CT在腺瘤性结节性甲状腺肿（ANG）和乳头状甲状腺癌（PTC）鉴别诊断中的价值。方法搜集经病理证实的105例112枚ANG和181例196枚PTC的CT资料,对性别、年龄、瘤体的形态、甲状腺边缘中断征、钙化、强化程度、增强后边界、淋巴结转移进行分析,统计强化程度高于周围甲状腺对ANG的诊断和甲状腺边缘中断征对PTC的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、准确度。结果 ANG和PTC在瘤体形态、甲状腺边缘中断征、细钙化、粗钙化、强化程度、增强后瘤体边缘等方面均有统计学意义（均P＜0.05）,而在是否多发、环状钙化方面均无统计学差异（均P＞0.05）。181例PTC中,淋巴结转移75例。强化程度高于周围甲状腺对ANG诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、准确度分别为67.9%、100%、100%、87.6%。甲状腺边缘中断征对PTC诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、准确度分别为87.0%、91.1%、93.6%、88.6%。结论瘤体形态规则、强化程度高于周围甲状腺有助于ANG的诊断,而瘤体形态不规则、甲状腺边缘中断征、细钙化、粗钙化、淋巴结转移等有助于PTC的诊断;是否多发和环状钙化对ANG和PTC的鉴别诊断无意义。