缢蛏RAPD扩增条件的优化及遗传分析初报

对采自宁波市象山县三门湾沿海滩涂的缢蛏RAPD扩增条件进行了摸索和优化，反应体系为25μL时，缢蛏的RAPD扩增的最适条件为94℃预变性5min,94℃变性1min,37℃退火1min，72℃延伸1min，进行40个循环，然后72℃总延伸10min,Taq酶量为1.0u,dNTPs为300μmol/L，引物浓度为0.4μmol/L，DNA模板浓度为50ng,Mg^2 浓度为2.0mmol/L，对缢蛏DNA进行了初步的遗传分析。发现其遗传多样性比较丰富。     

乌骨鸡蛋清与普通鸡蛋清酶解物抗氧化活性

通过对DPPH法、水杨酸法、邻苯三酚自氧化法3种体外抗氧化活性分析方法的条件优化,分别比较了乌骨鸡蛋清和普通鸡蛋清在相同酶消化处理条件下获得的酶解产物的抗氧化活性,确定:DPPH与样品最适溶剂为40%乙醇溶液;水杨酸法反应体系各试剂最适终浓度分别为Fe2+离子(0.6 mmol·L-1),H2O2溶液(0.48 mmol·L-1),水杨酸溶液(1.2 mmol·L-1);邻苯三酚自氧化法反应体系各试剂最适条件为邻苯三酚终浓度(0.2 mmol·L-1),反应pH值（8.2）,反应温度（25℃）。结果表明:各样品DPPH自由基IC50依次为抗坏血酸(0.031μg·mL-1),乌骨鸡蛋清酶解产物(0.732 mg·mL-1)和普通鸡蛋清酶解产物(2.013 mg·mL-1);各样品羟自由基IC50依次为抗坏血酸(0.179 mg·mL-1),乌骨鸡蛋清酶解产物(1.986 mg·mL-1)和普通鸡蛋清酶解产物(5.158 mg·mL-1);各样品超氧阴离子自由基IC50依次为抗坏血酸(0.086 mg·mL-1),乌骨鸡蛋清酶解产物(3.825 mg·mL-1)和普通鸡蛋清酶解产物(10.557 mg·mL-1)。经同等酶解消化处理后,乌骨鸡蛋清相比普通鸡蛋清具有更强的体外抗氧化活性。     

钴-PAR-曙红离子缔合物显色反应机理研究及应用

本文研究了在聚乙烯醇—乳化剂OP混合增溶剂存在下,Co2 —PAR—曙红离子缔合物的显色反应,提出了一种测定Co2 的新方法,并将其反应用于悬构子中痕量钴的测定,离子缔合物的最大吸收波长为515 nm,摩尔吸光系数ε=8.5×104L/m o l.cm.在测定条件下,钴含量在0μg~20μg/25 mL范围内成线性关系,符合比耳定律.     

依文思蓝-溴酸钾催化体系测定亚硝酸根

本文研究了亚硝酸根的一个新指示反应。在稀磷酸溶液中,依文思蓝-溴酸钾的氧化还原反应受亚硝酸盐催化使依文思蓝褪色。测定灵敏度为7.8×10-11g/mL亚硝酸态氮[当lg（Ao/A）=0.001 b=l cm)。测定范围0—3.5μg NO2/25mL,相对标准偏差1.64%。已用于测定自来水和唾液中的NO2-。     

双齿围沙蚕遗传多样性的随机扩增多态DNA(RAPD)分析

通过实验比较获得了一种高效、简便的双齿围沙蚕基因组DNA的提取方法,以该法提取的基因组DNA为模板,对双齿围沙蚕RAPD分析中的DNA模板浓度、镁离子浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶浓度进行了研究,确定了适于双齿围沙蚕RAPD分析的最佳反应体系:25μL反应体系中,含模板DNA 25 ng,10×PCR缓冲液2.5μL,MgCl2 1.5 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物24 ng,Taq DNA聚合酶1.5 U.对浙江温岭18个双齿围沙蚕个体进行了RAPD分析,从100个随机引物中筛选的26个引物检测出229个位点(400～4 200 bp),群体的多态位点比例为80.78%;遗传多态度在0.225 9;Shannon指数在0.353 2.个体间遗传距离最大的为0.461 0,最小的为0.160 9,18个个体的平均遗传距离为0.342 1±0.045 13;同时用UPGMA对18个个体进行聚类分析,构建谱系关系图,表明双齿围沙蚕的遗传多样性水平较高,为双齿围沙蚕的种质保护、合理开发利用以及选择育种提供了新的分析参数.     

溴代十六烷基三甲胺存在下铜铁同时与苯基荧光酮显色反应的研究

对 Cu2 + 、Fe3+ 在溴代十六烷基三甲胺 (CTMAB)存在下同时与苯基荧光酮的显色反应进行了研究 ,发现它们与苯基荧光酮均能形成稳定的络合物 ,Cu2 +络合物的最大吸收波长为 5 99nm,摩尔吸光系数为 1 .0 8×1 0 5;线性范围 0～ 7μg/2 5 m L.Fe3+络合物的最大吸收波长为 63 8nm,摩尔吸光系数为 8.87× 1 0 4 ,线性范围 0～6μg/2 5 m L.在水样中进行回收率的测定 ,结果满意 .     

阴离子树脂微柱在线预富集火焰原子吸收法测定痕量镉

建立了流动注射在线微柱预富集-火焰原子吸收(FAAS)法测定天然水中痕量镉的体系.在溶液pH7.2条件下,8-羟基喹啉-5-磺酸与Cd2+形成的络阴离子被填有阴离子树脂的微柱吸附而富集.用1mol/L硝酸溶液洗脱树脂上所吸附的镉.洗脱液在线输入FAAS测定.当采样速率为24次/时,富集倍数为10,检出限0.5μg/L,工作曲线线性范围0～100μg/L,RSD为1.0%(n=11,Cd2+浓度为100μg/L).本体系已用于天然水样中痕量镉测定,回收率90%～106%.     

氯离子对钴/单过氧硫酸盐体系降解2,4,6-三氯苯酚的影响

对比了在有无Co2+催化剂存在时外加氯离子对Co/单过氧硫酸盐(Co/PMS)体系降解2,4,6-三氯苯酚(2,4,6-TCP)效果的影响,考察了不同浓度氯离子对2,4,6-三氯苯酚降解的动力学和总有机碳(TOC)的去除率.结果表明,氯离子对该体系降解2,4,6-三氯苯酚过程具有双重影响:在Co2+存在条件下参与自由基反应,但提高其浓度又明显抑制2,4,6-TCP矿化;在无Co2+存在条件下诱发非自由基反应,实现对氯酚的快速降解.通过气质联用(GC-MS)测定了反应的中间产物,并据此推断了降解的反应机理.     

羟基含量对Ru(bpy)32+/CDs@H2O2体系检测多巴胺的影响

以2B铅笔芯为原料,用电氧化法在水相中制备荧光碳点(CDs),再通过H₂O₂氧化得到CDs@H₂O₂,利用透射电子显微镜(TEM)、荧光光谱、Fourier变换红外光谱(FT-IR)与X射线光电子能谱(XPS)对CDs和CDs@H₂O₂进行表征。结果表明,相对于CDs,CDs@H₂O₂表面具有更丰富的羟基官能团。将CDs与CDs@H₂O₂分别用作Ru(bpy)₃²⁺阳极电化学发光(ECL)的共反应剂,Ru(bpy)₃²⁺/CDs@H₂O₂体系的ECL信号强度是Ru(bpy)₃²⁺/CDs体系的8.2倍,证实羟基是CDs作Ru(bpy)₃²⁺共反应剂的活性...     

纪录时刻及其计数过程矩完全收敛的精确渐近性

设{Xn,n≥1}是i.i.d.连续型随机变量,μ(n)为记录时刻对应的计数过程,记N为服从标准正态分布的随机变量,证明了μ(n)矩完全收敛的精确渐近性,即当1p2,δ-1时,有limε10ε2p(δ+1)/(2-p)∑n≥3(logn)δ/n(logn)-1/2E{|μ(n)-logn|-ε(logn)1/p}+=1/δ+1·2-p/2pδ+p+2E|N|(2pδ+p+2)/(2-p).     

利用模拟代谢活化体系研究污染物的基因毒性

利用二氯乙烷、三氯乙烷、三氯乙烯、N，N二甲基甲酰胺、内酮作为典型污染物与Fe^2＋/EDTA／H2O2／联氨模拟体系反应，所产生的活性中间体与4-（对硝基苄基）吡啶反应生成了紫红色物质，据此，本文建立了一种分光光度法检测活性中间产物的新方法，该办法测量灵敏度高（10mol／L），应用该方法证实了其中4种污染物（二氯乙烷、三氯乙烷、三氯乙烯、N，N-二甲基甲酰胺）具有形成DNA加合物的能力．同时对代谢活化体系的各种显色条什进行了优化。     

芯片胶束毛细管电动色谱分离荧光素异硫氰酸酯衍生的氨基酸

研究了用芯片毛细管电泳-激光诱导荧光检测系统分离多种荧光素异硫氰酸酯(FITC)衍生氨基酸的实验条件.通过实验优化了夹流式进样的电压条件.采用以乙醇作有机添加剂的胶束毛细管电动色谱分离体系(50mmol/L SDS,15% 乙醇,5 mmol/L pH9.2的硼砂缓冲液),在72 mm长的通道上实现了10种常见氨基酸的分离,一次分离的时间小于5 min.     

采用多聚酶链反应技术直接从人群基因组DNA筛选HLA-DR_4基因

本文建立了一种简易、快速的外周血DNA抽提方法,并用于多聚酶链反应(PCR),对HLA-DR_4 基因进行定型.同时与一些经血清学定型的样品进行比较,结果证实PCR方法更为可靠.对56例上海地区随机正常人DNA样品进行PCR定型,结果显示DR.阳性率为21.4%,DR_4 基因频率为0.113,与其它人种间有较大差异     

白藜芦醇抗过氧亚硝基及保护DNA作用

利用紫外-可见、荧光光谱法研究了白藜芦醇（resveratrol，Res）与过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion，ONOO^-）的相互作用，利用电泳方法证实了Res能抑制ONOO^-引起的DNA损伤作用．结果表明Res与ONOO^-之间存在相互作用，并对ONOO^-引起的DNA损伤具有明显的保护作用，当Res浓度为0．05mmol／L时，有近50％的断链DNA恢复为超螺旋态；CO2能显著降低ONOO^-引起的DNA单链断裂，并能加强Res的保护作用，当Res浓度为0．05mmol／L时，对DNA损伤的保护由50％增加到71％．     

矿山酸碱混合废水的氧化处理

针对某铜矿矿山酸性废水具有低pH值,含大量Fe3+、Fe2+以及Cu2+等金属离子和浮选废水中存在大量残留浮选药剂,废水COD较高等特点,分别研究了NaClO,O3和Fe2+/H2O2三种氧化剂对该混合废水中残留浮选药剂的降解处理效果.研究表明:利用H2O2氧化方法降低混合废水的COD是可行的,而NaClO和O3的氧化效果则较差;H2O2最佳的投加浓度为340mg/L时,COD的去除率可达91.6%.对H2O2氧化机理的研究表明,混合废水中的Fe2+与H2O2在低pH值下反应生成活性自由基是残留浮选药剂去除的关键.最后,应用动力学模型对Fenton氧化反应进行了模拟.     

靶向二肽基肽酶维药体外筛选模型的建立及应用

二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidaseIV,DPPIV）是治疗Ⅱ型糖尿病的新靶点,糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1在体内有促进胰岛β细胞分泌胰岛素,胰岛素的生物合成,β细胞的生长并抑制其凋亡和抑制血糖升高等功能．二肽基肽酶Ⅳ可快速降解糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1,使其失去生物活性．本实验利用Caco-2细胞中所得到的二肽基肽酶IV,优化酶活筛选体系．确定了二肽基肽酶Ⅳ最适底物Gly-Pro-pNA浓度为0.064 mg/mL、反应温度37℃、反应时间30 min和竞争性抑制剂Ile-Pro-Ile浓度0.68 mmol/L,从而建立了靶向二肽基肽酶Ⅳ的快速筛选体系．应用该模型,对18种维药提取物进行了筛选．本研究结果将为维药的进一步开发和利用提供了理论依据.     

鲭鱼中组胺降解酶产生菌的分离筛选和基本酶学性质研究

鲭鱼亚目的海洋鱼类在捕获后易产生组胺,导致鲭鱼中毒．为研究组胺消长与微生物的关系,通过平板分离和摇瓶发酵,以荧光光度法测定酶活力,从鲭鱼（Pneumatophorus japonicus）皮肉、内脏和腮中分离筛选组胺降解菌,并对所产组胺降解酶的酶学性质进行研究和分析．结果表明：自内脏中分离筛选到一株组胺降解酶活力较高的革兰氏阴性杆菌,从生长产酶曲线推测该酶为初级代谢产物．该酶反应的最适温度为35℃,最适pH为7．2．在pH6．0～8．0和温度20～35℃范围内有较好的稳定性．Mn^2＋、Ca^2＋、Na^-、Mg^2＋、K^＋等金属离子存在时酶活力增加。Zn^2＋、Al^3＋、Fe^3＋、Fe^2＋、Cu^2＋等金属离子存在时,酶活力下降,在EDTA存在条件下酶活力完全丧失．对其动力学研究表明,在甘氨酸-NaOH缓冲反应体系中,最大反应速度Vmax=156．25U·mL^-1,米氏常数Km=0．22mg·mL^-1．组胺降解菌国内还朱见报道,研究结果对进一步研究水产品组胺生物控制技术具有重要意义．     

反向PCR扩增问号赖型钩体重组质粒pDJH2插入片段

钩端螺旋体赖型赖株（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓＳｅｒｏｖａｒｌａｉ）ＤＮＡ分别经ＢａｍＨＩ,ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ３种内切酶酶切完全消化,通过设计１对引物,反向ＰＣＲ扩增问号赖型钩体重组质粒ｐＤＪＨ２插入片段两端的未知序列．结果显示不同酶切环化连接,经反向ＰＣＲ扩增均可得２条大小相等的扩增带．结果提示反向ＰＣＲ技术可以用于问号赖型钩体重组质粒插入片段两端的未知序列的研究,为获得钩体完整基因序列提供新的途径．     

F15L和K207E突变与Borrelia螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶的生物活性

磷脂酰胆碱合成酶是磷脂酰胆碱合成酶(PCS)途径中的关键酶.根据Borrelia burgdorferiBB0249ORF的DNA序列设计引物对,从B.afzelii总DNA中扩增出一段660 bp DNA.序列分析发现扩增的DNA片段编码的蛋白中仅两个氨基酸(L15和E207)不同于B.burgdorferiBB0249 ORF编码的蛋白(F15和K207).将克隆的基因插入pET表达载体,并在大肠杆菌中表达.在活体中进行的活性分析发现,克隆的DNA片段编码的蛋白质能利用外源的胆碱和大肠杆菌细胞内的CDP-二酰基甘油合成磷脂酰胆碱(PC),表明螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶15位的苯丙氨酸和207位赖氨酸残基分别被亮氨酸和谷氨酸替代并不影响磷脂酰胆碱合成酶的活性.     

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)应急二价铜离子时超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的变化

用二价铜离子(Cu2+)胁迫克氏原螯虾,分析其肝胰腺、触角腺、鳃等组织的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性变化.结果表明:克氏原螯虾能在含10mg/LCu2+水中生活;在10mg/LCu2+胁迫下,在0～24h,肝胰腺和触角腺中的CAT、SOD活性均显著升高,CAT活性在24h达到最高;在24～36h,肝胰腺和触角腺中的CAT活性开始下降,而SOD活性继续上升,在第36h时达到最高;48h后,肝胰腺和触角腺中SOD和SOD活性下降并均趋于平稳表达,SOD活性仍显著高于非胁迫处理时,而CAT活性则显著低于Cu2+处理时;鳃中的SOD和SOD活性未受到Cu2+浓度变化的影响.