固相金属亲和层析纯化全长人PPARγ重组蛋白

建立全长人PPARγ重组蛋白的固相金属亲和层析纯化方法.利用E.coli BL21 (DE3)细胞外源性表达出全长人PPARγ重组蛋白,采用固相金属亲和层析法纯化目标蛋白.通过考察咪唑浓度对纯化的影响,确定在8 mol/L尿素下,用含50 mmol/L咪唑的缓冲液冲洗,200mmol/L咪唑缓冲液洗脱,可获得纯度为95％的目标蛋白,透析复性后经放射配体受体饱和结合实验测定全长人PPARγ重组蛋白的解离常数Kd为106士6nmol/L.结果表明本文所建立的方法能够成功纯化出高纯度的目标蛋白,经复性后,可获得用于结构和功能研究的全长人PPARγ重组蛋白.     

全长hPPARγ重组蛋白的可溶性表达、纯化及活性鉴定

建立细菌外源性表达的有活性的全长hPPARγ重组蛋白的纯化方法.利用pReceiver-B13-SUMO-PPARγ表达质粒转化至E.coli BL21 (DE3)细胞中诱导表达获得的全长hPPARγ重组蛋白;采用阴离子交换色谱法纯化目标蛋白;采用分子排阻色谱-高效液相色谱法(SEC-HPLC)法测定全长hPPARγ重组蛋白与Ros (Rosiglitazone,罗格列酮)配体的结合活性.经DEAE-52阴离子交换树脂一次纯化,从每升LB培养介质中可获得135mg、纯度为80％目标蛋白;该蛋白与罗格列酮的解离常数Kd为492nmol/L.本文所建立的方法能纯化出大量有活性、纯度较高的全长hPPARγ重组蛋白.     

德国小蠊变应原Bla g 2蛋白变复性的荧光光谱研究

包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Bla g 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2在不同pH下的荧光光谱分析,推断出Bla g 2蛋白分子在不同环境下构象的变化及其光谱学特征,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。     

椰子花粉过敏原profilin蛋白体外重折叠过程的光谱学研究

在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白通常都是以包涵体的形式存在.利用圆二色性光谱、荧光光谱和同步荧光光谱对尿素诱导的重组椰子化粉泛过敏原profilin蛋白包涵体的复性过程进行了系统的光谱学研究,得到了profilin蛋白复性过程的光谱学特征;结合生物信息学方法,通过对profilin蛋白的二级结构和三级结构的预测,进一步分析了复性过程中profilin蛋白构象变化的特点,初步建市了一种新的检测重组变应原蛋白复性程度的光谱学实验方法,为重组蛋白包涵体复性机理的深入研究进行了有益的探索.     

HPLC法同时测定养心草中没食子酸、槲皮素和山萘酚的含量

建立了高效液相色谱法同时测定养心草中没食子酸、槲皮素和山萘酚的含量。采用Hypersil C18色谱柱（4.6mm×200mm,5μm）,流动相为甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱,流速1.0mL/min;柱温25℃;检测波长260nm。在选定色谱条件下没食子酸、槲皮素和山萘酚线性关系良好;没食子酸、槲皮素和山萘酚加标回收率分别为98.37%、99.61%、97.81%,RSD分别为2.32%、2.15%、2.20%。方法简便快速,结果准确可靠,可用于控制中药养心草的质量。     

HPLC测定多穗金粟兰不同部位的异秦皮啶

建立多穗金粟兰异秦皮啶的含量测定方法。采用色谱柱:Phenomenex C₁₈色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相:甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B）,低压梯度洗脱;柱温:25℃;流速:1.0mL/min;检测波长:323nm,进样量:10μL。异秦皮啶含量在0.0024—0.3600μg与峰面积呈良好的线性关系。异秦皮啶平均加标回收率为98.17%,RSD=0.98%（n=5）。该法操作简便、易行,准确度高、重复性好.可用于多穗金粟兰异秦皮啶的含量测定。     

维吾尔药玫瑰花口服液的高效液相色谱指纹图谱

建立玫瑰花口服液的HPLC指纹图谱,更有效地控制该产品的质量.色谱柱:Agilent HC-C18(Analytical 4.6mm×250mm,5μm);流动相:0.5％磷酸-甲醇,梯度洗脱;体积流量:0.8mL/min;运行时间:40min;柱温:30℃;进样量:20μL;检测波长:268nm.确定了15个共有峰,...     

高效液相色谱法测定巴豆油中佛波醇

建立巴豆油中佛波醇（Phorbol）的含量测定方法。用HPLC测定水解后佛波醇的含量,并通过正交法优化巴豆油水解条件。采用Kromasil C₈（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇:水=20:80.流速为1.0mL/min.柱温为25℃,检测波长为234nm。在46.8—468μg/mL范围内佛波醇浓度与峰面积线性关系良好.回归方程为y=9820.8x+50238,r=0.9999;回收率为93.16%,RSD为2.73%。巴豆油的优化水解条件:温度20℃,料液比1:8（mL/mL）,水解3h,此条件下佛波醇的产率最高,平均产率为2.41%。所建方法易于操作、结果稳定、重现性好,可用于巴豆油中佛波醇的含量测定。     

HPLC测定甲磺酸托烷司琼的有关物质

建立HPLC测定甲磺酸托烷司琼的有关物质。采用C18色谱柱,以甲醇-水-乙腈-三乙胺(565:40:35:0.3,V/V/V/V)为流动相A,以甲醇-水-乙腈-三乙胺(800:100;100:0.24,V/V/V/V)为流动相B,梯度洗脱检查有关物质;检测波长为284nm。甲磺酸托烷司琼检出限为0.24ng,主成分与其有关物质能完全分离。方法简便、准确、专属性好,可用于甲磺酸托烷司琼有关物质的测定。     

高效液相色谱法测定食品中的合成色素酸性红26

采用VP-ODS-C18 (250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙酸铵(0.02mol/L)水溶液为流动相,流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温30℃,用紫外检测器在221nm波长下进行检测,建立食品中合成色素酸性红26含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法.酸性红26在0.2-100.0mg/L浓度范围内,信号与浓度呈良好的线性关系,A=4.839C+6.497(r=0.9994),检出限为0.2mg/L.方法灵敏、简便,其重复测定结果的精密度和准确度都较好,可用于食品中合成色素酸性红26的测定.     

樟帮法炮制吴茱萸样品的指纹图谱

建立樟帮法炮制吴茱萸样品的液相色谱指纹图谱.采用HPLC研究樟帮法炮制吴茱萸样品的指纹图谱,以Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,在乙腈-0.4％磷酸水溶液下梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为327nm.10批不同来源的吴茱萸药材及其炮制品各色谱峰分离较好,获得19个共有色谱峰.方法所建立的HPLC指纹图谱能较好地识别樟帮法炮制吴茱萸样品,为吴茱萸药材及其炮制品质量控制提供依据.     

高效液相色谱法测定注射用氢化可的松琥珀酸钠含量的色谱条件考察

筛选高效液相色谱法测定注射用氢化可的松琥珀酸钠含量的适合的色谱条件。通过改变色谱条件,对注射用氢化可的松琥珀酸钠含量测定的各种常用的色谱系统进行对比研究,筛选出适宜的色谱条件为:Kromasil 100-5C18柱(4.6×1 50mm,5μn)为色谱柱;流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(50:50);流速:0.5mL/min;检测波长:242nm。该色谱条件下注射用氢化可的松琥珀酸钠测定方法的系统适用性较好,可用于其含量测定。     

RP-HPLC测定巴豆种仁中佛波醇的含量

建立巴豆(Crotan tiglium Linn)种仁中佛波醇的HPLC含量测定方法.采用岛津LC-2010型液相色谱仪,Diamonsil C18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水(梯度洗脱),检测波长:234nm,流速:1mL/min,柱温:25C.在选定色谱条件下佛波醇浓度在6.096-1...     

泵浦光激发下金刚石纳米柱内部光场的研究

金刚石纳米柱是实现色心单光子源增强的有效结构,而纳米柱结构尺寸决定泵浦光对色心的激发强度.本文为提高其激发效率,采用时域有限差分法(Finite Difference Time Domain, FDTD)研究金刚石纳米柱的光学性质.通过仿真分析了纳米柱直径和高度对内部电场强度的影响.结果表明,在泵浦光波长为532 nm时,纳米柱内部中轴线上场强受尺寸变化影响较大,当直径不变、改变高度时,场强最大值随高度周期性变化,周期约为150 nm;当高度不变、改变直径时,场强最大值也随直径周期性变化,周期约为150 nm.通过研究不同波长的泵浦光对金刚石纳米柱内部中轴线上电场分布的影响发现,不同波长的泵浦光对纳米柱内部中轴线上最强场强对应的纳米柱尺寸有较大影响,但对于纳米柱最大场强随纳米柱尺寸变化的趋势几乎没有影响.本文通过研究上述内容,较为全面地掌握了纳米柱尺寸及泵浦光对纳米柱内部电场强度的影响规律,找到了纳米柱内部中轴线上最强场强位置,确定了激发色心的效率最高值所在位置,为金刚石纳米柱单光子源的制备提供理论指导.     

反相高效液相色谱法分离格列美脲顺反异构体

本文建立了一种用反相高效液相色谱分离格列美脲顺反异构体的方法。采用 Zorbax SB- C18(2 5 0×4 .6 mm,5μm)色谱柱 ,以甲醇和 0 .0 5 mol· L-1醋酸铵 (p H3.8) (6 8∶ 32 )为流动相 ,流速为 1.0 m L·min-1,柱温 2 0℃ ,检测波长为 2 30 nm。格列美脲顺反异构体保留时间分别为 2 2 .4和 2 3.7min,达到基线分离 ,检查 3批制剂中格列美脲顺式异构体含量不超过 0 .5 %。本法可用于格列美脲原料药及制剂顺式异构体的限量检查 ,并可用于格列美脲药物的质量监控     

偶氮氯膦-mA光度法测定人血清中总蛋白

在酸性介质中,偶氮氯膦-mA与蛋白质在室温下能迅速结合生成复合物,并在600nm和660nm处产生两个吸收峰。利用复合物在600nm处的吸光度研究了反应的最佳条件,并建立了一个测定蛋白质的光度分析新方法。本方法至少可测定75—400μg/mL的牛血清蛋白(BSA)、人血清蛋白(HSA)及γ-球蛋白G(IgG),其表观摩尔吸光系数ε分别为:1.23×105、1.06×105与2.13×105L·mol-1·cm-1。除阴、阳离子表面活性剂外,其余大部分物质不干扰蛋白质测定。方法快速、简便、选择性好、线性范围宽。用于人血清样品中总蛋白的测定,所得结果与用经典的考马斯亮蓝法测得结果基本一致。     

高效液相色谱法测定枸杞叶粗蛋白中的活性多肽IN-5

建立高效液相色谱法测定枸杞叶粗蛋白中活性多肽IN-5含量的方法.色谱条件为:色谱柱Kinetex C18 (250mm×4.6mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.2％磷酸水(5∶95,V/V);检测波长210nm;流速为0.7mL/min;柱温25℃.结果表明,IN-5浓度在16.0-240.0μg/mL内与峰面积的线性关系良好(r=0.9999).平均回收率99.2％,RSD=0.49％(n=9).方法快速、准确、重复性好,可用于IN-5含量的检测.     

普洱生茶的HPLC指纹图谱

采用Phenomenex synergi色谱柱（250mm×4.6mm,4μm）,乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱,流速为1.0mL.min^-1,检测波长210nm。对10批不同产地、不同生产年限普洱生茶样品进行处理,运用中药指纹图谱相似度评价软件,建立了该普洱生茶的HPLC指纹图谱;与绿茶指纹图谱比较,存在较大的差异,该法简单精确,为控制普洱生茶的质量提供了依据。     

抗EGFR单克隆抗体表面电荷不均一性的分析条件优化

优化离子交换色谱法分析抗表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体表面电荷不均一性的条件。考察了离子交换色谱法分析抗EGFR单克隆抗体表面电荷不均一的条件,包括色谱柱、流动相pH、梯度及柱温。离子交换色谱法分析表面电荷不均一性的最佳条件:TSK-gelCM-STAT离子交换色谱柱、流动相pH6.0、合适的起始梯度及梯度陡度有利于电荷不均一性各组分的分离,柱温为40℃。合适的分析条件能够使单克隆抗体表面电荷不均一性各组分在离子交换色谱柱上得到最佳分离及获得较高灵敏度。     

高效液相色谱指纹图谱结合聚类分析法对不同产地穿心莲药材的质量评价

建立了穿心莲药材的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱,并对指纹图谱信息进行了数据化处理,为穿心莲药材的质量控制提供比较全面的评价方法。采用水浴回流法提取穿心莲药材中的主要成份,应用高效液相色谱分离-紫外检测法,选用Kromasil C₁₈色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,以含5%乙腈的甲醇溶液-0.1%磷酸溶液为流动相进行线性梯度洗脱,检测波长260nm,确定了20个共有峰,并对不同产地的10批穿心莲药材指纹图谱进行了相似度比较和聚类分析,初步评价了药材质量优劣。方法具有良好的稳定性和重现性,可有效用于穿心莲药材的质量控制。