玉米（Zea mays L．）cdc2基因的染色体原位杂交物理定位

首次报道了玉米低拷贝ｃｄｃ２基因非放射性标记的探针染色体原位杂交的物理定位．供试探针为玉米，ｐ３４ｃｄｃ２的ｃＤＮＡ克隆ｃｄｃ２ＺｍＡ，片段长度仅为１．３ｋｂ．原位杂交检测结果表明，该基因位置在第４染色体及第９染色体长臂，同时在第８染色体长臂亦有杂交信号检出．３处信号检出位置距着丝粒距离和长臂长度百分比分别为５４．７９±２．５１６，８７．９４±１．５３７和２５．８６±０．８５６在第４、９和８染色体上信号检出率分别为２４．６％，１２．３％和６．６％．本文还就非放射原位杂交技术以及ｃｄｃ２基因在玉米基因组中的物理位置与其功能间的关系作了探讨     

与Pi—2（t）基因连锁的栽培稻BAC克隆在药用野生稻和栽培稻中的比较物理定位

用栽培稻遗传图第6连锁群中与Pi-2(t)紧密连锁的RFLP标记RG64及其筛选出来的BAC克隆38D17作为探针,对药用野生稻和栽培稻进行荧光原位杂交(FISH),供试探针RG64及BAC克隆38D17均被定位于药用野生稻和栽培稻第6染色体.药用野生稻杂交信号的百分距离分别为44.87士5.33和46.50士4.57,而栽培稻则为35.85士3.06和36.05±2.44,信号检出率相应地为7.14%、42.53%、8.09%和40.78%.BAC克隆和RFLP探针杂交位置几乎一致,由此推知,与抗性基因Pi-2(t)连锁的BAC克隆在药用野生稻中的同源顺序就在第6染色体杂交信号出现的相应位置.在未封阻的情况下,药用野生稻多个染色体上具有信号,这表明它和栽培稻的Cot-IDNA重复序列在一定的程度上具有同源性.文中讨论了栽培稻BAC克隆对药用野生稻原位杂交物理作图的可行性和Cot-IDNA的制备所涉及的一些技术问题.     

新质源水稻雄性不育系马协A的遗传分析

用马协Ａ和珍汕９７Ａ与１３个水稻品系杂交，对两者的遗传行为进行了比较．结果表明，马协Ａ和珍汕９７Ａ的恢保关系基本相同；它们与丛广４１Ｂ、密阳２３的杂交后代表现一对基因的分离规律，与明恢６３的杂交后代表现２对基因的遗传规律；等位性测验表明两者的核不育基因是等位的．马协Ａ和珍汕９７Ａ在遗传上属同一类型．     

玉米大斑病抗性基因ht2的原位杂交物理定位

通过对与玉米大斑病（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍｔｕｒｃｉｃｕｍ）抗性基因ｈｔ２紧密连锁的２个玉米ＲＦＬＰ分子标记ｂｎｌ１２．３０和ｕｍｃ９３的染色体原位杂交定位，推断了大斑病抗性基因ｈｔ２的物理位置．ｂｎｌ１２．３０和ｕｍｃ９３在遗传图中位于第八连锁群上，它们的探针分别同时与第三和八染色体进行了杂交，平均信号检出率为１２．１３％；它们在第八号染色体长臂上杂交信号与着丝粒的百分距离分别是３３．３０±１．４１和３４．４７±２．７５，在第三号染色体长臂上杂交信号与着丝粒的百分距离分别是５１．４１±２．７５和５６．５４±２．９４．基因ｈｔ２在遗传图上位于第八连锁群的ｂｎｌ１２．３０和ｕｍｃ９３之间，因此，ｈｔ２在染色体上的物理位置应为第八号染色体长臂，百分距离为３３．３０和３４．４７之间．在第三号染色体长臂上两个供试ＲＦＬＰ标记的分布区之间也可能有ｈｔ２的同源顺序．     

一种具高活性的酪氨酸酶基因启动子片段的分离

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体,经ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ完全消化后与ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ部分消化的嗜麦芽假单胞菌染色休ＤＮＡ进行体外连接,转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞,在含氨苄青霉素（Ａｐ）和氯霉素（Ｃｍ）的选择平板上筛选转化子．从随机挑选的５４株转化子中,获得一株抗氯霉素水平达１０００ｍｇ／Ｌ的转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ,所含重组质粒被命名为ｐＡＳＩ．经限制性酶切分析和杂交分析表明,ｐＡＳＩ质粒上插入了一段来源于嗜麦芽假单胞菌染色体的ＤＮＡ片段,其大小为１．４ｋｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ在含Ｃｍ的培养基上,额外表达了一条２２×１０３的ＣＡＴ蛋白质带．将重组质粒ｐＷＳＹ上的嗜麦芽假单胞菌ｍｅｌ基因亚克隆到ｐＡＳＩ上１．４ｋｂ启动子功能片段下游,构建成Ｅ．ｃｏｌｉＡＷＳ工程菌株,使黑色素产率提高了７０．６％．     

用原位PCR方法检测培养细胞中的单拷贝SRY基因

以原位ＰＣＲ方法在培养的ＨＩＣＭＡ细胞中进行了Ｙ染色体上单拷贝ＳＲＹ基因的原位扩增，并使用ＰＣＲ方法制备的地高辛标记探针原位检测了所扩增的片段．比较研究表明，原位ＰＣＲ法较之直接的原位杂交法，其灵敏度提高５倍以上     

动物细胞凋亡相关基因p53和c-myc在大麦中的染色体定位

以人的原癌基因c myc和抑癌基因p53的cDNA为探针,经Southern杂交证明,它们在大麦基因组中存在同源序列.利用荧光原位杂交技术(FISH)进一步对大麦进行了染色体定位.在大麦有丝分裂中期染色体上p53有3个位点被检出,分别位于2L(第二染色体长臂)、2S(第二染色体短臂)和6L上,相应百分距离为84.27±0.75、46.24±15.44和19.23±0.53;c myc有2个位点被检出,分别位于5L和3S上,百分距离相应为75.90±6.62和47.63±5.20.利用改进的荧光原位杂交技术,使异源单拷贝或低拷贝基因在大麦姐妹染色单体上,同时出现信号的检出率达到了30%以上.     

eglinC基因的化学合成与克隆

采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５＇－端起始密码子ＡＴＧ和３＇－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５＇－和３＇－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点．共分１２个片段，采取分段合成，酶促连接成完整的ｅｇｌｉｎＣ基因．合成的基因克隆于Ｍ１３载体，经杂交、检测，筛选出含ｅｇｌｉｎＣ基因的克隆．用双脱氧链终止法测其序列，结果与设计的一致．     

野生稻抗白叶枯病遗传分析及转育效应研究

研究了不同类型的野生稻对江陵６９１，ＰＸＯ６１和Ｔ７１７４三个白叶枯致病菌系的抗性遗传及转育效应．普通野生稻２号与四个栽培稻杂交组合Ｆ２群体的抗性遗传分析表明：普遍野生稻２号带有三对相互独立遗传的显性抗病基因；其中一对同时支配对供试三菌系的抗性，并且与显性基因Ｘａ－４和Ｘａ－７非等位，与隐性基因ｘａ－５及ｘａ－ｃ独立遗传；另两对则分别只控制对江陵６９１和Ｔ７１７４之一的抗性．利用杂种胚和Ｆ１幼穗培养，可有效地将非ＡＡ型野生稻抗病性转育至栽培稻之中．     

水稻间期核、粗线期和有丝分裂中期染色体FISH分辨率的比较

利用水稻第 4染色体上的两个BAC(bacterialartificialchromosome)克隆作为探针 ,对水稻间期核、减数分裂染色体和有丝分裂中期染色体进行了荧光原位杂交 (fluorescenceinsituhybridization ,FISH) 结果表明 ,它们的杂交信号在水稻第 4染色体短臂上 ,有丝分裂中期染色体上两信号完全重叠 ,而在早粗线期染色体上可以分开 已知它们间的遗传距离为 2cM ,在粗线期染色体上两信号点彼此邻近但未重叠 ,两信号点中心的物理距离为 0 .36μm ,在间期核上两个信号点完全分开 ,相距 (2 .0 6± 1.15 ) μm 说明在水稻第 4染色体上 ,减数分裂粗线期FISH可以分辨相距约 2cM的两个标记 讨论了水稻减数分裂粗线期染色体FISH的技术及其优越性     

用原位杂交技术检测二价染色体上黄鳝rRNA基因多态性的研究

用地戈辛标记的原位杂交技术研究黄鳝二价体上ｒＲＮＡ基因的多态性．共检测到：数目和位置多态；杂交信号形态多态；ｒＲＮＡ基因的联合现象；７号二价体上可移动的ｒＲＮＡ基因位点；ｒＲＮＡ基因的串联重复；ｒＲＮＡ基因杂交信号周围的微信号密集等６种多态现象．还对本研究结果进行了详细地讨论．     

中国莲的定量染色体图

利用MetaMorph软件定量分析了中国莲(Nelumbo mucifera Gaertn.)每条前中期染色体上(从短臂到长臂)二脒基苯基吲哚(DAPI)荧光强度的变化，结合染色体的相对长度和臂比作为辅助参数，构建了中国莲前中期染色体的定量染色体图．该定量染色体图是实际的前中期染色体的一种直观模式，可识别中国莲基因组中每条染色体以及分析染色体上的异染色质分布，为莲的细胞遗传学研究提供了一种新的方法．     

籼稻幼胚组织培养高频率植株再生及其基因转化的研究

以籼稻品种特青的幼胚作为外植体,研究了激素对愈伤组织诱导及植株再生的影响。ＭＳ＋２,４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ作培养基,愈伤组织诱导率达１００％;愈伤组织在ＭＳ＋ＫＴ３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上,分化频率为６７．３％,在此基础上利用基因枪转化技术,将外源的ｂａｒ基因导入了水稻基因组,转基因植株表现出对除草剂Ｂａｓｔａ很强的抗性。     

水稻花药特异表达基因启动子的扩增及克隆

采用ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术，以水稻黄化苗总ＤＮＡ为模板成功地扩增到水稻花药特异表达基因启动子Ｏｓｇ６Ｂ的７７０ｂｐ和９６０ｂｐ两个片段Ｏｓｇ６Ｂａ和Ｏｓｇ６Ｂｂ．并将其克隆到ｐＵＣ１８上形成完整的Ｏｓｇ６Ｂ，这为通过基因工程方法进行水稻杂种优势利用奠定了基础．     

时间尺度域匹配滤波器的设计与实现

根据地震褶积模型，设计并实现了应用于探地雷达回波信号检测的时间尺度域匹配滤波器，利用小波变换的时间定位性和尺度伸缩性，检测出雷达接收信号中单个反射子波的位置与强弱信息，利用已知的雷达发射子波模型还原回波信号，达到了滤除噪声、最佳接收的目的．通过用传统相关匹配滤波方法和本方法对探地雷达接收数据进行比较试验发现：当信噪比比较低时，传统方法已经不能准确地检测出雷达子波，而本方法仍能准确的检测出90％的雷达子波．这表明，本方法具有更好的子波检测和滤波性能．     

MYC基因在人类HL－60和CEM癌细胞系中原位表达的研究

以细胞分子原位杂交方法对两种不同类型的人类白血细胞系ＨＬ－６０和ＣＥＭ，以及正常人白细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行了比较研究．结果证明：ＨＬ－６０细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因有异常高水平的表达，而在ＣＥＭ细胞和正常人白血球与淋巴细胞中则没有明显的Ｃ－ｍｙｃ转录产物．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析表明，ＨＬ－６０细胞基因组中Ｃ－ｍｙｃ基因有显著的扩增现象；而ＣＥＭ细胞基因组中的Ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数与正常人血细胞的接近，属正常水平表达。再次证明了ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃ基因的异常高水平表达，与该基因的大量扩增紧密相关．还对两种癌细胞系的癌变机理和细胞原位杂交在基因表达研究中的应用进行了讨论．     

墨胸胡蜂毒腺基因cDNA文库的构建及鉴定

从墨胸胡蜂毒腺中提取总RNA，经Oligo(dT)磁珠纯化mRNA后，用AMV反转录酶合成第一链cDNA．完成第二链cDNA合成后，过柱纯化50bp以上的片段，与载体pUC118连接，转化E．coli JM109，建立了cDNA文库．得到的780个阳性克隆中，重组率达到98．5％．大部分插入片段在500～900bp．随机挑选10个短序列测序，一个为蜂毒激肽基因序列．     

猪松果体提取液对雌激素诱导的小鸡生殖器官代谢的作用

猪松果体提取液对雌性小鸡输卵管和雄性小鸡睾丸核酸和蛋白质合成均有刺激作用．猪松果体提取液还可加强雌二醇对小鸡输卵管的刺激，削弱雌二醇对小鸡睾丸的抑制作用．猪松果体提取液和雌二醇共同作用也会加速小鸡松果体蛋白质的合成．人工合成的乙烯雌酚对小鸡的生殖器官代谢的作用与雌二醇不完全相同     

预浓缩技术-离子色谱法测定过氧化氢中痕量阴离子

建立了预浓缩-离子色谱法测定过氧化氢中痕量阴离子的方法。通过预浓缩技术去除过氧化氢基体,有效地消除了过氧化氢对分离树脂的氧化破坏作用．色谱条件是：IonPac AS23离子交换柱,等度淋洗,抑制型电导检测．该方法样品中阴离子F^-,Cl^-,NO3^-,SO4^2-检出限（S／N=3）分别为3．0,5．0,8．0及9．0μg·L^-1．该方法具有灵敏度高、选择性好、操作简单、价格便宜等特点．