时间分辨荧光免疫分析高灵敏检测嗜水气单胞菌

建立了生物素-链霉亲和素时间分辨荧光免疫分析（BAS-TRFIA）高灵敏检测嗜水气单胞菌的新方法.以兔抗IgG包被微孔板,加入嗜水气单胞菌菌株B18和生物素化IgG,生成的夹心复合物用Eu³⁺-链霉亲和素作为示踪物,Eu³⁺可与离解增强液形成时间分辨荧光（TRF）,通过TRF值对病原菌定量.方法的检测限为1.0×10² cfu/mL,在1.0×10~1.0×10⁶ cfu/mL范围内线性良好,相关系数0.9716.用该法检测时,不同来源的嗜水气单胞菌以及其它气单胞菌均呈阴性.板内和板间的变异系数分别小于5.00%和9.00%.所有相关检测试剂37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变.对60份人工感染的美洲鳗鲡组织样品,包括肝、肾、肠、鳃和肌肉等组织进行检测,阳性检测率为98.33%.结果表明,BAS-TRFIA法检测嗜水气单胞菌,灵敏度高、特异性好、操作简便,该方法为水产养殖病原菌检测提供了新的思路.     

青枯雷尔氏菌特征菌株高效离子交换色谱快速分离条件的优化

建立了高效离子交换色谱和紫外检测系统快速分离青枯雷尔氏菌的细菌色谱方法。通过比较青枯雷尔氏菌悬浮在哌嗪-HCl缓冲体系和双蒸水后的菌体数变化及细胞形态变化,分析该缓冲液对青枯雷尔氏菌生长活性及细胞表面特性的影响。结果表明,青枯雷尔氏菌悬浮在平衡缓冲液、洗脱缓冲液和双蒸水中的菌体数量无明显差异,分别为6.467×10⁹、6.267×10⁹和6.233×10⁹ cfu/mL。透射电镜观察发现,3种溶液处理后,青枯雷尔氏菌均保持完整的细胞结构。研究了缓冲液pH值、流速及菌体细胞浓度对青枯雷尔氏菌色谱分离效果的影响,确定青枯雷尔氏菌的最佳色谱分离条件为：缓冲液pH值为8.0,流速为2 mL/min,菌体浓度大于1.0×10⁸ cfu/mL且小于1.0×10¹⁰ cfu/mL。该分离条件缩短了分离时间,提高了分离效率,为快速分离青枯雷尔氏菌提供了一种有效的手段,同时也为细菌等微生物的分离提供了新途径。     

镥铕共发光时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌

建立了共发光时间分辨荧光免疫检测嗜水气单胞菌的新方法,以嗜水气单胞菌菌株B11包被微孔板,与Eu3+标记的兔抗IgG免疫反应后,加入含有共发光离子Lu3+的解离增强剂,由于Eu3+和Lu3+络合物的共发光效应,时间分辨荧光大大增强,有效放大了检测信号,提高了检测灵敏度。优化了共发光体系的条件,方法的检出限为1.0×10³cfu/mL,在1×10³~5×10⁶cfu/mL范围内线性关系良好,相关系数0.994,不同血清型的嗜水气单胞菌以及其它菌株均呈阴性。板内和板间的相对标准偏差分别为2.9%和3.0%。用该法检测了35份人工感染的日本鳗鲡组织样品,阳性检出率为100%,高于直接时间分辨荧光免疫法和ELISA法。共发光时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌,快速灵敏,具有良好的应用前景。     

基于Fe3O4@Au复合纳米粒子标记抗体的电化学免疫方法用于水体中大肠杆菌的检测

合成了Fe₃O₄@Au复合纳米粒子作为辣根过氧化酶标记抗体的载体, 并将该复合纳米粒子标记物应用于电化学放大免疫分析. 将电子媒介体硫堇聚合在玻碳电极表面, 以纳米金作为固定大肠杆菌抗体的基底, 通过辣根过氧化酶催化溶液中H₂O₂产生的电流信号来测定大肠杆菌. 实验结果表明, 该方法对水体中大肠杆菌检测的线性范围为50～1×10⁵ cfu/mL, 检出限为20 cfu/mL. 对过富集后的实际水样进行测定, 该法结果表明, 对水体中大肠杆菌的检测灵敏度达到2 cfu/mL.     

基于碳纳米管固定抗原的电化学免疫传感器法测定IgG抗体

以1-萘酚磷酸酯为底物,将IgG抗原吸附固定在碳纳米管修饰玻碳电极的表面,利用待测IgG抗体和碱性磷酸酯酶标记IgG抗体共同竞争免疫传感器表面的IgG抗原,研制了一种新型的电化学免疫传感器用于IgG抗体的测定。碱性磷酸酯酶可以催化底物1-萘酚磷酸酯水解生成1-萘酚,在电极表面氧化产生电信号。在电位为+0.30 V(vs.SCE)时,响应电流与IgG抗体浓度在5.0×10-9～5.0×10-7g/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为2.0×10-9g/mL。     

水溶性荧光共轭聚合物在检测出血热病毒中的应用

利用出血热病毒抗体-L133/抗原-EHF对水溶性荧光共轭聚合物聚(5-甲氧基-2-(3-磺酰化)丙氧基-1,4-对苯撑乙烯), (简写为MPS-PPV)荧光的增强/猝灭作用、抗原-EHF与抗体-L133之间的特异性相互作用及作用前后荧光强度的变化, 建立了一种基于水溶性荧光共轭聚合物荧光猝灭可逆的高灵敏、均相免疫测定新方法, 实现了出血热病毒抗 原-EHF的快速、灵敏检测, 检测抗原-EHF的线性范围是4.8×10^－9～5.0×10^－8 mol/L, 检出限为1.7×10^－9 mol/L. 实验表明, 生物分子对聚合物的荧光增强或猝灭不仅是静电作用, 而且还表现为聚合物形态构造的变化.     

基于铕螯合物纳米粒子标记的时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌

以铕螯合物荧光纳米粒子标记嗜水气单胞菌菌株B15兔抗IgG,得到纳米粒子-IgG复合物,建立了新的嗜水气单胞菌双抗夹心时间分辨荧光免疫检测(TRFIA)法。采用正交试验优化了兔抗IgG的包被时间和包被浓度,以及纳米粒子-IgG的免疫反应时间和稀释度。偶合了铕螯合物的纳米粒子发光强度大,光稳定性高,因此灵敏度被改善。方法的检测限为1.0×10~3 CFU/mL,在1.0×10~3～5.0×10~8 CFU/mL范围内线性关系良好(相关系数0.990),板内和板间变异系数分别为2.70%和9.62%。将该方法用于实际样品的检测,阳性检出率为100%。     

四苯基钴卟啉化合物催化过亚硝酸根分解的研究

利用紫外-可见分光光度计在乙醇介质中研究了合成的4种对位取代四苯基钴卟啉对过亚硝酸根分解的催化作用. 首次发现钴卟啉可以催化ONOO^－分解, 且对位带吸电子基团的钴卟啉比对位带供电子基团的钴卟啉催化活性高. TPPCoCl, T(p-CH₃)PPCoCl, T(p-OCH₃)PPCoCl和T(p-Cl)PPCoCl在乙醇中的k_cat分别为1.69×10², 1.52×10², 1.43×10²和1.20×10³ mol^－1•L•s^－1. 动力学曲线和时间分辨谱证明这些钴卟啉是通过形成中间体催化过亚硝酸根分解的.     

氯金酸-小檗碱离子缔合物体系的共振瑞利散射光谱研究及其分析应用

在pH＝2.0的HCl-NaOAc缓冲溶液中, 小檗碱阳离子与氯金酸根阴离子由于静电引力和疏水作用力形成离子缔合物时, 将引起溶液共振瑞利散射(RRS)显著增强, 并产生新的RRS光谱, 其最大RRS波长位于370 nm, 另在277 nm也有一个较强的RRS峰. 在1.83×10^－8～5.0×10^－6 mol/L范围内小檗碱浓度与散射强度(ΔI)成正比; 反应有很高的灵敏度, 对小檗碱的检出限(3σ/K)为1.83×10^－8 mol/L (7.5 ng/mL). 研究了共振瑞利散射光谱测定小檗碱的影响因素, 考察了共存物质的影响, 实验表明该方法有良好的选择性. 基于小檗碱与氯金酸反应产物的RRS光谱, 发展了一种高灵敏、简便、快速测定小檗碱的新方法, 用于中成药和中药饮片样品的测定, 结果满意. 本文还对反应机理进行了初步的探讨.     

Cr3+比色荧光探针的合成及细胞成像应用

以2,3,3-三甲基-3H-苯并[e]吲哚和对二甲氨基苯甲醛为原料, 乙醇作溶剂, 在酸性催化条件下, 通过一步反应合成了比色荧光探针B. 在EtOH/HEPES(pH=7.4)体积比为9∶1的混合体系中, 向探针B溶液中加入Cr ³⁺后, 溶液颜色由淡黄色变为紫红色, 说明探针B可以对Cr ³⁺进行裸眼识别. 紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱分析表明, 探针B对Cr ³⁺的选择性好、 灵敏度高且对EDTA有良好的接力识别. 探针B对Cr ³⁺的结合常数K_a=0.28×10 ² mol/L, 检出限为1.90×10 ^-8 mol/L, 该检出限低于世界卫生组织(WHO)规定的饮用水中Cr ³⁺的最大含量(9.60×10 ^-8 mol/L). 利用荧光发射光谱对实际水样中Cr ³⁺的浓度进行了定量检测. 探针B也可应用于对活细胞中Cr ³⁺的检测, 具有较好的应用前景和实用价值.