博莱霉素与DNA的作用机理及其类酶性研究

详细介绍了博莱霉素（ＢＬＭ）与ＤＮＡ的结合作用、活化ＢＬＭ与各种自由基在ＢＬＭ介导的ＤＮＡ断链反应中的作用以及ＢＬＭ类似酶的催化行为等多方面的研究进展情况．     

博莱霉素切割DNA反应的定量测定及其影响因素

用硫代巴比妥酸反应分析了博莱霉素 Ａ５ （ Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ ）对 Ｄ Ｎ Ａ 的断裂作用在 Ｆｅ２＋ 和 Ｏ２存在下, Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５能导致 Ｄ Ｎ Ａ 链断裂研究了一些因素对 Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ 催化 Ｄ Ｎ Ａ 断链反应的影响,设计并建立了 Ｂ Ｌ Ｍ Ａ５ 切割 Ｄ Ｎ Ａ 反应的定量测定方法,并测得 Ｋｍ 约为１５３ μｍ ｏｌ· Ｌ－ １, Ｖｍ ａｘ 约为００４６ Ａ５３２ｎｍ Ｕｎｉｔ·ｓ－ １      

博莱霉素A_5与DNA结合序列特异性研究

利用荧光淬灭法研究了博莱霉素Ａ５与小牛胸腺ＤＮＡ及ＤＮＡ类似物多聚ｄＧＣ、多聚ｄＡＴ的相互作用，其作用力为疏水作用及氢键，结合常数分别为０．５７×１０５，１．０７×１０５，０．４７×１０５ｍｏｌ－１Ｌ，每结合一个博莱霉素Ａ５所需碱基对数分别为２２～２３，５～６，２７～２８，上述结果表明博莱霉素Ａ５与ＤＮＡ的结合具有ＧＣ序列特异性     

醋酸甲羟孕酮与β-环糊精包络作用的光谱研究及应用

用紫外吸收、荧光光谱法对水溶液中β－环糊精（β－ＣＤ）与醋酸甲羟孕酮（ＭＡ）主客体包络物的光谱行为进行了研究．利用改进的Ｂｅｎｅｓｉ－Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ法测定了包络物的形成常数，初步探讨了某些水溶性一元醇的引入对该包络物形成及荧光性质的影响，并提出了测定ＭＡ的高灵敏度荧光光度新方法，方法的最低检出限为８．９×１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１．用该法测定样品中ＭＡ的结果令人满意，回收率为９７．９％～１０１．７％，平均回收率为９９．９％（ｎ＝５）     

水溶液中β-环糊精与苯甲酸雌二醇包络反应的光谱研究与应用

在硫酸酸性介质和溴化十六烷基三甲铵（ＣＴＭＡＢ）存在下用紫外吸收、荧光光谱法对β－环糊精（β－ＣＤ）与苯甲酸雌二醇（ＥＢ）的主客体包络反应及协同增敏作用机理进行了研究，提出了水溶液中测定ＥＢ的荧光光度新方法，灵敏度高，检出限为４．９×１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１，其线性范围为５．３×１０－９～２．０×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１，方法的相对标准偏差为１．３％（ｎ＝５）．应用本法于苯甲酸雌二醇注射液样品中ＥＢ的测定，结果满意     

切花百合组织培养的研究

在ＭＳ固体培养基上,研究了不同浓度的ＮＡＡ（萘乙酸）与６－ＢＡ（６－苄基腺嘌呤）配比对诱导切花百合小鳞茎的影响,培养２０d后统计,结果以ＭＳ＋６－ＢＡ０．５mg/Ｌ（单位不同）＋ＮＡＡ１．２的培养基上诱导率最高,达１００％;采用正交试验的方法,以其本培养基的种类、６－ＢＡ和ＮＡＡ的浓度为三因子,对小鳞茎进行液体振荡增殖培养,一个月后统计表明,最佳培养基为ＭＳ＋６－ＢＡＡ０．５,其增殖率为２６２５％。     

根癌农杆菌的高效电激转化

利用电激法将双元载体质粒ＰＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率．探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达．结果表明：根癌农杆菌电激转化的最适电激条件为１１ｋＶ／ｃｍ，２１．５μＦ，电场强度是影响转化效率的关键因素．当质粒ＤＮＡ浓度从０．２ｍｇ／Ｌ增加至０．６ｍｇ／Ｌ时，转化效率呈线性增加．细菌密度对转化效率也有一定影响．最高转化效率为每μｇ质粒ＤＮＡ１．７×１０５转化子．组织化学反应证实ＣａＭＶ３５Ｓ能启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中表达．     

酶促反应抑制动力学的微量热法研究——硫氰酸根漆酶催化氧化邻苯二胺的抑制

提出了一个适合米氏酶促反应各类可逆性抑制的热动力学方程：Ω０＝Ａ［Ｓ０］－１＋Ｂ根据方程中Ａ／Ｂ，Ｂ与Ｋｍ，Ωｍ的关系，给出了可逆竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制的热动力学判据以及表观米氏常数Ｋｍ，ａｐｐ、抑制常数Ｋｉ等酶促反应生化参数计算的热动力学公式，并实际应用于ＮａＳＣＮ对漆树漆酶催化氧化邻苯二胺抑制热动力学的微量热法测定，实验结果表明，此反应为非竞争性抑制，Ｋｍ，ａｐｐ为０．０９９１９±０．００７８２ｍｏｌ·Ｌ－１，Ｋｉ为０．０５２±０．００８ｍｏｌ·Ｌ－１．     

耐碱细菌NTT36耐碱基因的克隆及表达产物的分析

耐碱芽孢杆菌ＮＴＴ３６总ＤＮＡ经ＥｃｏＲＩ酶不完全消化，与质粒ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ酶切产物在体外重组后，转化大肠杆菌ＨＢ１０１．在碱性平板上直接筛选耐碱转化子，转化子经检测具有氨苄青霉素（Ａｍｐｒ）抗性，分析表明转化子具有１５ｋｂ大小的重组质粒．用此重组质粒转化大肠杆菌ＨＢ１０１、ＤＨ５α和ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，均产生大量同时具有耐碱性和Ａｍｐ抗性的转化子．通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和点杂交证明此重组质粒（定名为ｐＧＣＡ）由ｐＵＣ１８和ＮＴＴ３６总ＤＮＡ的片段组成．分别提取上述３种克隆转化子和ＮＴＴ３６细胞膜蛋白，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ梯度凝胶电泳，发现在ｐＨ１０．６条件下培养的转化子和供体菌ＮＴＴ３６与在中性培养基中生长的转化子和受体菌相比，有５条多肽带有明显差异．表明这５条多肽带与耐碱性有关．     

己烯雌酚荧光性质的研究及其分析应用

基于己烯雌酚与浓硫酸反应后的水解产物的荧光性质，建立了一种测量己烯雌酚的荧光光度分析方法．系统地研究了不同环境介质对产物荧光性质的影响，着重探讨了不同增敏剂在不同酸度下的作用机理．在比较了β－ＣＤ与ＣＴＭＡＢ的增敏作用之后指出：在强酸性条件下，β－ＣＤ的增敏效果优于ＣＴＭＡＢ；在强碱性条件下ＣＴＭＡＢ优于β－ＣＤ．并通过小分子醇对包络物荧光强度的影响对包络机理作了详细的阐述．利用本法测定片剂中己烯雌酚的含量，结果较好．     

分子标记与QTL间连锁检测与估计的方差分析法及其应用

拓展了适用于多种作图群体的检测数量性状基因座位（ＱＴＬ）与分子标记（ＭＬ）间连锁关系的方差分析模型，并提出利用该方差分析之期望均方，在一定的遗传假定前提下，能够用于估计ＭＬ与ＱＴＬ间的重组值．文章最后给出了一个分析实例，将水稻广亲和基因进行了定位．     

麻疹病毒(Nepal毒株)H基因的序列测定及其表达

提取麻疹病毒Ｎｅｐａｌ毒株的ＲＮＡ并利用逆转录ＰＣＲ方法特异性地扩增血凝素基因（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）．将Ｈ基因克隆并测定序列，结果表明新毒株的Ｈ基因与标准疫苗毒株Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ之间存在较多重要的基因变异，两者的同源性为９８．１７％．将Ｈ基因克隆到表达载体ｐＣＤ－ＳＲα中并利用电转染法转染ＣＯＳ－７细胞，利用血凝实验检测了Ｈ蛋白的表达及功能     

PCR检测伪狂犬病病毒的研究

用ＰＣＲ的方法，扩增了伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）ｇｐ５０基因的一段较为保守区（２１６ｂｐ）．检测了不同ＰＲＶ毒株感染的ＢＨＫ细胞以及接种的家兔，并对ＰＣＲ检测的灵敏性作了初步研究，结果表明，ＰＣＲ法扩增ｇｐ５０基因具有较高特异性和灵敏性，是检测ＰＲＶ的有效方法     

猪瘟病毒石门株E2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增了猪瘟病毒石门株的Ｅ２基因．扩增片段大小为１１８４ｂｐ，与预期大小一致．经ＳａｃＩ酶切和巢式ＰＣＲ证实了Ｅ２基因的特异性．将Ｅ２基因扩增片段首先克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，进行全序列测定，将该基因再克隆到表达载体ｐＢＶ２２１．采用温控诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示Ｅ２基因获得表达．ＥＬＩＳＡ表明Ｅ２基因表达产物可与猪瘟阳性血清起特异性反应．     

小菜蛾颗粒体病毒增效因子的研究

小菜蛾颗粒体病毒（ＰｌｕｔｅｌａｘｙｌｏｓｔｅｌａＧｒａｎｕｌｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＰｘＧＶ）ＤＮＡ与苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ细胞，经空斑测定，ＰｘＧＶ－ＤＮＡ提高ＡｃＮＰＶ游离病毒粒子的产量达２～１３倍．这表明ＰｘＧＶ－ＤＮＡ对提高ＡｃＮＰＶ病毒粒子产量具有促进作用，并为ＰｘＧＶ增效因子的研究提供了重要的依据     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

伪狂犬病毒糖蛋白H基因片段的克隆、序列测定和分析

对伪狂犬病毒湖北地方株(PRVHB株)糖蛋白H基因片段进行了扩增、克隆、序列测定和分析,比较了该序列与PRVKa株及NIA-3株三者之间的同源性.结果显示,克隆片段长1396bp,G+c含量75.6%,包括糖蛋白H(gH)N端283个氨基酸编码区及上游调控序列和胸苷激酶(TK)C端136个氨基酸编码区.gH基因ORF上游调控区存在有TATA框和CAT框的真核启动子特征结构.PRVHB株gH基因片段序列与PRVKa株和N1A-3株相应序列的核苷酸同源性相同,为99.6%.推导的gH多肽N端第1～30位氨基酸组成的肽段富含疏水性氨基酸,具有真核信号肽的序列特征.     

猪瘟病毒RT-PCR产物的T载体克隆、测序及同源比较

利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶的无模板延伸活性制备了可直接克隆ＰＣＲ产物的Ｔ载体，并成功地对猪瘟病毒ＨＣＬＶ株的ＲＴ－ＰＣＲ产物进行了克隆．ＤＮＡ序列测定和同源性分析表明该ＲＴ－ＰＣＲ产物是猪瘟病毒特异的，与已知序列的猪瘟病毒毒株的序列同源性均高达９６．７％～９８．７％．ＨＣＬＶ株与Ｃ株具有相同的起源，但序列比较发现它们既有共同的点突变，也有序列上的差异，表明这两株病毒在各自独立的传代过程中已发生了各不相同的遗传性变异，值得进一步比较研究．     

伪狂犬病毒TK基因转移载体构建及LacZ基因表达

在扩增、克隆PRVtk、gH基因的基础上,构建了包含tk和gH基因片段的转移载体质粒pTK2．5．以PRV糖蛋白gG启动子(PgG)为控制外源基因表达的启动子,以E．colilacZ为报道基因,用其替换pTK2．5质粒tk区的Sall与Xhol之间的序列,构建了转移载体质粒pTK．LacZ．瞬时表达证实,转染细胞的pTK—lacZ质粒在野生型PRV感染的情况下,能有效表达β-Gal酶活性．将pTK．1acZ转染BHK21细胞后再以PRV感染进行同源重组,在143TK-细胞上经5．溴脱氧尿苷选择,Vero细胞纯化,X-GaI染色,蓝斑筛选,分离到重组体PRV(rPRV)．rPRV与野生型PRV在细胞上具有类似的生长特性,且经过连续传代的rPRV仍能稳定的表达β-Gal酶活性．