病毒颗粒的存在与其对水稻纹枯病菌的影响

存在有14.0 kb dsRNA的水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1 IA)Rs17菌株与存在有2.0 kb dsR-NA的Rs1M-3菌株经由菌丝融合试验结果发现,Rs1M-3菌株中2.0 kb dsRNA片段可经由菌丝融合而转移,融合试验中获得的6个融合成功的菌株与2个未融合成功的菌株在生长速度上并没有差异,但是6个带有2.0 kbdsRNA融合菌株在色素产生与菌核数目比未带有2.0 kb菌株少,初步认为2.0 kb dsRNA片段对色素产生、菌核数目多寡有影响.在Rs1M-3菌株中可以分离到球形、直径大小约20～25 nm的类似病毒颗粒(virus-like particle,VLP)其分子量大小约为60-70 kDa左右,此外经由Rs1M-3中类似病毒颗粒直接抽取病毒核酸进行电泳分析,发现其类似病毒颗粒的核酸为dsRNA,且两条分子量相近约2.0 kb dsRNA片段大小与直接由Rs1M-3菌丝中所抽取到的dsRNA是一致的.从本实验初步研究证实dsRNA可经由菌丝融合传播,2.0 kbdsRNA可能影响菌株菌核的形成且有病毒颗粒存在,对于dsRNA在水稻纹枯病菌上的作用与关系及其属于何属病毒有待未来更进一步的研究.     

棉铃虫核型多角体病毒朝鲜分离株BamHI-Ⅰ片段的核苷酸序列分析

对在朝鲜首次分离得到的棉铃虫核型多角体病毒朝鲜株(HaSNPV-KO)基因组BamHI-Ⅰ片段的全序列进行了测序与分析．该片段全长1．895kb．包括p26基因．p10基因及p74基因的3′末端序列．p26基因位于户10基因的上游．排列方向与p10基因相同，该基因的编码区大小为803bp，编码267个氨基酸，p10基因的编码区大小为261bp，编码87个氨基酸．p74基因的排列方向与p10和p26基因相反．棉铃虫核型多角体病毒朝鲜株与棉铃虫核型多角体病毒中国株(HaSNPV-g4株)的p26基因序列的同源性为99．8％，两个分离株的p10基因序列完全相同，而p74基因3′末端序列的结果有99．4％的同源性．朝鲜株与美洲株(HzSNPV)的p26和p10基因序列的同源性分别为98．8％，98．7％，而p74基因3′末端序列有97．9％的同源性．     

青岛近岸水体夏冬季浮游病毒、细菌分布特征及其与环境因子的关系

应用平板涂布培养计数法及荧光显微镜计数法,研究了青岛近岸海域可培养异养细菌数量,浮游病毒、细菌丰度及生物量的分布特征,探讨了它们与温度、溶解氧、叶绿素a、硝酸盐和磷酸盐之间的关系.结果表明:夏、冬两季青岛沿岸可培养异养细菌数量介于1.01×104～183.54×104cfu/L之间,其分布随温度、叶绿素a变化不明显,而与海水硝酸盐含量显著正相关,硝酸盐是可培养异养细菌数量的主要限制因子.调查海区浮游细菌丰度介于1.00×109～8.48×109cells/L,细菌生物量介于14.19～131.95 μg/L,浮游细菌丰度与温度呈显著正相关关系,温度是造成浮游细菌季节分布差异的重要因素之一;冬夏季浮游病毒丰度介于2.39×1010～22.02×1010VLPs/L之间,浮游病毒丰度变化主要与海水溶解氧、磷酸盐含量及浮游细菌丰度有关,夏、冬两季表层浮游病毒丰度总体呈现近岸高于远岸的趋势,而底层则表现出远岸高于近岸的趋势.     

钝顶螺旋藻Fe-SOD基因的克隆及序列分析

参照GenBank中Fe-SOD基因序列,根据SOD的保守区域设计引物,以钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)基因组DNA为模板,PCR扩增获得大小为528 bp的片段.序列分析表明,其与集胞藻(Synechocystis sp.PCC 6803)、念珠藻(Nostoc commune DRH1)等物种的Fe-SOD基因的同源性分别为75%、71%,且由该序列推导的氨基酸序列与集胞藻、念珠藻等种属的Fe-SOD相比,同源性为68%、67%.表明该片段为钝顶螺旋藻Fe-SOD基因的部分序列.     

一株海杆菌的溶藻活性及基于基因组的溶藻机理分析

为了解新型海杆菌Marinobacter)菌株YWL01溶藻活性及其可能的溶藻机理YWL01与常见的赤潮藻中肋骨条藻Skeletonema costatum)混合培养, 通过肉眼、光电镜观察及藻叶绿素a浓度测定来评估溶藻活性采用Illumina Miseq测序技术测定YWL01基因组将预测基因的蛋白序列分别进行BLASTP比对注释信息分析其可能的溶藻机理结果表明YWL01可直接溶藻藻液颜色由黄褐色逐渐变淡藻细胞裂解藻叶绿素a浓度明显降 低YWL01基因组中许多与溶藻相关的基因     

对虾病毒病研究现状

本文就近几年来对虾病毒的研究进展与动态进行了概述,具体介绍了陆续报道的20余种对虾病毒病原的中英文名称和核酸性质,对7种主要对虾病毒的宿主范围、临床症状、病理特征以及分子生物学方面的研究作了详细的介绍。根据目前还未发现有效治疗对虾病毒的药物现状,提出了几种预防对虾病毒病的措施。     

菜粉蝶非包涵体型细小病毒的分离

1978年5月开始,我们从事菜粉蝶(Pieris rapae L.)颗粒体病毒的研究,在用棉小造桥虫(Anomis flava F.)核型多角体病毒交叉感染菜粉蝶幼虫的过程中,从患病幼虫超簿切片的中肠表皮细胞发现一种非包涵体的细小病毒,多集中于上皮细胞内,亦散呈于其它组织和细胞质中,呈典型的晶体点阵排列(图1)。病虫体液经差异离心,提纯得到病毒粒子。从电镜观察呈球状,直径为23.5nm(图2)。用二苯胺法测定,其核酸为 DNA。感染试验     

褶纹冠蚌肝脏线粒体DNA的初步研究

对褶纹冠蚌肝脏线粒体mtDNA进行了提取,纯化,内切酶分析和电镜观察。BamHI和Bgl I单酶切结果分别产生两个和三个片段,测得其分子大小为15.49kb,分子量为9.57×10~6。电镜观察显示mtDNA呈环形,大小为15.40kb。褶纹冠蚌肝脏DNA与其它动物的mtDNA在形状和大小上相似。     

丙型肝炎病毒NS5B基因在昆虫细胞中的表达

将含有丙型肝炎病毒（HCV）NS5B基因的转移载体pBlueBac5B与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染Sf9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5B基因的重组病毒AcNS5B.提取重组病毒基因组DNA进行Southern分析,发现有一条1.8kb的DNA片段与标记的探针发生杂交.AcNS5B感染Sf9细胞后,在细胞中表达了分子量为66×103的蛋白,用Westernblot方法检查这种蛋白质,能与兔抗HCVNS5B抗血清发生特异的强烈反应.     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

浙江省桃花水母遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术对浙江省杭州、宁波、温州和金华4个地区桃花水母群体的遗传多样性进行了分析,从80个随机引物中筛选出10个引物对4个群体28个个体的基因纽DNA进行扩增,共检测到230个位点,分子片段在200-2000bp之间,其中多态位点124个,占53．91％;群体间最大的遗传距离为0．6506,最小的遗传距离为0．2451,平均遗传距离为0．4825;各群体的多态位点比例俨）为27．78％-76．47％,平均杂合度（H）为0．0998-0．2977,shannon多样性指数（I）为0．1500-0．4390．整个群体的H,I和遗传分化指数（Gst）分别为0．2610、0．3931和0．2249．研究结果表明：桃花水母的遗传多样性较丰富,其中宁波象山和杭州玉泉群体遗传多样性水平低于整体水平,温州平阳和金华永康群体的遗传多样性水平高于整体水平,且群体内存在较大的遗传分化．     

人类新基因MATH2的克隆及其功能初步分析

通过测序和采用生物信息学分析方法 ,从人胎脑 c DNA文库内得到了一条长 2 .175 kb的 c DNA序列 ,其开放读框编码含 337个氨基酸的蛋白 .推论该蛋白与鼠 MATH2蛋白有 98%的同源性 ,故将新基因定名为人 MATH 2基因 .推论该基因定位于人染色体 7p14- 15 .Northern杂交结果显示该基因只在人脑内特异表达 ,在1.7kb和 2 .4kb处出现特异性条带 .人 MATH2蛋白可能与鼠 MATH2蛋白具有相似的功能 .     

凡纳滨对虾兰尼定受体基因亚克隆文库的构建及部分序列的测定

将一个含有凡纳滨对虾兰尼定受体基因的fosmid克隆用DNA剪切仪进行片段化处理,回收3～5kb之间的DNA片段连接到pUC118HincⅡ/BAP载体上,构建了适合于鸟枪法测序的亚克隆文库.经鉴定,该文库滴度为5.0×104 cfu.mL-1,重组率达到90%,插入片段大小在3～5kb范围内.随机挑取100个阳性克隆进行两端测序,通过拼接得到一条兰尼定受体基因部分片段,该片段长2 550bp.通过比对分析,发现该基因片段推导的氨基酸序列与果蝇兰尼定受体基因有较高的相似性.     

罗氏沼虾遗传多样性的RAPD研究

采用RAPD技术,对20世纪70年代从马来西亚引进的7对罗氏沼虾后代的养殖群体(简称NY)和90年代从新加坡引进的天然群体的F1与养殖群体交配繁殖的后代(简称NX)的遗传多样性进行了研究.用OPM组随机引物对两个群体的基因组DNA进行分析的结果表明,扩增的DNA片段大小在0.1～1.5kb之间.NY群体内的平均遗传相似度(simiIarity,S)为0.8819,NX群体内的平均遗传相似度(5)为0.5857.他们的遗传变异度(variability,V)分别是0.1181和0.4143.NY群体的变异度明显小于NX群体.这可能与NY群体长时期的近亲间或在小群体内繁殖导致种群退化有关.     

与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定

参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物，从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板，扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列．将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中，转入酵母细胞AH109，进行表型鉴定．然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白，并用体外免疫共沉淀实验进一步验证．研究表明，分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白，分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白．     

稻属核糖体DNA的限制性片段长度多态性

对稻属13个种和Porteresiacoaretata、Leersiaperrieri及Leersiatisseranti共42份材料进行了核糖体RNA基因（rDNA）的间隔序列长度多态性（RFLP）的分析．共发现20种的间隔序列长度变异类型,其中有些类型具有种的特异性．中国药用野生稻的rDNA变异程度很小,疣粒野生稻的rDNA有变异．Leersiaperrieri和Leersiatisseranti的BamHI酶切转录区片段长度为3．90kb,与稻属的3．80kb．不同．     

MYC基因在人类HL－60和CEM癌细胞系中原位表达的研究

以细胞分子原位杂交方法对两种不同类型的人类白血细胞系ＨＬ－６０和ＣＥＭ，以及正常人白细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行了比较研究．结果证明：ＨＬ－６０细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因有异常高水平的表达，而在ＣＥＭ细胞和正常人白血球与淋巴细胞中则没有明显的Ｃ－ｍｙｃ转录产物．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析表明，ＨＬ－６０细胞基因组中Ｃ－ｍｙｃ基因有显著的扩增现象；而ＣＥＭ细胞基因组中的Ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数与正常人血细胞的接近，属正常水平表达。再次证明了ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃ基因的异常高水平表达，与该基因的大量扩增紧密相关．还对两种癌细胞系的癌变机理和细胞原位杂交在基因表达研究中的应用进行了讨论．     

Quox-1基因同源序列在豚鼠精子形成中的表达

以地高辛标记的 Ｑｕｏｘ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的ｃ３ 片段为探针,与豚鼠基因组 Ｄ Ｎ Ａ 作 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交,结果表明,在豚鼠基因组中存在 Ｑｕｏｘ１ 基因同源序列以抗 Ｑ Ｕ Ｏ Ｘ１ 蛋白的特异性抗体对成年豚鼠睾丸、附睾和幼年豚鼠睾丸的组织切片进行免疫组织化学分析,发现在豚鼠精子发生中精子细胞分化为精子阶段有类 Ｑ Ｕ Ｏ Ｘ１ 蛋白表达,提示 Ｑｕｏｘ１ 基因同源序列可能对豚鼠精子发生中的精子形成过程有调控作用