Na+/Ca2+交换调节的La3+跨淋巴细胞膜的定量研究 |
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引用本文: | 魏春英,杨频,王海雁.Na+/Ca2+交换调节的La3+跨淋巴细胞膜的定量研究[J].中国科学B辑,2002,32(4):367-376. |
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作者姓名: | 魏春英 杨频 王海雁 |
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作者单位: | 山西大学分子科学研究所,太原,030006 |
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基金项目: | 国家自然科学基金重大项目资助(批准号:29871020) |
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摘 要: | 利用荧光浓度指示剂fura-2研究了La3+能否利用Na+/Ca2+交换系统进入人外周血淋巴细胞以及La3+Na+/Ca2+交换的影响. 并首次用此方法研究了La3+能否在细胞器(主要为内质网和线粒体)中蓄积. 实验结果表明, 用乌本苷预处理细胞并在无Na+介质中测试, 可明显观察到La3+跨膜进入淋巴细胞, 而且胞内La3+的浓度与胞外的La3+浓度成正比. 但当胞外La3+浓度大于0.4 mmol/L时, 不再观察到340/380 nm荧光比值的变化, 此时细胞内La3+浓度约为1.5×10-12mol/L. 当La3+浓度较大时(0.1 mmol/L)抑制Na+/Ca2+交换操纵的Ca2+的进入, 而较低浓度(0.01 mmol/L)时却刺激Ca2+进入. 另外从实验结果可推测La3+可以被依赖ATP的质膜钙泵泵出胞外. 胞内钙库用离子霉素耗竭后, La3+内流过程中再次加入离子霉素后, 可明显观察到340/380 nm荧光比值增大, 说明La3+在细胞器中有一定程度的蓄积. 在模拟胞内离子组分的缓冲液中(pH = 7.05), fura-2对La3+的检测限为10-12mol/L, 对Ca2+的检测限为10-8 mol/L, 并测得fura-2-La3+的络合比为1∶1, 表观离解常数为1.7×10-12 mol/L.
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关 键 词: | 淋巴细胞 Ouabain 荧光指示剂 La3+ Na+/Ca2+交换 |
收稿时间: | 2001-11-23 |
修稿时间: | 2001年11月23 |
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