| 利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究 |
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| 引用本文： | 赵杰,高美须,潘家荣,兰丽平,睢珂,牟慧,许舒婷.利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究[J].分析测试学报,2013,32(10):1174-1179. |
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| 作者姓名： | 赵杰 高美须 潘家荣 兰丽平 睢珂 牟慧 许舒婷 |
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| 作者单位： | 1.中国农业科学院农产品加工研究所；2.中国计量学院生命科学院 |
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| 基金项目： | 国家“十二五”科技支撑课题（2011BAK10B03）；农业部公益性行业科研专项（201103007） |
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| 摘 要： | 以虾致敏蛋白Pen a 1(Tropomyosin)抗原表位为研究对象,建立了利用Pen a 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法。Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247~284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH(匙孔血蓝蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)偶联制备人工免疫抗原(Peptide-KLH)和人工包被抗原(Peptide-BSA),免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱(HiTrap rProtein A FF)纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B(CNBrActivated Sepharose 4B)进行偶联。ELISA(酶联免疫吸附试验)测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50(50%抑制浓度)为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pen a 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76%。间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6%~93.6%,亲和柱使用寿命为4次。
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| 关 键 词： | Pen a 1 表位抗体 免疫亲和柱 ELISA |
Purification of Pen a 1 Using Immunoaffinity Column of Polyepitope Antibody Against Pen a 1 |
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| ZHAO Jie;GAO Mei-xu;PAN Jia-rong;LAN Li-ping;SUI Ke;MOU Hui;XU Shu-ting.Purification of Pen a 1 Using Immunoaffinity Column of Polyepitope Antibody Against Pen a 1[J].Journal of Instrumental Analysis,2013,32(10):1174-1179. |
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| Authors: | ZHAO Jie;GAO Mei-xu;PAN Jia-rong;LAN Li-ping;SUI Ke;MOU Hui;XU Shu-ting |
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| Institution: | ZHAO Jie;GAO Mei-xu;PAN Jia-rong;LAN Li-ping;SUI Ke;MOU Hui;XU Shu-ting;Institute of Agro-products Processing Science & Technology,Chinese Academy of Agricultural Sciences;Institute of Agro-products Processing Science & Technology,Chinese Academy of Agricultural Sciences;College of Life Science,China Jiliang University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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