大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌抑癌基因p16、RASSF1A去甲基化作用研究

目的研究大黄素是否可增强5AzA-cdR对胰腺癌Panc1细胞抑癌基因p16、RASSF1A的去甲基化作用。方法采用细胞增殖实验检测不同浓度大黄素对Panc1细胞的生长抑制情况，焦磷酸盐测序PCR（BSP）分别检测大黄素、5AzA-cdR及大黄素联合5AzA-cdR对Panc1细胞抑癌基因p16、RASSF1A甲基化状态的影响，并用荧光定量PCR（FQ-PCR）和Westernblot分别检测p16、RASSF1A及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果大黄素以时间和浓度梯度依赖性抑制Panc1细胞生长。BSP结果显示大黄素具有微弱的去甲基化作用，5AzA-cdR具有一定程度的去甲基化作用，当两者联用时，去甲基化作用更加显著；FQ-PCR和Westernblot结果显示大黄素与5AzA-cdR联用时，p16、RASSF1A的表达水平均较空白对照明显增高（均P＜0.05），DNMT1、DNMT3a的表达水平均较空白对照明显降低（均P＜0.05）。结论大黄素与5AzA-cdR联用可通过降低DNMT1和DNMT3a的表达水平来增强5AzA-cdR对胰腺癌抑癌基因p16、RASSF1A的去甲基化作用。