STRUCTURE IN THE PRECORE REGION OF HEPATITIS B CORE GENE AFFECTING ITS EXPRESSION IN E.coil

Restriction fragments of HBV-DNA, cleaved by endonuclease HhaI,containing HBcAg gene were trimmed by BAL-31 exonuclease to remove different lengths of the precore sequence.They were inserted into plasmid pUR222 at EcoRI site through synthetic linker ligation. Transformants in E.coli BMH7118 showing different levels of HBcAg gene expression were screened and analyzed for their nucleotide sequences in the junction region both by Maxam and Gilbert's chemical degradation method and by M13 chain termination method. Results of sequence analysis of different transformants revealed a partial palindromic (loop and stem) structure, at -7 to -35 nucleotide with regard to ATG of the HBcAg gene as position +1, which has dramatic effect on the level of expression of the inserted gene using the same promoter,SD sequence and identical N-terminus.The amount of HBcAg synthesized differed from 9% in the high expressing plasmid to less than 0.01% of the total cell proteins in the low expressing transformants.The findings w     

人白介素6受体配基结合区的表达及功能鉴定

选取人白介素6受体(hIL-6R)配基结合区作为克隆和表达的目的基因片段,以pET-3b为表达载体构建并筛选出两个重组子pET-6R(B)和pET-6R(B)4,分别编码28kD的IL-6R配基结合区和53kD的配基结合区的串联体。重组子分别转化相应受体菌,经IPTG诱导两种目的蛋白28kD的rIL6R-28和53kD的rIL6R-53分别占菌体总蛋白的50％和30％。表达产物主要以包涵体形式存在,纯化并复性后均能增强IL-6对IL-6依赖株7TD1细胞的生长刺激作用。ELISA结果也表明rIL6R-28和rIL6R-53都具有明显的配基结合活性。     

克隆的乙型肝炎病毒核心抗原基因的起始密码上游序列对表达的影响

本文报道以双脱氧链终止法测定了乙型肝炎病毒(HBV)adw亚型不同表达水平克隆株中核心抗原基因(HBc)的核苷酸序列。结果表明,表达水平的差异主要是由于核心抗原基因起始密码上游核苷酸序列结构的不同所致。低表达克隆株中的HBc在起始密码前形成一个茎状的二级结构;高表达克隆株则在Bal-31外切酶的作用下,此结构被完金切除;中庋表达克隆株此结构的一半被切除。显然,二级结构的存在阻碍了核心抗原基因的转录和转译。从而降低了核心抗原蛋白在大肠杆菌中的合成量。     

在昆虫细胞中克隆与表达人白细胞介素6

本文利用DNA合成及PCR技术对人白细胞介素6(hIL-6)cDNA进行转译优化与扩增,并同杆状病毒载体pVL 1393重组构建了pVL·IL-6载体;通过磷酸钙共沉淀法将pVL·IL-6 DNA与野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(wtAcMNPV)DNA共转染昆虫细胞Sf9,筛选出表达人IL-6的重组病毒rAc·IL-6,经ELISA定量测定rhIL-6表达水平约为1μg/ml;rhIL-6生物活性经IL-6依赖细胞系7TD1测定为10~6u/ml。     

乙型肝炎病毒核心抗原基因结构对其在大肠杆菌中表达的影响

本文将含乙型肝炎(以下简称乙肝)病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)基因的1kbHhaI酶切HBV·DNA片段用BAL-31外切酶切除两端非编码区,连接EcoRI合成接头后插入到载体pUR222的EcoRI位点,转化受体菌后筛到一系列不同HBcAg表达水平的重组体。分析高表达和低表达重组体工作中,发现在同一乳糖启动子、核糖体结合部位(SD序列)和Lac Z基因N端第5氨基酸后连接的HBcAg基因,由于在ATG5′端上游—7至—35核苷酸区有一呈部分迥文的序列,当转录成mRNA时可形成一环茎二级结构,是否用BAL—31酶切除此结构对表达水平影响极大。高表达重组体HBcAg产量可占菌体总蛋白9％,低表达的只为其千分之一。本文并对此现象在原核细胞中表达真核基因的意义进行了讨论。     

PDI,PPI和伴侣分子催化重组人IL-2和GM-CSF的再折叠

在PDI,PPI和伴侣分子催化重组人IL-2和GM-CSF的再折叠研究中,观察到PDI可防止二硫键错误配对和通过链间交联形成聚合体,并可纠正二硫键错误配对的IL-2异构体;PPI可提高折叠反应的速率,而伴侣分子则主要是防止折叠过程中形成聚合体。另外,还观察到它们之间的协同作用。