酶分子在试管内的定向进化及其在手性有机物合成中的应用

本文扼要介绍了当今改进酶分子性能的有效手段———分子定向进化技术的基本方法如易错PCR和DNA洗牌,以及派生的一些新技术的原理与进展,并列举了在手性有机物合成中一些成功的实例,为该领域的研究与应用提供了一些新的信息。     

酶分子在试管内的定向进化及其在手性有机物合成中的应用

本文扼要介绍了当今改进酶分子性能的有效手段——分子定向进化技术的基本方法如易错PCR和DNA洗牌，以及派生的一暨新技术的原理与进展，并列举了在手性有机物合成中一些成功的实例，为该领域的研究与应用提供了一些新的信息。     

DL-对羟基苯海因及其工程菌转化产物的高效液相色谱分析

DL-对羟基苯海因(DL—HPH)可在海因酶的催化下生成N-氨甲酰基-D-对羟基苯甘氨酸(CpHPG),然后在水解酶的催化下最终生成D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG)。目前对CpHPG采用二甲基苯并葸(DMBA)法检测,对D-HPG采用茚三酮反应或贝特洛反应检测。我们建立了分析CpHPG和D—HPG的高效液相色谱方法(HPLC),可在10min内快速完成酶催化产物的定量分析。     

酶分子在试管内的定向进化及其在手性有机物合成中的应用

本文扼要介绍了当今改进酶分子性能的有效手段--分子定向进化技术的基本方法如易错PCR和DNA洗牌,以及派生的一些新技术的原理与进展,并列举了在手性有机物合成中一些成功的实例,为该领域的研究与应用提供了一些新的信息.     

高效液相色谱法测定琥珀酰亚胺及其酶解产物

采用HPLC法,以SymmetryC18 柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),甲醇10mmol/L磷酸缓冲液(pH 6.5)＝595(V/V)为流动相,在波长210 nm检测条件下,使琥珀酰亚胺及其酶解产物琥珀酰胺酸得到了较好的分离.琥珀酰亚胺与琥珀酰胺酸的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均在0.999以上.该方法既可用于定量分析琥珀酰亚胺和琥珀酰胺酸,又能用于测定环二酰胺酶的活性及产物转化率.检测精度可达μg水平;用NMR确认了酶分解物质的分子结构.     

2,3-吡啶二甲酰亚胺及其工程菌转化产物的高效液相色谱检测

建立了利用含D-海因酶的基因工程菌转化吡啶二甲酰亚胺（PDI）生成3-氨基甲酰基-α-吡啶甲酸（α-3CP）的高效液相色谱（HPLC）检测方法。将工程菌pET3a-hyd/BL21（DE3）诱导表达后收集菌体,以PDI为底物,37℃摇床反应30 min后,以13000 r/min离心,取上清液进行HPLC检测。色谱条件：Hypersil^TM GOLD C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为H₂O-乙腈（体积比为90：10,含0.1%（体积分数）三氟乙酸）;检测波长为254 nm。当底物PDI达到饱和浓度时,测得工程菌pET3a-hyd/BL21（DE3）的比活力为0.61 U/（mL·10OD_{600 nm}）。该研究为今后利用生物法制备复杂半酰胺有机物提供了坚实的理论基础。