Expression and Purification of ZNF191（243-368） in Three Expression Systems

ZNF191 （243-368）, a new human zinc finger protein, probably relates to some hereditary diseases and cancers, To obtain adequate amount of ZNF191（243-368） for the study of its property, structure and function, three different expression systems of inclusion-body, glutathione S-transferase （GST）, and hexahistidine （6 × His） were used and compared. Among these systems, the expression level of ZNFI91（243-368） was increased in inclusion body system under a higher isopropylthio-β-D-galactoside （IPTG） concentration, but the non-target proteins were also increased more, which made its purification more difficult and the yield lower. The expression of His-tag fusion protein was almost not affected by IPTG concentration, temperature and inducing time. At a high IPTG concentration the highest expression yield for GST fusion protein was obtained. And the fusion proteins can be partially purified by a single affinity chromatography step. The fusion protein systems show advantages for expression of these proteins.     

左旋多巴酪氨酰酪氨酸二肽的合成及与DNA的相互作用

采用Fmoc固相法合成了左旋多巴酪氨酰酪氨酸二肽(L-dopa-L-Tyr-L-Tyr), 并经RP-HPLC分离和纯化, 通过ESI-MS,¹H NMR和¹³C NMR表征了其结构. 采用紫外光谱、荧光光谱和琼脂糖凝胶电泳研究了左旋多巴(L-dopa)及L-dopa-L-Tyr-L-Tyr与DNA的相互作用. 结果表明, 随着L-dopa和L-dopa-L-Tyr-L-Tyr浓度的增加, 体系的紫外光谱呈减色效应; 根据Stern-Volmer方程可知荧光猝灭方式为静态猝灭; 琼脂糖凝胶电泳中, pUC18DNA的迁移速率变慢. 推测L-dopa和L-dopa-L-Tyr-L-Tyr与ctDNA作用模式为嵌入作用. 与L-dopa相比, L-dopa-L-Tyr-L-Tyr与DNA的相互作用更强.     

乙酰阿魏酰酪氨酰酪氨酸的合成及其与DNA相互作用初探

用固相法合成了乙酰阿魏酰酪氨酰酪氨酸(F-Tyr-Tyr),并用ESI-MS、IR、NMR对其结构进行表征。应用紫外光谱法、荧光光谱法研究了F-Tyr-Tyr与小牛胸腺DNA(ctDNA)的相互作用。结果表明,F-Tyr-Tyr与ctDNA相互作用后体系的紫外吸收呈减色效应,且F-Tyr-Tyr加入后,DNA-EB体系的荧光强度减弱。根据Stern-Volmer方程求出F-Tyr-Tyr-DNA-EB体系的猝灭常数为K SV=6.28×103L·mol-1,猝灭方式为静态猝灭,推测F-Tyr-Tyr与ctDNA的相互作用模式主要是静电结合。     

寡肽转运蛋白特征基元Ⅲ的固相合成与性质研究

人体中寡肽转运蛋白对于小肽和药物的转运极为关键,而保守序列对于维持其结构与功能有着重要作用.为了深入了解寡肽转运蛋白中特征肽段的作用,促进寡肽在药学、医学等领域的应用.采用Fmoc固相合成法合成了寡肽转运蛋白2的特征基元Ⅲ(FYLSINAGS)及其四个突变体,经反相高效液相色谱纯化后,对产物进行了质谱检测.用紫外、荧光光谱及结构模拟方法研究了寡肽与DNA的相互作用.实验结果与结构模拟结果表明,FYGSINAGS碳端的丝氨酸、肽段中丝氨酸残基的数目和位置对于寡肽的结构及其与DNA的相互作用影响较大.将寡肽C-末端的丝氨酸突变为疏水性氨基酸有利于寡肽螺旋结构的形成,丝氨酸全部突变后寡肽与DNA的嵌入作用增强.因而寡肽转运蛋白的特征基元Ⅲ中丝氨酸残基,尤其是C末端的丝氨酸是比较重要的功能性氨基酸残基.