非对称流场流分离-超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱用于过敏原蛋白表位筛选

应用非对称流场流分离（AF4）技术结合超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）对过敏原蛋白表位进行筛选。将选择的过敏原蛋白（虾原肌球蛋白，TM）酶解后经UPLC-QTOF-MS分析，建立蛋白质肽谱。将TM酶解后的肽段与免疫球蛋白E混合孵育30 min，孵育过程中含有抗原表位的特异性肽段与免疫球蛋白E（IgE）结合，未结合的肽段仍留在溶液中。将孵育后的溶液进行AF4分离，已结合的肽段随IgE一起由出口流出，未结合的肽段透过分离通道膜，滤出至废液。收集出口流出的组分进行UPLC-QTOF-MS分析，与蛋白质肽谱匹配，找到特异性肽段，进而检测抗原表位。本研究扩展了非对称流场流分离技术的应用，对过敏原蛋白表位的检测进行了初步探索，为过敏原蛋白表位的研究提供了一种新的研究策略。