高效液相色谱法测定生物转化反应液中N,N'-乙二胺二琥珀酸

建立了高效液相色谱测定生物转化反应液中N,N'-乙二胺二琥珀酸（EDDS）含量的分析方法。采用InertSustain AQ-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以体积分数25%的甲醇水溶液（含有1.0 g/L一水乙酸铜、2.0 g/L四丁基氢氧化铵,以磷酸调节pH至2.80）为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为20 μL,检测波长为254 nm。该方法可在8 min内分离EDDS及其生物合成相关物质（苹果酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸（EDTA）和富马酸）,且峰形良好。EDDS在0.06~0.6 g/L范围内线性线性关系良好（相关系数（r）为0.9995）,平均回收率为100.39%（n=9,RSD=1.15%）。EDDS生物合成反应液中EDDS含量为0.25 g/L,大部分底物被转化为苹果酸（36.56 g/L）;而EDDS的水解反应中富马酸产生较少,形成了3.05 g/L的苹果酸。该方法简便快速,灵敏可靠,适用于EDDS生物合成的研究。