铽(Ⅲ)萤光探针对核酸单链结构的检测

在室温和中性水溶液中,核酸及其天然碱基的萤光量子产率非常低,使用一般仪器不能测出它们的萤光。因此,进行核酸的萤光分析必须借助各种萤光探针。例如常用的菲啶溴红、原黄素.吖啶橙和光神霉素等有机萤光探针,在核酸分子结构的研究中都提供了许多有用的信息。最近发现稀土元素铽的阳离子     

用于识别不同细胞蛋白质组的噬菌体抗体芯片

将4个鼠源噬菌体抗体克隆和1个人源噬菌体抗体克隆偶联到羧基终止的硅片表面,制成分析型模型芯片.挑选健康人体淋巴细胞为正常细胞的代表, HeLa细胞为肿瘤细胞的代表,提取细胞的全部蛋白质并用荧光染料Cy3标记,与制成的分析芯片反应,得到了不同的结合图谱.实验结果表明,以噬菌体抗体为分子感受器的分析芯片可用于识别不同细胞的蛋白质组.     

高密度噬菌体抗体芯片对细胞表面蛋白的识别

采用正常人和白血病患者的白细胞对人源噬菌体抗体库进行淘选, 以获得对两种细胞表面蛋白特异的抗体. 通过pVIII展示系统, 使抗体以多价展示于重组噬菌体颗粒表面, 从上述两组中各挑选出48个克隆分别固定于环氧基片上, 并以空白噬菌体和牛血清白蛋白作为对照, 制成高密度噬菌体抗体芯片. 取来自3名正常人和3名白血病患者的白细胞裂解物样品, 用荧光染料Cy3标记, 与噬菌体抗体芯片反应, 对微阵共聚焦扫描得到的荧光图谱进行分析. 在白血病白细胞表面蛋白的识别图谱中有8组斑点显著不同于正常图谱. 由此表明, 噬菌体抗体芯片可用于识别细胞表面蛋白.     

对生蒴蛤谷胱甘肽转移酶的光谱研究

为深入了解海洋软体生物谷胱甘肽转移酶(GSTs)的性质和特点,以对生蒴蛤肝肠为材料,经GSH亲和层析与反向HPLC分离得到纯化蛋白(adGST),经SDS-PAGE、凝胶过滤与飞行时间质谱分析确定该酶为双亚基组成,全酶分子量50000,亚基为25000.紫外光谱分析表明,该酶在280nm有最大吸收峰;荧光光谱分析表明,该酶的最大激发波长为280nm,在350nm有最大发射峰;用圆二色谱与傅里叶变换红外光谱对该酶进行二级结构测定,结果表明,该酶含有约35%左右的α-螺旋,30%左右的β-折叠,表明该酶属于典型的球状蛋白.     

利用pⅧ展示系统改进噬菌体抗体芯片

将展示单链抗体的重组噬菌体与羧基终止的硅片偶联, 制成噬菌体抗体芯片, 可用于检测多类蛋白质和蛋白质组. 通常抗体被展示于噬菌体外壳蛋白pⅢ上, 由此制备的芯片灵敏度和信噪比较低. 我们选用凝血酶特异的单链抗体为代表, 比较了pⅢ展示系统和pⅧ展示系统制成芯片的检测效果. 由于pⅧ展示系统的融合蛋白拷贝数多, 所受空间位阻小, 大幅度提高了噬菌体抗体芯片的灵敏度和信噪比, 有望用于制备新型蛋白质芯片.