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枯草芽孢杆菌通过超声破壁,(NH4)2SO4分段盐析,DEAE SepharoseFF离子交换层析,Blue SepharoseCL 6B亲和层析,SephadexG 200凝胶过滤等纯化步骤,分离出6 磷酸葡萄糖脱氢酶。经PAGE和SDS PAGE检测为单一蛋白区带,比活1 7375IU/mg,纯化倍数72 7,收率13 6%。凝胶过滤法测定表观分子量220KD,SDS PAGE测定亚基分子量50 5KD,可见该酶是由四个相同亚基构成的四聚体。测定最适pH、温度分别为8 5,37℃,底物G6P的Km值0 177mmol·L-1。考察了部分金属离子及EDPA对该酶活性、紫外、荧光光谱的影响。 相似文献
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从鹰嘴豆中分离得到了三种β-半乳糖苷酶(酶Ⅰ、酶Ⅱ和酶Ⅲ)。将酶Ⅰ和酶Ⅱ进一步纯化,其比活力分别提高了19倍和48倍.酶活力回收率分别为16%和18%,测得它们的表观分子里分别为2.4×104和5.8×104;最适pH分别5.9和5.0,最适温度分别为55℃和45℃.酶Ⅰ水解ONPG和PNPG的KM分别为33×10-2mol·dm-3和60×10-3mol·dm-3;酶Ⅱ水解ONPG和PNPG的KM分别为30×10-3mol·dm-3和60×10-4mol·dm-3.乳糖和半乳糖为该酶的竞争性可逆抑制剂,棉子糖为非竞争性可逆抑制剂.该酶受Hg2+和PCMB强烈抑制和NEM明显抑制,而Mg2+、Zn2+和Ca2+具有激活作用,推知巯基(-SH)是酶活性中心必须基团. 相似文献
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研究了鹰嘴豆发芽种子的β-半乳糖苷酶Ⅰ和β-半乳糖苷酶Ⅱ在催化水解邻硝基苯酚-β-D-半乳糖苷酶促反应中的催化性质和反应动力学,求得不同反应温度的米氏常数KM、最大反应速率rm和反应活化能Ea等动力学参数,并以各种特征化学修饰剂对β-半乳糖苷酶Ⅰ中的活性基团进行了化学修饰。关联修饰情况与酶活性的关系,推知β-半乳糖苷酶Ⅰ中有色氨酸和巯基存在。它们是酶活性中心的组成基团,而该活性中心至少含有1个色氨酸和2个巯基,探讨了酶的活性位及其催化作用机理。 相似文献
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