基于聚乙烯醇/Fe2O3纳米颗粒的纤维素酶固定化

以聚乙烯醇/Fe2O3磁性纳米颗粒为纤维素酶固定化载体, 通过反复冻融的方法成功地实现了纤维素酶固定化. 采用透射电镜、红外光谱仪、振动样品磁强度计对固定化酶复合体进行了表征, 结果显示, 固定化酶复合体为大小约1 μm的微凝胶团, 内含10 nm左右的Fe2O3纳米颗粒. 研究影响固定化因素后发现, 当pH为6, 固定化时间为11 h, 纤维素酶/PVA质量比为4, PVA/Fe质量比为50时, 固定化纤维素酶效果最好. 通过该方法固定后酶活回收率达42%, 酶水解效率显著提高, 经过5次反应后的固定化酶相对酶活力保留50%以上. 因此, 基于聚乙烯醇/Fe2O3纳米颗粒的纤维素酶固定有利于酶的循环使用并显著提高酶的使用效率, 是一种有效固定化纤维素酶的新方法.     

一株拮抗稻瘟病内生霉菌OsiSh-10的筛选与鉴定

从湖南浏阳大围山种植的湘矮早7号水稻中,筛选到一株对水稻稻瘟病菌有显著抑制效果的水稻内生放线菌OsiSh-10菌株.由拮抗菌包覆种子和喷晒水稻叶面的实验表明将该菌喷晒于水稻叶面可以对叶瘟起到明显的控制效果,且喷一次的效果比喷两次的效果好,包覆种子反而使病情指数升高.根据形态特征、培养特征、生理生化、16s rRNA序列比对及进化树构建鉴定OsiSh-10菌株属于白色链霉菌(Streptomyces albus).OsiSh-10是一株具有稻瘟病生防潜力的菌株.     

一株香茅草内生细菌Pantoea ananatis CcSh-1的分离、鉴定及产香条件优化研究

从成熟香茅草的鞘部,分离筛选出一株具有明显清新愉悦香味的内生细菌CcSh-1.通过形态学、生理生化和16SrRNA序列分析,鉴定该菌株为菠萝泛菌(Pantoea ananatis).采用顶空气相色谱质谱联用仪技术,检测出CcSh-1的挥发性组分包含以柠檬醛为主要成分的萜类化合物,与香茅草的产香成分相似.综合考察CcSh-1在液体培养条件下的产香效果和生长状况,初步确定CcSh-1的最适宜培养条件:以牛肉膏为碳源,蛋白胨为氮源,温度30℃,pH 7.0.同时,培养基中加入1%(w/v)香茅草粉末,能够促进CcSh-1产香,体现了内生菌与其宿主间存在相互作用.     

氟尿嘧啶-壳寡糖/硒纳米微球的制备及抑制肿瘤细胞生长活性

为研究抗肿瘤药物与辅药负载于同一药物载体的作用效果, 首先以壳寡糖和广谱抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)为原料通过化学键合合成氟尿嘧啶-壳寡糖前体, 然后以其为模板通过溶胶-凝胶法制备了同时负载氟尿嘧啶和硒纳米颗粒的壳寡糖微球. 采用透射电子显微镜(TEM)、 Zeta电位仪和红外光谱(IR)对制备的微球进行了表征, 结果表明, 微球粒径为433 nm, 硒纳米颗粒包裹在微球内; 对微球包裹药物进行检测发现, 5-Fu装载率为(8.2±0.3)%, 硒装载率为(7.96±0.34)%; 体外缓释检测和细胞实验结果证实, 微球能够缓慢释放2种药物, 其缓释作用能很好地抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长.     

Mn2+驱动的不同长度DNA片段PCR随机突变研究

针对倾向错误的PCR技术中不同目的、不同长度基因的诱变种类一直缺乏准确参考的问题，以酵母spt15基因为研究对象，在标准的PCR反应体系中加入不同Mn2+摩尔浓度（0.125，0.250 和0.500 mmol·L-1）进行倾向错误的PCR，扩增spt15不同长度（分别约为200, 500和700 bp）的DNA片段，研究其突变频率，突变碱基数目及突变类型，以分析不同种类的突变所需的最佳条件.研究结果表明：长片段DNA的PCR突变率对Mn2+摩尔浓度更敏感；模板的长度对DNA PCR突变碱基个数也有较为明显的影响，低Mn2+摩尔浓度有利于单突变；Mn2+驱动的突变有明显的倾向性，其中A→G和T→C的突变居多.     

根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究

利用根癌农杆菌LBA4404介导,建立了丝状真菌简青霉(Penicillium simpli-cissimum)H5的遗传转化系统.潮霉素抗性筛选、PCR和Southern blot分子鉴定等结果表明:筛选获得的转化子能够稳定遗传,外源的T-DNA以单拷贝随机整合到简青霉的基因组中.实验初步研究了农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和共培养时间等因素对转化效率的影响,经过优化后转化体系的效率可达50个转化子/105个孢子.农杆菌介导的遗传转化方法在简青霉上的运用,将为研究该菌的基因工程改造提供强有力的工具.     

桔青霉生产核酸酶P1发酵条件优化研究

选用经紫外线诱变的桔青霉茵株ZM-48，采用单因子和正交试验对生产核酸酶P1的发酵条件进行了优化研究，筛选得到最佳培养基组分为(除麸皮浸出汁为体积分数外，其余均为质量分数)：葡萄糖和麸皮浸出液各3％，蛋白胨和酵母膏各0．3％，K2HPO4和KH2PO4各0．05％，CaCl2 0．08％，MgSO4和MnSO4各0．049／6，ZnSO4 0．02％；发酵条件为：起始pH值5．69，接种量10％，温度34℃，摇床转速180r／min，发酵时间72h。在此优化条件下，桔青霉发酵液的核酸酶P1活力从实验初的140U／ml提高到240U／m1．     

超声波预处理下的稀酸-球磨系统降解桦木木屑

为研究木质纤维素水解技术,利用超声波结合稀酸球磨系统的方法降解桦木木屑.在pH=5的柠檬酸中处理36小时后,桦木木屑的还原性糖产率为130mg/g wood,主要的单糖组分为木糖、葡萄糖和甘露糖.利用X-射线衍射仪和紫外扫描仪对于球磨前后木屑的晶体结构和化学键变化进行表征,结果显示:稀酸球磨系统可以在常温常压下较好地水解木屑的木质纤维素.其中木质纤维素的结晶度明显降低,产生更多的不定形态纤维素,并且木质素部分被破坏,说明超声波预处理过程提高了纤维对化学试剂的可及性,促进木屑的糖化水解.     

用植物提取物筛选与酵母甾醇乙酰化循环相关的物质

为了确定酿酒酵母中乙酰/脱乙酰循环是否参与细胞对某些甾体化合物或其类似物的毒性解除过程,将野生型(BY4742)、脱乙酰酶SAY1单突变体(say1Δ)、乙酰基转移酶ATF2 单突变体(atf2Δ)和SAY、ATF2 双突变体(atf2Δsay1Δ)酵母菌分别培养在含21种不同植物提取物的培养基中,比较其生长状况.结果显示,在含80 mg/mL黄芪提取物的培养基中,细胞生长必须依赖一个完整的乙酰化/脱乙酰循环的作用;而在含20 mg/mL生姜提取物的培养基中,其生长则必须依赖ATF2(乙酰化作用)的缺失.可以推测甾醇乙酰化/脱乙酰循环途径很可能间接参与了某些甾族化合物或其类似物的解毒过程.