多孔硅表面的激光解吸离子化质谱

多孔硅表面的解吸离子化质谱是一种新的生物质谱分析方法。克服了MALDI-TOF-MS中的基体干扰,适合进行了小分子分析。提出了新的样品制备方法,可以扩大测定范围,消除吸附杂质的干扰。发现该方法与多孔硅的光致光特性及表面疏水性无关。具有纳米结构的多孔硅作为该方法中能量的接收器。利用DIOS方法分析了氨基酸、肽、蛋白、糖等样品。此方法用于环糊精合成产物的分析,也得到了较好的结果。     

固定化酶微升反应器与MALDI-TOF MS联用技术用于蛋白质肽谱研究

以甲基丙烯酸缩水甘油酯新型复合纤维素膜为介质固定化胰蛋白酶, 与传统微球固定化酶反应器相比, 提高了分子扩散传质性能. 设计并制成固定化酶微升反应器, 并与基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用应用于蛋白质的肽谱分析. 将所获得的肽质谱图用于蛋白质数据库检索, 可以确定各肽段在蛋白质中的位置. 这种方法尤其适用于高灵敏度和微量生物样品的快速分析, 可以在皮摩尔的水平上对蛋白质的结构进行鉴定.     

复合纤维素膜固定化胰蛋白酶反应器及其应用于蛋白质酶解

合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯-纤维素复合膜,并以此膜为基质共价键合固定化胰蛋白酶,以N-苯甲酰-L-精氨酰乙酯(BAEE)为底物,应用高效液相色谱系统测定了酶固定化膜柱的催化反应特性。研究结果表明:温度、pH值、离子强度、有机溶剂及蛋白变性剂等都对固定化酶的活力有一定的影响。在最适条件下,固定化胰蛋白酶的活力为17800U/g干膜,蛋白载量为3.6mg/g(≈0.15μmol/g)干膜,活性回收率达到52%.固定化酶表现出较高的使用和储藏稳定性,在40℃下,水解BAEE底物24h活力无显着变化。固定化酶膜柱在4℃冷藏保存100d仍保存90%以上的水解活力。固定化酶反应器被应用于蛋白质酶解的肽谱实验。     

硅胶及其衍生物作为基体的激光解吸离子化飞行时间质谱

制备了一种新型无机基体材料(硅胶及其衍生物)用于测定激光解吸离子化飞行时间质谱,建立了一种新的质谱分析方法,并用以解决传统MALDI-TOFMS存在的基体干扰问题.该法适合于低分子量化合物的分析.同时探讨了该新解吸离子化方法的机理.     

Combination of MALDI-TOF mass spectrometry with immobilized enzyme microreactor for peptide mapping

Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MALDI-MS) has been combined with immobilized enzyme microreactor for the rapid, sensitive, and accurate tryptic mapping of protein and polypeptides. The technique utilizes the trypsin microreactor by immobilized enzyme on the glycidyl methacrylate (GMA)-modified cellulose membrane. The membrane micro-reactor was used for the tryptic mapping of cytochrome C and the results were compared with those obtained by using free trypsin. A significant increase in the overall sensitivity of the process was observed using the membrane microreactor, as well as the elimination of background signals due to the autolysis of the trypsin. Further, membrane microreactor digestions were found to be rapid and convenient.