酶分子在试管内的定向进化及其在手性有机物合成中的应用

本文扼要介绍了当今改进酶分子性能的有效手段———分子定向进化技术的基本方法如易错PCR和DNA洗牌,以及派生的一些新技术的原理与进展,并列举了在手性有机物合成中一些成功的实例,为该领域的研究与应用提供了一些新的信息。     

化学与酶促相结合合成并克隆核糖体失活蛋白Gelonin基因

利用已知Gelonin的氨基酸序，逆向推算出整个基因的碱基序列，根据E.coli的密码子偏爱性和后续基因克隆的需要，通过沉默突变设计相应的酶切位点和碱基序列，将整个基因分为四段，每个片段约175－220pb，每一个片段中的互补链从5′末端用化学合成100－120的碱基单链，其中两个链的3′末端有20个互补碱基。利用T4DNA聚合酶酶促添补成双链DNA，用分子克隆技术，分别构建重组子，然后再构建成含整个Gelonin基因的表达载体pET-gel进行表面，经诱导后，获得了一个28000的重组蛋白，并主要以可溶形式存在。     

酶分子在试管内的定向进化及其在手性有机物合成中的应用

本文扼要介绍了当今改进酶分子性能的有效手段——分子定向进化技术的基本方法如易错PCR和DNA洗牌，以及派生的一暨新技术的原理与进展，并列举了在手性有机物合成中一些成功的实例，为该领域的研究与应用提供了一些新的信息。     

醇引起酵母醇脱氢酶构象变化的光谱研究

应用紫外、荧光、ＣＤ谱研究了酵母醇脱氢酶经乙醇、正丙醇和乙二醇作用后的构象变化。结果表明２２０ｎｍ、２８０ｎｍ处的紫外吸收，３３６ｎｍ的相对荧光强度随醇浓度增大而加强。ＣＤ谱显示乙醇、乙二醇引起酶分子在２０８ｎｍ、２２０ｎｍ处的双负峰逐渐加强，正丙醇使２２０ｎｍ处负峰加强，２０８ｎｍ处负峰减弱并红移，直至完全消失。上述数据表明醇浓度增加导致酶分子结构逐步松散，同时伴随着活力的丧失。     

酶电极

酶是具有特殊生物学活性的催化剂,曾被作为一种“生物化学试剂”广泛地用于医学,化学,食品,环境保护等方面的分析检测。但酶具有不稳定,难制备,价格高等缺点,因而它的应用有一定的限制。六十年代发展了固定化酶这一新技术,由于它具有反应快速、性能稳定等特点。这种技术被迅速地引进到分析检测这个领域,以改进用溶液态酶时所遇到的缺点和问题。目前,固定化酶在分析检测中的应用主要有二种方式,一种所谓酶电极(Enzyme Electrode)     

DL-对羟基苯海因及其工程菌转化产物的高效液相色谱分析

DL-对羟基苯海因(DL—HPH)可在海因酶的催化下生成N-氨甲酰基-D-对羟基苯甘氨酸(CpHPG),然后在水解酶的催化下最终生成D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG)。目前对CpHPG采用二甲基苯并葸(DMBA)法检测,对D-HPG采用茚三酮反应或贝特洛反应检测。我们建立了分析CpHPG和D—HPG的高效液相色谱方法(HPLC),可在10min内快速完成酶催化产物的定量分析。     

高效液相色谱法检测弹性蛋白中锁链素

用高效液相色谱技术对弹性蛋白水解液中锁链素进行了测定。单一锁链素,锁链素、酪氨酸、苯丙氨酸混合液及弹性蛋白水解液经Ｃ１８柱分离,甲醇－水（２８,Ｖ／Ｖ）洗脱,紫外检测器２８０ｎｍ检测。锁链素与酪氨酸峰面积比（ＣＡ）和峰高比（ＣＨ）分别为１．４％和３．４％,标准曲线浓度范围０．１６～０．６４ｍｇ／Ｌ时相关系数为０．９９５６。结果表明：上述色谱条件可定量测定弹性蛋白中锁链素含量,无需将锁链素与水解液中其它氨基酸加以分离,而仅需同其它２７５ｎｍ有吸收的组分区分。     

酶分子在试管内的定向进化及其在手性有机物合成中的应用

本文扼要介绍了当今改进酶分子性能的有效手段--分子定向进化技术的基本方法如易错PCR和DNA洗牌,以及派生的一些新技术的原理与进展,并列举了在手性有机物合成中一些成功的实例,为该领域的研究与应用提供了一些新的信息.     

高效液相色谱法测定琥珀酰亚胺及其酶解产物

采用HPLC法,以SymmetryC18 柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),甲醇10mmol/L磷酸缓冲液(pH 6.5)＝595(V/V)为流动相,在波长210 nm检测条件下,使琥珀酰亚胺及其酶解产物琥珀酰胺酸得到了较好的分离.琥珀酰亚胺与琥珀酰胺酸的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均在0.999以上.该方法既可用于定量分析琥珀酰亚胺和琥珀酰胺酸,又能用于测定环二酰胺酶的活性及产物转化率.检测精度可达μg水平;用NMR确认了酶分解物质的分子结构.