成骨肿瘤细胞在纳米氧化钛陶瓷表面的生物活性研究

以羟基磷灰石和氧化镁为晶粒生长抑制剂制备的纳米氧化钛陶瓷为研究对象, 采用体外成骨细胞Ros17/28与材料复合培养的方法, 通过MTT法、荧光染色法和SEM细胞形貌观察等手段综合判断细胞在材料表面的活性, 以此评价纳米氧化钛陶瓷的生物活性. 结果表明, 以羟基磷灰石为晶粒生长抑制剂的氧化钛陶瓷晶体颗粒尺寸达到纳米级, 其生物活性超出了以氧化镁为晶粒生长抑制剂的氧化钛陶瓷和纯羟基磷灰石陶瓷, 具有优异的生物相容性, 是生物活性陶瓷.     

明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能

微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。 但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。 聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。 本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448 μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N'-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。 对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。 结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。     

中药地龙提取液的促成骨作用及对实验性牙槽骨吸收疗效的研究

探讨了中药地龙水提液和醇提液有无促进成骨细胞增殖、分化和基质矿化的作用及对大鼠牙槽骨吸收疗效进行了研究.制备地龙的水相及醇相提取液,以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为体外药效的试验模型,分别通过MTT法,流式细胞术,碱性磷酸酶活性测定,骨钙素检测和Von kossa基质矿化染色法观察上述药物的促细胞增殖、分化、基质矿化作用.以实验牙位龈正中注射脂多糖建立的SD大鼠实验性牙槽骨吸收作为体内药效试验模型,通过组织切片形态学骨密度观察和抗酒石酸酸性磷酸酶染色评价上述药物对大鼠实验性牙槽骨吸收的疗效.结果发现:1 mg·L-1 水提液,0.01 mg·L-1 和1 mg*L-1醇提液能显著促进MC3T3-E1细胞增殖.各浓度的水提液和醇提液均能使S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少.0.01 mg*L-1水提液和1 mg·L-1 醇提液作用于细胞的第1～3 d内、100 mg·L-1醇提液作用第7～9 d内、100 mg·L-1水提液作用第10～12 d内可显著提高细胞骨钙素合成和分泌.0.01 mg·L-1水提液和醇提液,1 mg·L-1水提液可显著促进细胞体外基质矿化.地龙水提液和醇提液组的骨密度均有显著增高,破骨细胞数显著降低.阴性对照组至第30 d时牙槽骨仍可见大量破骨细胞.结果表明:地龙水相和醇相提取物中均存在较高活性的促成骨细胞增殖、分化和基质矿化的物质,且对实验性牙槽骨吸收模型有一定治疗作用,可抑制其牙槽骨吸收,促进成骨活动使其修复重建.     

聚乳酸/中药自然铜复合多孔膜的制备及其性能研究

采用冻干法制备了聚乳酸/中药自然铜复合多孔膜(PPCM),考察了中药自然铜对PPCM形态结构及力学性能的影响.实验结果表明自然铜的加入使PPCM的拉伸强度有轻微下降,但有利于其内孔的形成,并且可以有效地减小其在37℃恒温环境中的热收缩.成骨细胞体外培养实验证明中药自然铜具有促进成骨细胞在PPCM上生长和增殖的作用.     

Fe3+和Fe2+对原代培养的成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酶(ALP)比活性测定、油红O染色和茜素红染色及定量分析,研究了不同浓度的Fe3+和Fe2+对原代培养的成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响.结果表明:浓度为1×10-9～1×10-4 mol·L-1的Fe3+和Fe2+促进成骨细胞增殖,但是在较高浓度1×10-3 mol·L-1时,它们则抑制成骨细胞增殖.与成骨细胞作用48 h,浓度为1×10-8～1×10-4 mol·L-1的Fe3+和Fe2+抑制其分化,但在较低的浓度1×10-9 mol·L-1时则对其分化没有影响:进一步延长作用时间为72 h,Fe3+对成骨细胞分化没有影响,除1×10-6mol·L-1浓度的Fe2+促进成骨细胞分化外,其他浓度的Fe2+则抑制其分化;测试浓度下的Fe3+对成骨细胞向脂肪细胞的横向分化表现为抑制或没有影响,而Fe2+的影响则依赖于浓度和作用时间.在1×10-8～1×10-5mol·L-1浓度范围内,Fe3+和Fe2+对矿化结节的影响表现出相反的效应.在较高浓度(1×10-4mol·L-1)下,它们促进矿化节结的形成,而在较低浓度(1×10-9mol·L-1)下,Fe3+抑制矿化节结的形成,Fe2+则没有影响.结果提示:浓度.作用时间和铁离子的价态都是影响Fe3+和Fe2+生物效应(从毒性到活性,从损伤到保护,从上调到下调)转变的关键因素.     

硝酸锶对原代培养的小鼠成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酶(ALP)比活性测定、油红O染色、Ⅰ型胶原测定以及矿化结节染色及定量分析等方法,研究了不同浓度的硝酸锶对原代培养的成骨细胞增殖、分化、矿化功能以及横向分化为脂肪细胞的影响。结果表明:硝酸锶对成骨细胞增殖、分化、矿化功能以及横向分化为脂肪细胞的影响与作用浓度和时间密切相关,但没有呈现出剂量依赖性。结果提示,硝酸锶对骨代谢的影响是复杂的,其具有保护还是损害作用取决于作用浓度和时间,而且它们是影响硝酸锶生物效应(从损伤到保护)转变的关键因素。     

微量元素锌和钙对大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞体外培养增殖分化的影响

所用的细胞按照Luben改良的方法培养。用S．D．大鼠颅盖骨，以胶原酶、胰蛋白酶消化，收集细胞，在10％胎牛血清的199培养液中。于5％CO3、37℃饱和湿度培养，在条件液中。分别加不同浓度的微量元素锌和钙，从形态学及生化指标探讨，证实微量元素锌和钙对成骨细胞样细胞的增殖分化都有明显的髟响。     

鹿茸寡肽的制备及其促成骨细胞的增殖作用

从梅花鹿鹿茸中提取了天然鹿茸总多肽(VATP). 在进一步分离纯化的过程中, 筛选出具有促进成骨细胞增殖的高活性肽组分(VAP-B), 并通过制备型HPLC对其纯化, 得到了分子量分布约为200~600的小肽活性组分(VAP-B2). 细胞周期分析结果表明, 鹿茸肽VAP-B2组分促进了人成骨肉瘤细胞OS-732的周期转化, 使其细胞周期S期细胞指数明显增加, 即表现为S期DNA含量明显提高. 碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果表明, 随着鹿茸肽VAP-B2剂量的增加, ALP的活性明显增加. 这与成骨细胞增殖分化及成熟过程中, 细胞的周期性变化和骨形成标志物碱性磷酸酶水平的明显增高相符.     

钛材表面疏水图案化对成骨细胞生长的影响

本文通过共沉淀法合成纳米羟基磷灰石,然后采用电泳沉积法在钛材表面沉积羟基磷灰石涂层,并通过氟硅烷浸泡法构建疏水化图案,对制得的样品采用透射电镜、扫描电镜、X射线衍射、红外光谱仪、接触角测量仪进行表征,并与成骨细胞共培养,采用MTT、ALP法检测疏水图案对成骨细胞生长的影响。结果表明,本实验成功在钛材表面构建了疏水图案,且这种图案对成骨细胞生长有一定的抑制作用,通过构建不同的疏水图案,可以达到调控成骨细胞生长方向的作用。