高分子载体α，β－聚（羟烷基）－DL－天冬酰胺的合成及分子量测定

以ＤＬ－天冬氨酸为单体，聚合成ＤＬ－天冬酸胺，接入不同悬臂氨基乙醇，氨基内醇，氨基丁醇，得到α，β－聚（羟烷基）－ＤＬ－天冬酰胺，分别是α，β－聚（２－羟乙基）－ＤＬ－大冬酰胺（ＰＨＥＡ），α，β－聚（３－羟丙基）－ＤＬ－天冬酰胺（ＰＨＰＡ），α，β－聚（４－羟丁基）－ＤＬ－天冬酰胺（ＰＨＢＡ）。用红外光谱表征了高分子载体，比较了不同投料比对反应的影响；测定了高分子载体的比浓粘度，建立了ＰＨＰＡ的Ｍａｒｋ—Ｈｏｕｗｉｎｋ方程。     

甲醛活化壳聚糖制备固定化l—天冬酰胺酶

研究了以甲醛活化的壳聚糖为载体固定化ｌ－天冬酰胺酶，其活力回收可达到１１３％，比用以戊二醛为交联剂进行固定化的活力回收要高出五倍多。分别从缓冲液的ｐＨ值及甲醛用量等方面进行了固定化ｌ－天冬酰胺酶的条件优化，并且对固定化酶的性质作了探讨。     

天冬酰胺合成酶B抑制剂高效液相色谱筛选方法的建立与应用

建立了一种快速、高效测定天冬酰胺合成酶B(AS-B)酶活性的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。酶反应体系中的氨基酸经2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生,通过RP-HPLC测定酶反应体系前后底物及产物的变化来分析酶的活性。采用的色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 6.2)-乙腈(体积比为15:85)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长365 nm,于6 min内实现了各组分的基线分离。通过该方法测定反应动力学参数进行AS-B的抑制定量分析。将已知AS-B抑制剂L-谷氨酸-γ-甲酯作用于酶反应体系,测得的抑制剂的抑制常数与文献值相接近,证明该方法可用于AS-B抑制剂的筛选。     

天冬酰胺丙酮叉在多肽合成中的应用

L-天冬酰胺(Asn)与丙酮在KOH的甲醇溶液中反应得到具有丙酮叉结构的环化天冬酰胺[cAsn(acetone)]。该化合物在缩合剂1-乙基-3-(3′-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC I)和1-羟基苯并三氮唑(HOB t)存在下,与芴甲氧羰基(Fmoc)保护的酪氨酸(Fmoc-Tyr(B zl)-OH)、苯丙氨酸(Fmoc-Phe-OH)和丙氨酸(Fmoc-A la-OH)在二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应得到新的二肽Fmoc-Tyr(B zl)-cAsn(acetone)-OH、Fmoc-Phe-cAsn(acetone)-OH和Fmoc-A la-cAsn(acetone)-OH,收率分别为35%、30%和30%。其中Fmoc-Tyr(B zl)-cAsn(acetone)-OH与苯丙氨酸二肽酰胺(H-Phe-Phe-NH2)在相同的缩合条件下反应生成四肽Fmoc-Tyr(B zl)-cAsn(acetone)-Phe-Phe-NH2,收率为70%。乙酸中Pd-C催化加氢可同时脱去酪氨酸残基上的芴甲氧羰基和苄基(B zl)保护基,首次得到内吗啡肽-2(endomorph in-2,H-Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2)的环化天冬酰胺类似物H-Tyr-cAsn(acetone)-Phe-Phe-NH2,收率为60%。应用核磁共振、红外、质谱和高分辨质谱测试技术对目标产物和中间体的结构进行了表征。小鼠醋酸扭体法对类似物的镇痛活性进行了初步的研究。结果表明,当剂量为2.4×10-5g/Kg时,镇痛抑制率为45%。     

从N-Fmoc-L-α-氨基酸合成同系物N-Fmoc-L-β-氨基酸(II)^#

描述了应用Arndt-Eistert反应合成两种含酰胺基的N-Fmoc-L-β-氨基酸的方法,讨论了在Wolff重排过程中,N-Fmoc-L-α-谷氨酰胺重氮甲基酮和N-Fmoc-L-α-天冬酰胺重氮甲基酮的各自特点及反应过程中生成的副产物。