凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析

采用流式细胞术与特异荧光探针JC-1相结合，在单细胞水平对X射线和化疗药物处理后的食管癌EC6细胞线粒体膜电位的变化进行了分析，凋亡细胞的线粒体膜电位下降，红色荧光减弱，随着剂量的增加，凋亡细胞的比例增大。     

铅的肾脏毒性与细胞凋亡的关系

为了解铅的肾脏毒性以及与细胞凋亡的关系，建立原位末端标记法检测细胞凋亡。用醋酸铅腹腔注射染毒大鼠，染毒剂量分别为５，１０，２０ｍｇＰｂ＾２＋／ｋｇ体重，１次／天，共染毒３天，对照组腹腔注射醋酸钠２０ｍｇ Ｎａ＾＋／ｋｇ体重，结果，于染毒第二天开始，各染毒组动物体重的增长速率已开始下降，与对照组比较差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。肾脏脏器系数，染毒组显著高于对照组（Ｐ〈０．０５）。染毒鼠的肾脏组织凋亡     

雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及其机制的研究

探讨雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用及其机制.采用台盼蓝染色法、透射电镜和流式细胞术,分别检测不同浓度和作用时间下,雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡以及对细胞Fas、FasL和NF-κBP65表达的影响.结果表明:0.5～2.5 μmol·L-1浓度雷公藤红素作用24 h,HL-60细胞凋亡率均明显高于不加药物的对照组(P<0.05).当雷公藤红素浓度为1.5 μmol·L-1时,细胞凋亡率最高并呈时间依赖效应.雷公藤红素作用的HL-60细胞,可呈现典型的细胞凋亡形态学改变.1.5 μmol·L-1雷公藤红素可明显提高Fas和FasL阳性HL-60细胞百分率(P<0.05),但抑制细胞NF-κBP65的表达(P<0.05).从而得出结论:雷公藤红素可有效地诱导HL-60细胞凋亡,其机制与雷公藤红素可上调Fas、FasL基因及下调NF-κB基因表达有关.     

内质网应激对碳离子辐照宫颈癌HeLa 细胞的影响

利用不同剂量的碳离子辐照二硫苏糖醇(2.5 mmol/L) 预处理的HeLa 细胞,探讨了内质网应激反应对碳离子辐照宫颈癌HeLa 细胞的影响。实验发现:与单独辐照组相比,二硫苏糖醇联合碳离子辐照后细胞的存活率下降,而凋亡率增加;二硫苏糖醇联合碳离子辐照加重了碳离子辐照引起的细胞周期阻滞;且联合辐照组的自噬被明显激活。结果表明,持续的内质网应激可改变宫颈癌HeLa 细胞对碳离子辐照反应,且二硫苏糖醇可能通过影响HeLa 细胞的自噬性细胞死亡通路发挥作用。To investigate the effect of endoplasmic reticulum stress on HeLa cells to 12C6+ ion irradiation,HeLa cells were pretreated with 2.5 mmol/L dithiothreitol and irradiated by 12C6+ ions with different doses.The results showed that, compared with IR alone, dithiothreitol combined with carbon ion irradiation caused HeLa cell survival decreased, and the apoptosis increased. Moreover, dithiothreitol and carbon ion radiation combination treatment led to a significant increase of G2/M phase, and autophagy was activated obviously in combination treatment group. The results imply that continuous endoplasmic reticulum stress can change the response of HeLa cells to 12C6+ irradiation, and dithiothreitol may affect HeLa cells through the autophagy cell death pathway.     

近紫外光辅助4-硫脱氧胸苷抗癌作用的研究

4-硫脱氧胸苷（4-thiothymidine, STdR）作为硫代类核苷类似物的典型代表,其具有较强的亲脂特性和强的紫外长波长（315～400 nm,UVA）吸收。这些特性使得4-硫脱氧胸苷能够靶向进入肿瘤细胞并以核苷酸的形式嵌入DNA链中,在近紫外UVA的辅助下发生光化学反应,损伤肿瘤细胞DNA,诱导细胞走向凋亡途径,达到抗癌的目的。本文系统地介绍和评述了长波紫外光/含硫脱氧胸苷（UVA/thiothymidine）的抗癌疗法及原理,探讨4-硫脱氧胸苷与人血清蛋白间的相互作用,为这种新型光化学疗法在今后的癌症治疗中提供基础的理论依据。     

5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞系SW 620凋亡的傅里叶变换红外光谱研究

探索红外光谱监测肿瘤细胞凋亡的可行性及初步分析。采用结肠癌细胞系SW620作为诱导细胞模型,MTT法确定最优5-FU诱导浓度, 无血清饥饿培养协同细胞周期阻滞在G1和S期,傅里叶显微红外光谱仪(FTIR) 联合流式细胞仪(FCM)对SW 620细胞和凋亡的SW 620细胞12 h、早期凋亡(24 h)和晚期凋亡(48 h)的峰位、相对峰强等指标进行比较分析。光谱分析结果显示SW 620对比凋亡细胞有以下特征：(1)与脂类相关谱带1 740 cm-1相对峰强比I_{1 740}/I_{1 460}明显降低(p<0.05),表明凋亡细胞中脂类相对含量增多。(2)与氨基酸残基相关谱带1 410 cm-1,I_{1 460}/I_{1 460}在凋亡早期和晚期明显升高(p<0.05), 与丝、苏氨基酸相关谱带1 120 cm-1 向高波数移动,I_{1 120}/I_{1 460}明显升高(p<0.05),表明凋亡细胞中DNA双螺旋解链,氨基酸残基增多。(3)DNA的反对称伸缩1 240 cm-1向高波数移动,表明凋亡细胞中核酸分子构象发生改变。(4)与核酸多糖1 040 cm-1相关谱带在凋亡的24和48 h出现,向高波数移动,I_{1 040}/I_{1 460}在凋亡晚期降低(p<0.05)。初步研究结果表明傅里叶变换红外光谱分析可能成为实时无创监测肿瘤化疗的有效方法。     

利用三通道实时荧光成像方法研究单个活细胞凋亡与胞浆pH值变化的关系

利用双波长分光器(Dual-View)和自制滤光片滑块,在基于像增强型电荷耦合器件(ICCD)的实时/快速荧光成像系统基础上,建立了一种基于单个ICCD的三通道实时荧光成像方法,同时发展了相应的图像校准处理方法用于消除光谱串扰的影响,并将该方法应用于单个活细胞的研究。利用Annexin V-FITC和SNARF-1两种荧光探针进行双标记,在单细胞水平上对亚硝基谷胱甘肽(GSNO)诱导小鼠胸腺细胞凋亡与其胞浆pH值变化的关系进行实时研究。结果揭示了GSNO诱导的细胞凋亡与细胞发生自发凋亡时胞浆pH值有不同的变化规律,为这种三通道实时荧光成像方法在生物医学领域的应用展示了广阔的前景。