箭叶淫羊藿中5种黄酮类化合物的反相色谱分离制备

用半制备型反相高效液相色谱(RPLC)对箭叶淫羊藿提取液中的5种主要黄酮类化合物进行了分离制备,优化了分离条件。每次进提取液35mL,经一步RPLC便可得到纯度均大于95％的化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ,经过10次制备,共制得93mg Ⅰ、71mgⅡ、296mgⅢ和487mg Ⅴ。而经一步纯化得到的化合物Ⅳ的纯度较低,再经第二步RPLC纯化后可使其纯度大于95％,最后得到64mgⅣ。经波谱分析鉴定所得的5种化合物分别为hexandraside F、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿甙,均为8-异戊烯基黄酮类化合物,其中hexandraside F是首次从淫羊藿属植物中分离得到的。     

高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质

Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E. coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8 mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51 g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4 mol/L脲、1.8 mmol/L 还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH 7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。     

多孔环炉技术的研究(Ⅱ)——在疏水毛细管载体上持续冲洗法机理的探讨

本文提出了一个计算冲洗液在毛细管载体上疏水能力和估算冲洗速度的模型,讨论了改变冲洗液表面张力对冲洗速度影响的因素,以实验数据对该模型做了定性检验,该模型为多孔环炉技术的开发奠定了基础。     

离子交换—三孔环炉法测定水中镉、铅、铜

本文研究离子交换分离富集水样中微量元素镉、铅、铜及在三孔环炉上进行测定的最佳工作条件。该法具有干扰少、灵敏度高、选择性好等优点。检测下限Cd~(2+)为5ng,pb~(2+)、Cu~(3+)为10ng,可用于天然水及一些工业废水的分析。     

环爐技术用滤纸的选择

用于环炉技术的滤紙貭量应該較高:(1)必須是定量滤紙,不含杂貭,(2)扩散速度适中,不太快也不太慢,(3)組織均匀,所成斑点很圆。鉴于这一技术在国內漸为各方面所注意,大家都很关心国产滤紙能否使用的問題,我們对21种国产和进口滤纸进行了以下試驗:     

盐浓度对反相液相色谱中溶质保留行为的影响

本文以反相色谱中的溶质计量置换保留模型研究了流动相中盐浓度对溶质保留行为的影响,指出这种影响是由于盐的加入降低了水在流动相中的摩尔分数。实验证明了这一理论模型所预计的结果,即logk’与水的摩尔分数倒数的对数—log(1/[D_0]_水)有线性关系;同时与疏水溶剂化理论有关的“盐的浓度与logk’间的线性关系是由于前者与溶液中表面张力间的线性关系所致”的论点做了比较,证实后者的提法是欠妥的。     

用计量置换模型研究镧系元素“四素组”效应

本文以SDM_(-R)中的各物理参量为基点,描述镧系元素的“四素组”效应,讨论“四素组”效应在色层分离中产生的原因及机理,将参量Δ1gI定义为分离因子;并讨论影响N值的各种因素。     

一种液相色谱分离与质谱鉴定白血病K562细胞蛋白的方法

分别通过3种色谱模式:反相高效液相色谱(RPLC)、弱阴离子交换-反相高效液相色谱(WAX-RPLC)和排阻-反相高效液相色谱(SEC-RPLC)对K562细胞的蛋白质进行分离,收集的色谱馏分采用基质辅助电离解析时间飞行质谱(MALDI-TOF MS)进行鉴定后,比较所获得的蛋白质数据.结果显示:当选择SEC-RPLC模式构建K562细胞蛋白质图谱时,检测到的蛋白质数目最多,信息最为全面.此法的建立为白血病的临床研究提供了一种有效的手段.     

连续棒状弱阳离子交换柱的合成及其对蛋白质保留行为

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂在空管柱内就地聚合制备了一种聚合物连续棒状色谱基质,并通过“在线”化学改性将其修饰为弱阳离子交换柱。考察了该色谱柱的孔结构特征、表面亲水性能、对标准蛋白的分离效果和ｐＨ值对保留行为的影响以及色谱柱的重现性。结果表明,该色谱柱对蛋白的分离性能及重现性良好,柱寿命不短于半年。对溶菌酶的活性回收率达９６．２％。流动相流速为８．０ｍＬ／ｍｉｎ条件下     

蛋白折叠液相色谱法复性和纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞集落刺激因子

用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸（IDA） Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线性梯度洗脱rhG-CSF。该法仅通过一步PFLC分离,减少了复性过程中rhG-CSF的聚集,复性后的rhG-CSF的比活性为1.8×108 IU/mg,纯度为97%,质量回收率为32%。