突变人GM-CSF基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的高效表达质粒,将其表达产物用于分离纯化的研究。方法用人外周血单核细胞获得总RNA作为模板和修饰的5′端密码子的引物经RT-PCR反应扩增到人GM-CSF基因,插入温控表达载体pDH构建了突变的hGM-CSF表达质粒,并将在E.coli中获得表达的突变rhGM-CSF包含体8 mol/L脲提取液进一步用离子交换色谱柱分离纯化。结果rhGM-CSF在大肠杆菌表达占菌体总蛋白量的22%,用弱阴离子交换色谱对rhGM-CSF的工程菌表达产物8 mol/L脲提取液直接经35 m in分离纯化,所得产物纯度可达95%,质量回收率可达到60%。结论这表明用离子交换色谱可进行rhGM-CSF的复性与同时纯化。     

高效疏水色谱法的新进展

本文着重对以硅胶为基质的高效疏水色谱法的理论、填料、流动相及应用的新近发展进行了评述。     

液—固吸附体系中计量置换吸附模型的热力学研究

研究了液－固吸附体系中溶质计量置换吸附过程中的自由能变，推导出了新的表示溶质种类、溶质浓度和溶剂对Ｇｉｂｂｓ自由能变贡献的数学表达式，并阐明了该表达式中各种参数的物理意义。将用通常方法测定的自由能变分为与溶质吸附和溶剂解吸附有关的两个独立的自由能变，推导出了液－固吸附体系中溶质计量置换吸附模型的两个线性参数βａ和ｑ／Ｚ对绝对温度倒数的线性关系，又将吸附过程中溶质的焓变和熵变分成两个独立的分量。用…     

液相色谱中的溶质计量置换保留模型

自从1983年笔者与Fred.E.Regnier教授合作提出了色谱中溶质计量置换保留模型(Stachiometric Displacement Model of Retention,以下简称为SDM-R)以     

基因重组人Gamma-干扰素发酵和提取优化工艺的研究

对基因重组人Ｇａｍｍａ－干扰素（ｒＩＦＮ－γ）ＰＢＶ２２０ＤＨ５α工程菌株的发酵工艺进行了研究．结果表明,采用在２５０ｍＬ摇瓶中装液量为１５０ｍＬ,按照１∶４０的稀释比进行两次扩大培养,并在大肠杆菌生长最为活跃的对数生长期内进行诱导表达效果最好．收集菌体以后,将菌体进行冷冻和超声破碎,并在２．０ｍｏｌ／Ｌ脲中浸泡８ｈ～９ｈ以清洗杂蛋白,然后用７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍（Ｇｕ·ＨＣｌ）提取．在优化工艺条件下,ｒＩＦＮ－γ的收量为９．０×１０６ＩＵ／Ｌ～１２．８×１０６ＩＵ／Ｌ,总蛋白为７９．５ｍｇ／Ｌ～１２７．２ｍｇ／Ｌ,比活为５．６×１０５ＩＵ／ｍｇ～８．０×１０５ＩＵ／ｍｇ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳含量可达６０％～８０％,使ＰＢＶ２２０ＤＨ５α工程菌株获得了高效表达．     

用计量置换吸附模型研究液-固色谱中的溶质保留机理

本文以表面物理化学吸附模式为基础, 推导出液-固色谱中溶质计量置换保留模型. 与其他模型进行比较的结果证明本模型为最佳. 提出用参数j作为区别反相色谱和液-固色谱的判据.     

疏水色谱法的进展及其在生化研究中的应用

着重评述了疏水色谱法的理论研究及疏水固定相中无机填料、有机填料、非多孔填料以及大孔膜的新发展,并对疏水色谱法在生物大分子的分离、纯化和生化研究中的应用,包括在蛋白质复性、折叠和分子构象变化等方面的应用作了介绍,全文包括６２篇文献和一张表格。     

胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现,两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时,得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。     

用前沿色谱法测定蛋白质吸附等温线时增浓方式的研究

用连续前沿色谱法和断续前沿色谱法测定了七种标准蛋白在疏水色谱填料上的吸附等温线,两种方法之间存在着一定的差别。从流出曲线突跃处斜率测定的不确定性、色谱过程中动力学因素和实验方法本身存在的问题等几个方面探讨了误差的来源,指出了可能解决这一问题的途径。