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Study on the stoichiometry and affinity of the arsenicals bound to HSA is an important step toward a better understanding of arsenic toxic effects. After incubation of AsIII or AsV with HSA at the physiological conditions (pH 7.43 and 37 °C), the free arsenicals and arsenic-HSA complexes were separated and detected by the combined techniques of microdialysis and liquid chromatography with hydride generation atomic fluorescence spectroscopy (MD–LC–HGAFS). The decrease of AsIII peak response rather than AsV indicated that HSA reacted with AsIII but not AsV. The binding plots indicated that the binding between HSA and AsIII was in Scatchard pattern when the concentration ratios of AsIII to HSA were ≤1:1. The strong binding sites (n 1) were 1.6 and the stability constant (K 1) was 1.54 × 106 M−1. When the concentration ratios of AsIII to HSA were >1:1, the binding was in Plasvento pattern with the stability constant K 2 ≅ 0 and no specific binding of AsIII with HSA. On the contrary, AsV did not show binding with HSA. The results showed that AsIII reacted with HSA more readily than AsV, which provides a chemical basis for arsenic toxicity.
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