菜茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）cbn1和cao突变基因的对比分析及CAO基因的分子定位

用电击法将带有CAO基因片段的Psp109-E8质粒转入到莱茵衣藻cbnl-48mt^＋基因突变株中后．转化子中出现了叶绿素b的恢复性表达，初步验证了丧失合成叶绿素b能力的cbn1和cao突变基因具有等位性的属性；将1641-1b（cbn1-43mt^＋）和CC-1354（cbn1-48mt^＋）突变株分别与CBS5（cao5mt^-）突变株的分离子CBS5-c1和CBS5-c5进行杂交．并通过随机分析方法分离获得1842个减数分裂后代分离子．经检测其中均没有发现有野生性表型的分离子．初步证明cbn1和cao4突变基因问有着非常紧密的连锁性；从上述杂交系分离获得的50多个四分子中也没有检测发现显示野生性表型的分离子．进一步证明了cbn1和cao突变基因具有等位性的属性；根据CAO基因的DNA序列，从5＇-端和3’-端设计两个探针，分别与莱茵衣藻核基因组I号染色体上GBP1和RB47分子标记之间的21个BAC克隆进行的点杂交实验结果显示．该两个探针序列与21号BAC克隆（莱茵衣藻BAC文库序列号33e2）片段均有同源区的特性，此项DNA杂交实验初步证明．CAO基因的位点是在cbml突 变基因左右两侧的GBP1和RB47两个分子标记之间的33e2 BAC克隆片段区．     

新疆甜瓜AFLP反应体系的建立

以新疆甜瓜叶片为试验材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行研究,建立了适合新疆甜瓜的AFLP技术体系.结果表明,采用改进CTAB法提取的基因组DNA质量好,符合AFLP反应要求;双酶切必须完全彻底,基因组DNA 300 ng用EcoR I和MseI各3 U,37℃酶切5 h;连接产物稀释10倍用于预扩增;预扩增产物的稀释以75倍为宜.本研究为构建新疆甜瓜的遗传图谱及分子标记辅助育种奠定了基础.     

莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)cbn1和cao突变基因的对比分析及CAO基因的分子定位

用电击法将带有CAO基因片段的P sp109-E 8质粒转入到莱茵衣藻cbn1-48m t 基因突变株中后,转化子中出现了叶绿素b的恢复性表达,初步验证了丧失合成叶绿素b能力的cbn1和cao突变基因具有等位性的属性;将1641-1b(cbn1-43 m t )和CC-1354(cbn1-48 m t )突变株分别与CBS5(cao5 m t-)突变株的分离子CBS5-c1和CBS5-c5进行杂交,并通过随机分析方法分离获得1842个减数分裂后代分离子,经检测其中均没有发现有野生性表型的分离子,初步证明cbn1和cao 4突变基因间有着非常紧密的连锁性;从上述杂交系分离获得的50多个四分子中也没有检测发现显示野生性表型的分离子,进一步证明了cbn1和cao突变基因具有等位性的属性;根据CAO基因的DNA序列,从5′-端和3′-端设计两个探针,分别与莱茵衣藻核基因组Ⅰ号染色体上GBP 1和RB 47分子标记之间的21个BAC克隆进行的点杂交实验结果显示,该两个探针序列与21号BAC克隆(莱茵衣藻BAC文库序列号33e2)片段均有同源区的特性,此项DNA杂交实验初步证明,CAO基因的位点是在cbn1突变基因左右两侧的GBP 1和RB 47两个分子标记之间的33e2 BAC克隆片段区.     

依据RAPD片段克隆而建立的团头鲂PCR鉴定法

通过对团头鲂RAPD片段的克隆、Southern杂交筛选和DNA序列分析,设计出3对PCR引物：M1F／M1R、M3F／M3R和M5F／M5R,这3对引物分别扩增出约1．00、1．15、0．56kb的DNA主带;HaeⅢ能将前两个片段酶民两个几乎相等或相似的小片段。经部分团头鲂群体和其它12种鱼DNAPCR验,除三角鲂外,这3对引物具有很强的团头鲂特羿性,重复性100％,可以用于除三角钫以外的团头鲂的分子标记或分子鉴定。     

B组轮状病毒WH-1株nsp2基因的原核表达与抗体制备

根据B组轮状病毒(GBRV)WH-1株nsp2基因的全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到nsp2基因的编码区.将其片段克隆到原核表达载体pGEX-KG上,经IPTG诱导,在E.coliDH5α菌株中得到高效表达.表达的GST融合蛋白大小为61×103,经SDS-PAGE分离纯化,免疫小白鼠制备了多克隆抗体.抗体经1∶3 000倍稀释后用于Western Blot分析,获得特异性显色信号.所表达的蛋白和制备的抗体可用于蛋白结构和功能的进一步研究.     

丙型肝炎病毒NS5B基因在昆虫细胞中的表达

将含有丙型肝炎病毒（HCV）NS5B基因的转移载体pBlueBac5B与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染Sf9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5B基因的重组病毒AcNS5B.提取重组病毒基因组DNA进行Southern分析,发现有一条1.8kb的DNA片段与标记的探针发生杂交.AcNS5B感染Sf9细胞后,在细胞中表达了分子量为66×103的蛋白,用Westernblot方法检查这种蛋白质,能与兔抗HCVNS5B抗血清发生特异的强烈反应.     

白缘缺微卫星分子标记的筛选

用磁珠-生物素标记的微卫星探针（ACA）15与白缘缺（Leiobagrus marginatus）基因组酶切片段杂交，捕获含有微卫星序列的DNA片段，连接到T载体中，构建富集微卫星序列的小片段插入文库，再用γ^-32P标记的探针进行二次筛选，获得阳性克隆785个，对其中的140个克隆进行了测序，获得完整的微卫星序列132个．用引物设计软件Primer Premier5．0设计引物64对．对其中的20对引物进行了多态性检测，筛选到稳定扩增的标记13对，用此13对微卫星引物分析了缺属白缘缺（L．marginalus）、拟缘缺（L．marginatoides）（大、小各1种）、黑尾缺（L．nigricauda）共4个群体的遗传多样性，其中10对微卫星引物在种内或种间表现出多态性．     

白缘(鱼央)微卫星分子标记的筛选

用磁珠-生物素标记的微卫星探针(ACA)15与白缘缺(Leiobagrus marginatus)基因组酶切片段杂交,捕获含有微卫星序列的DNA片段,连接到T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库,再用γ-32P标记的探针进行二次筛选,获得阳性克隆785个,对其中的140个克隆进行了测序,获得完整的微卫星序列132个．用引物设计软件Primer Premier 5．0设计引物64对．对其中的20对引物进行了多态性检测,筛选到稳定扩增的标记13对,用此13对微卫星引物分析了缺属白缘缺(L．marginalus)、拟缘缺(L．marginatoides)(大、小各1种)、黑尾缺(L．nigricauda)共4个群体的遗传多样性,其中10对微卫星引物在种内或种间表现出多态性．     

猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFV ns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化E.coli BL21-codonPlus (DE3),IPTG诱导重组蛋白表达.采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3(NS3)重组蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体.ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示,该多克隆抗体效价在1×105以上,能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应.制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原 ;NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定.     

分子标记或质量性状基因座位间连锁遗传分析的相关方法

提出对两个分子标记或质量性状基因座位的表现型赋值后求相关系数Ｃ，通过ｔ测验以检测此两个分子标记或基因座位间是否存在连锁，进而给出了重组值ｒ及其抽样误差的估计公式．文中采用几个经典的实例，将相关方法的计算结果与３种经典的估计方法的计算结果进行了实例比较，结果表明，相关方法与极大似然法所得结果在很多情况下极为相近，说明用相关方法进行连锁遗传分析是有其理论和实践意义的     

马氏珠母贝遗传多样性的RAPD分析

采用 OPM组 2 0个碱基随机引物对海南三亚 (SY) ,海南洋浦港 (YP) ,广西涠洲岛 (WZ)的 3个天然群体和广东雷州人工养殖群体 (L Z)的马氏珠母贝进行了 RAPD分析 .其群体内的平均遗传相似度 (similarity,S)分别是 0 .5 86 6 ,0 .6 5 14,0 .6 6 6 6 ,0 .715 8,由低到高依次为 SYYP>WZ>L Z.结果表示 :天然群体的遗传多样性大于养殖群体的遗传多样性 .     

小鼠B7-1cDNA克隆、测序、表达及其抗瘤效应的初步探讨

用反转录ＰＣＲ的方法,从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ后,插入ｐｃＤＮＡ３质粒中构建成小鼠Ｂ７－１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤ－ｍＢ７．１,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的Ｂ７－１ｃＤＮＡ的序列与文献报道一致．通过脂质体介导将ｐＣＤ－ｍＢ７．１导入Ｂ７－１的小鼠黑色素瘤细胞系Ｂ１６（Ｆ０）中,经ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＮＡ斑点杂交初步证实Ｂ７－１在肿瘤细胞中获得了稳定有效的表达．同源小鼠脾淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养后采用ＬＤＨ释放改良法测定淋巴细胞特异杀伤活性,结果显示,与野生型和模拟转染的Ｂ１６细胞相比,Ｂ７－１基因转染的Ｂ１６细胞能较有效诱导淋巴细胞产生针对野生型Ｂ１６细胞的特异杀伤活性（ｐ＜０．０２）．这说明,将Ｂ７－１基因导入肿瘤细胞表达能提高其免疫原性,诱导有效的抗肿瘤免疫反应     

F15L和K207E突变与Borrelia螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶的生物活性

磷脂酰胆碱合成酶是磷脂酰胆碱合成酶(PCS)途径中的关键酶.根据Borrelia burgdorferiBB0249ORF的DNA序列设计引物对,从B.afzelii总DNA中扩增出一段660 bp DNA.序列分析发现扩增的DNA片段编码的蛋白中仅两个氨基酸(L15和E207)不同于B.burgdorferiBB0249 ORF编码的蛋白(F15和K207).将克隆的基因插入pET表达载体,并在大肠杆菌中表达.在活体中进行的活性分析发现,克隆的DNA片段编码的蛋白质能利用外源的胆碱和大肠杆菌细胞内的CDP-二酰基甘油合成磷脂酰胆碱(PC),表明螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶15位的苯丙氨酸和207位赖氨酸残基分别被亮氨酸和谷氨酸替代并不影响磷脂酰胆碱合成酶的活性.     

三种倒刺鲃的RAPD种质鉴定

利用33个随机引物研究了光倒刺鲃（Spinibarbus hollandi Oshima）、中华倒刺鲃（S．sinensis Bleeker）和倒刺鲃（S．denticulatus donticulatus Oshima）基因组DNA（RAPD）多态性和种质分子标记。33个随机引物总共扩增得到473条带，多态性片段为365条，占总带的77．2％。其中16个引物共扩增出95个特异性片段，长度主要在200-1500bp，光倒刺鲃特有的为23个、中华倒刺鲃特有的为20个、倒刺鲃特有的为28个，这些特异性片段可作为三种倒刺鲃的分子遗传标记。多态性研究表明，种内相似系数分别为：光倒刺鲃0．6507，倒刺鲃0．6975，中华倒刺鲃0．8180。种间遗传距离分别为，中华倒刺鲃和倒刺鲃0．4915：中华倒刺鲃与光倒刺鲃0．6217；倒刺鲃与光倒刺鲃0．6455。     

胸苷激酶的免疫化学研究

采用免疫化学方法，以胸苷激酶（ＴＫ）抗体检测了５种培养的细胞（４种癌细胞和１种正常细胞）及１２种人类癌组织切片．结果表明，正常细胞呈阴性结果，４种癌细胞及１２种癌组织均呈阳性结果．提示此种方法在癌症的临床诊断方面可能有意义．     

Office自动判分系统的设计思想与实现

Microsoft Office自动判分系统基于浏览器/服务器结构,考生通用浏览器向服务器传送,按考题要求完成的Office文件,并在服务器端实现对考生上传的Word、Excel、PowerPoint文件的自动判分。该系统使用类和对象对考生上传的文件进行实例化,从中读取相应属性进行判分,再把最终分数写     

运算放大器一种新的分析方法

从入射阻抗ＺＡ和反馈阻抗ＺＢ的概念出发，借助网络的Ｙ参数导出可供计算机编程的电压增益（ＡＶ）的一般表达式，并引入实例进行理论分析．结果表明：这种方法不仅适用于分析单环和多环反馈型运算放大器电路，同时对设计多种新功能的运算放大器电路是十分有效的     

关于丢番图方程X2-(a2+1)Y4=35-12a的讨论

设a是正整数,证明了当a=1时,方程X²-(a²+1)Y⁴=35-12a仅有正整数解(X,Y)=(5,1);当a=2时,该方程仅有正整数解(X,Y)=(4,1)和(56,5);当a=3时,该方程仅有正整数解(X,Y)=(3,1);当a=4时,该方程仅有正整数解(X,Y)=(2,1)和(202,7);当a=5时,该方程仅有1组互素的正整数解(X,Y)=(1,1);当a=6时,该方程无正整数解(X,Y);当a≥7且12a+1为非平方数时,该方程最多有3组互素的正整数解(X,Y);当a≥7且12a+1为平方数时,该方程最多有4组互素的正整数解(X,Y).     

人胎盘间充质样干细胞的分离、培养及其生物学特性分析

从组织块中分离纯化成体干细胞具有一定的困难,其他细胞的混杂成为获取高纯度组织干细胞的一个技术瓶颈.以人体胎盘为研究对象,在分散组织细胞的基础上,通过不同时间梯度贴壁方法分离纯化了人胎盘间充质样干细胞,并与常规的直接贴壁方法作了比较,同时分析了时间梯度贴壁方法分选细胞的增殖能力、多分化潜能以及免疫原性.研究结果表明,时间梯度贴壁法获得的细胞具有较强的增殖能力.直接贴壁法得到的细胞不具有分化潜能,而时间梯度贴壁法获得的细胞具有向成骨细胞和成脂肪细胞方向分化的能力.通过对免疫原性基因检测的分析,表明时间梯度贴壁法获得的细胞表达HLA-Ⅰ,但不表达HLA-Ⅱ.     

重组甲鱼载脂蛋白B的研制及其阻断STSSSV感染的活性初探

为了制备甲鱼(Pelodiscus sinensis)载脂蛋白B (Pelodiscus sinensis Apolipoprotein B, PApoB) 基因的原核表达产物, 并探索其是否具有阻断甲鱼系统性败血症球状病毒(Soft-shelled Turtle Systemic Septicemia Spherical Virus, STSSSV)感染的功能, 为最终控制和防治甲鱼系统性败血症疾病奠定基础, 构建了PApoB的原核表达系统, 纯化了重组PApoB, 并将其用于阻断STSSSV感染的分析: 根据甲鱼PApoB的基因序列, 设计引物, 扩增其第9932-11209bp(3294-3696 aa)区段, 将其连接至表达载体pET-28a(+)中, 转化大肠杆菌Rosetta株, 经硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 并用亲和层析法纯化获得了重组PApoB; 将FITC标记的STSSSV与PApoB孵育后对甲鱼细胞进行攻毒, 显微镜下观察, 结果PApoB添加组的病毒荧光信号明显低于非添加组, 表明该重组蛋白可以阻断STSSSV的感染.