毛脚鵟气管源细胞分离及体外培养

研究了毛脚鵟气管源细胞的体外培养,分析了培养液、血清、胰岛素、肌苷等一系列因素对细胞生长增殖的影响。采用组织块贴壁法成功培养了毛脚鵟气管源细胞,用四种不同的基础培养液(DMEM(高糖)、DMEM/F12、M199、MEM alpha)对细胞进行培养,结果显示DMEM/F12对毛脚鵟气管源细胞的培养效果最好。毛脚鵟气管源细胞不具血清依赖性,10%血清的培养基中培养为宜。添加一定浓度的胰岛素、肌苷均能促进细胞的生长。     

人胎盘间充质样干细胞的分离、培养及其生物学特性分析

从组织块中分离纯化成体干细胞具有一定的困难,其他细胞的混杂成为获取高纯度组织干细胞的一个技术瓶颈.以人体胎盘为研究对象,在分散组织细胞的基础上,通过不同时间梯度贴壁方法分离纯化了人胎盘间充质样干细胞,并与常规的直接贴壁方法作了比较,同时分析了时间梯度贴壁方法分选细胞的增殖能力、多分化潜能以及免疫原性.研究结果表明,时间梯度贴壁法获得的细胞具有较强的增殖能力.直接贴壁法得到的细胞不具有分化潜能,而时间梯度贴壁法获得的细胞具有向成骨细胞和成脂肪细胞方向分化的能力.通过对免疫原性基因检测的分析,表明时间梯度贴壁法获得的细胞表达HLA-Ⅰ,但不表达HLA-Ⅱ.     

新疆金鸡菊多糖体外抗肿瘤活性的研究

采用Tetrazolium bromid(MTT)试验法和光学显微镜法,初步研究了金鸡菊多糖对肿瘤细胞增殖的抑制作用和对细胞形态及细胞凋亡的影响.结果表明:金鸡菊多糖对肝癌细胞BEL-7404、食道癌细胞Eca109和宫颈癌细胞HeLa增殖都有抑制作用,且随着药物(多糖)作用浓度和时间的增加,显示出较好的量效关系.通过Hoechst33258染色观察细胞形态,初步证明金鸡菊多糖能诱导HeLa细胞发生凋亡改变;倒置显微镜下观察发现经金鸡菊多糖处理的癌细胞数目有所减少,细胞较为分散,细胞间连接减少,产生圆缩脱落;乳酸脱氢酶LDH活力分析实验表明金鸡菊多糖诱导Hela细胞的凋亡要有适宜的浓度.     

蛙虹彩病毒cop基因的克隆表达及亚细胞定位

从蛙虹彩病毒(Rana gryliovirus,RGV)基因组中克隆了含凋亡相关结构域的新基因-cop(Caspaserecruit ment domain only protein,COP)基因的全部编码区,成功构建了重组表达载体,进行了原核表达,并在鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosumcyprini,EPC)中进行了亚细胞定位.序列分析表明,RGVcop基因全长288 bp,编码一个长为95 aa,分子量为10.4×103的推定蛋白.二级结构预测表明其含有5个α螺旋.同源性比对分析显示,RGVcop与其他6株虹彩病毒及人类cop相关蛋白同源性最高为94%,最低为33%.重组原核表达质粒pET28a-COP转化大肠杆菌BL21后,经IPTG诱导表达,获得一条约14×103的融合蛋白.重组真核表达质粒pEGFPN3-COP转染EPC细胞,经DAPI染色后,在荧光显微镜下观察显示重组蛋白在整个细胞中均有分布.     

羧甲基茯苓多糖上调HBV转基因小鼠权突状细胞功能

采用1%羧甲基茯苓多糖(CMP)腹腔注射,摘取乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠脾脏,制备淋巴细胞,MTT(噻唑蓝粉剂)法观察CMP对淋巴细胞的毒性作用;经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)培养转基因小鼠脾脏来源树突状细胞(DC),ELISA法检测DC分泌IL-12以及刺激混合淋巴细胞反应T淋巴细胞分泌IL-10、IFN-γ的含量.CMP在0～500 mg/L浓度对HBV转基因小鼠无毒性作用,并能显著促进HBV转基因小鼠DC分泌IL-12,在混合淋巴细胞反应中,能显著促进T淋巴细胞分泌IFN-γ并抑制IL-10的分泌,从而上调DC功能.     

兔抗鼠IL-12p35多克隆抗体的制备及应用

利用分子克隆方法构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱纯化后,获得重组融合蛋白GST-IL-12p35。以此蛋白为免疫抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体。采用ELISA法评估抗体效价,Western blot检测抗体特异性。LPS刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测IL-12抗体阻断后细胞培养上清中的IFN-γ的分泌量。结果:成功构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,并获得重组融合蛋白GST-IL-12p35(约48kDa)。抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体,ELISA法测得IL-12p35多克隆抗体效价为1256 000,Western blot证实制备的多克隆抗体能够识别结合重组蛋白。IL-12p35多克隆抗体能够有效地抑制LPS诱导的脾细胞IFN-γ的表达。     

纳米二氧化硅体内与体外氧化应激及细胞毒性实验研究

研究了纳米二氧化硅(SiO2)体内及体外氧化应激损伤及细胞毒性作用及机制.体内实验采用ICR小鼠,纳米SiO2经口灌胃染毒3次,检测肺组织中MDA(丙二醛)和SOD(超氧化物歧化酶)含量,观察纳米SiO2对小鼠肺的氧化应激毒性.采用体外培养的小鼠上皮细胞(JB6细胞),观察不同质量浓度纳米SiO2染毒后的细胞形态改变,通过蛋白免疫印迹实验检测纳米SiO2是否通过FAS信号途径引起细胞凋亡.研究结果表明:纳米SiO2经口染毒后对小鼠肺具有氧化应激损伤作用,表现为随染毒剂量的升高,肺组织中MDA产生量增加,呈一定的剂量-反应关系.同时,肺组织内SOD水平总体趋势降低,但是差别未见统计学意义.体外培养细胞实验中,纳米SiO2染毒后可引起细胞出现凋亡并呈空泡样变.蛋白免疫印迹实验中,纳米SiO2可引起FAS信号蛋白表达量明显上升,但是FADD表达水平并不升高.     

稀土元素对植物体内细胞分裂素的影响

本文采用生物鉴定法(bioassay)和高效液相色谱法(HPLE)测定施用稀土元素的作物,从植物内源激素的角度来讨论稀土元素对植物的生理作用影响,测定结果表明:施用稀土元素后,细胞分裂素(Cyto-kinin CTC)平均增长25％左右,说明稀土元素促进了细胞分裂、诱导芽的形成。     

信号转导抑制剂对TNFβ诱导L929细胞调亡的研究

本文采用FDA－PI荧光染色,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验自行重组并纯化的人TNFβ对L929细胞的细胞毒效应,结果表明TNFβ主要是诱导L929细胞以调亡的形式死亡。实验还采用8种信号转导抑制剂,观察它们对TNFβ杀伤L9292细胞的影响,以探讨细胞凋亡的信号转导途径。初步研究表明：磷脂酶A2,Ca^2 通道、丝氨酸蛋白酶的抑制能抑制TNFβ对L929细胞的杀伤,而且抑制剂的持续存在能更有效地发挥这一抑制作用;相反地,蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶的抑制剂可促进凋亡;而环加氧酶、磷脂酰肌醇－3激酶抑制则对细胞凋亡不起作用。     

乌药根挥发油对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

研究乌药根挥发油对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。采用MTT法检测并比较乌药根挥发油对人肝癌HepG2细胞和正常肝细胞HL-7702增殖的影响;采用琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪法研究乌药根挥发油诱导HepG2细胞凋亡的作用。经不同浓度乌药根挥发油处理HepG2细胞24h,随药物浓度的增加,细胞生长抑制率逐渐增加。在低浓度范围(≤50μg·mL-1)时,乌药根挥发油对肝癌细胞的毒性作用要明显强于对正常细胞的作用。经过80和100μg·mL-1乌药根挥发油处理24h的HepG2细胞观察到典型的DNA ladder。经100、150和200μg·mL-1乌药根挥发油处理8h后,sub-G1期细胞的含量逐渐升高,分别是6.8%、12.6%和20.3%。提示乌药根挥发油能够有效抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且具有一定的癌细胞选择性;同时能诱导HepG2细胞发生凋亡。更多还原     

胸腺素在抗辐射效应中的淋巴细胞回升作用

本文以外周血白细胞总数、淋巴细胞与粒细胞比率、ANAE~+淋巴细胞百分率、SP与DP淋巴细胞比率、骨髓有核细胞数和~3H-TdR掺入到骨髓有核细胞量的变化,探讨了胸腺素对经450仑辐射鼠体的抗辐射效应。结果表明:小牛胸腺素对白细胞,特别对淋巴细胞的回升,对T淋巴细胞,特别对T_μ淋巴细胞损伤防护和回升,对骨髓有核细胞数和~3H-TdR掺入量都有明显的促进作用。结果提示,小牛胸腺素具有调整因辐射所引起的鼠休淋巴细胞低降,从而恢复免疫功能的效应。     

脐血贴壁细胞饲养层支持造血干/祖细胞扩增的初步研究

探讨来自脐血的贴壁细胞的特征及其对脐血造血干/祖细胞体外扩增的支持作用.利用流式细胞术对脐血中培养出的贴壁细胞进行了鉴定,同时观察其形态学特征,并由此建立细胞饲养层;在饲养层基础上建立共培养体系,分别体外扩增单个核细胞和CD34+细胞,观察饲养层对体外扩增的影响,并检测扩增后细胞的GEMM-CFC形成潜能.结果表明,脐血贴壁细胞呈纤维状,其CD14阳性细胞仅3.8%,而CD13、CD166、CD29阳性细胞分别为51.8%、35.6%、16.5%;与仅用外源细胞因子的非共培养体系相比,用饲养层加外源细胞因子建立的共培养体系中的单个核细胞和CD34+细胞扩增效率分别提高了2.09倍和2.94倍,并且前者扩增出的细胞比后者具有更高的GEMM-CFC形成潜能.可初步推定,从脐血中培养出的纤维状贴壁细胞具有骨髓间充质干细胞的特性.在适当的条件下,可以形成饲养层细胞,为造血干/祖细胞体外扩增提供支持基质细胞.
     

新型稀土镁合金螺钉体内促骨修复及体外生物相容性研究

为测试新型稀土镁合金的生物相容性及降解产物致敏性; 评价新型稀土镁合金螺钉对骨伤模型的治疗效果, 基于NZ30K镁合金添加Mn元素制成新型稀土镁合金, 并通过后期加工制成不同规格的螺钉. 将稀土镁合金螺钉浸入磷酸盐缓冲液中制作浸提液, 于大鼠后肢背部皮下注射, 观察浸提液皮下致敏性. 将螺钉打磨制成圆片植入到大鼠皮下, 观察皮下降解产气情况, 以可吸收骨蜡作为对照同位置皮下植入. 建立兔骨损伤模型, 将稀土镁合金植入, 定期拍摄X光检查螺钉降解情况, 按照时间顺序分别于8周、12周、16周处死实验兔制作肝肾切片、骨切片, 评价肝肾毒性及体内降解情况; 同期以ZA75镁合金为基础添加0.3% Mn元素制成新镁合金, 作为对照组对比稀土镁合金对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化效果. 将浸提液过滤稀释后添加至细胞培养板中, 加入成骨诱导液培养, Westernblot蛋白电泳实验测定骨保护蛋白(OPG)表达情况. 新型稀土镁合金浸提液未表现出致敏性, 皮下降解结果显示植入初中期有气腔产生, 中后期气腔消失, 镁合金完全降解; 组织切片显示, 兔股骨螺钉植入在前中期有一定肝肾毒性, 植入中期促骨生长效果相较于前期更为明显, 植入后期未见明显肝肾毒性, 螺钉降解完全, 植入部位骨质增强; 兔股骨植入降解结果显示植入前期未观察到明显的促进骨生长效果, 螺钉与骨质嵌合紧密, 植入中期促骨生长修复效果呈现, 局部骨组织出现膨隆包裹住螺钉降解产物, 植入后期螺钉完全降解, 植入位置有一小孔未闭合, 股骨近端明显膨隆; 蛋白电泳实验显示, 新型稀土镁合金浸提液可增加OPG表达, 具有良好的生物相容性. 基于NZ30K开发的新型稀土镁合金在动物实验及细胞实验阶段表现出良好的生物相容性, 可为临床应用提供一定参考.     

中药定清片联合化疗治疗急性白血病复发的临床研究

目的: 观察中药定清片联合化疗与单纯化疗比较治疗急性白血病复发患者的临床疗效. 方法: 采用随机对照研究方法, 将符合纳入标准的60例急性白血病复发病例分为2组, 每组30例. 分别给予定清片联合化疗(试验组)或单纯化疗(对照组)治疗, 观察比较两组治疗前后的骨髓缓解率、血常规变化、中医证候疗效、感染发生率和不良反应发生情况. 结果: 试验组获完全缓解13例、部分缓解6例, 总缓解率63.33%; 对照组获完全缓解12例、部分缓解5例, 总缓解率56.67%, 两组的骨髓总缓解率相比较无明显统计学差异(P＞0.05). 在治疗后, 试验组的白细胞和血小板计数高于对照组, 两者比较有统计学差异(P＜0.05). 在中医证候疗效方面, 试验组的总有效率86.6%, 明显高于对照组的66.7%(P＜0.05). 在疗后的感染发生率和不良反应发生情况比较中, 试验组低于对照组, 两组间比较均有统计学差异(P＜0.05). 结论: 中药定清片联合化疗治疗急性白血病复发患者, 在西医疗效上与单纯化疗组无明显差异, 但联合治疗更利于化疗后白细胞及血小板的恢复以及减少感染及相关并发症的产生, 所产生的不良反应也低于单纯化疗组; 在中医证候疗效上联合治疗也优于单纯化疗组.     

热挤压铸造新型镁合金微观组织及细胞生物活性分析

采用热挤压铸造工艺制造新型镁合金, Mg-Nd-Zn-Zr-Mn (平衡-3-0.2-0.4-0.2%)基, 研究了新型镁合金表面特征、力学性能及细胞生物活性. 选择NZ30K添加Mn元素制成新镁合金, 挤压前通过均匀化热处理, 减少挤压过程中铸态合金中的粗大析出相以及树枝晶形成的带状组织. 光谱测试分析合金成分; 显微观察合金铸态、横纵截面; 扫描电镜扫描; X射线衍射分析. 将合金制成金属棒、螺钉、接骨板等形状, 测试力学性能. 进行体外细胞培养, 利用DMEM完全培养基制作镁合金浸提液, 滤膜过滤后4℃保存; 大鼠骨髓间充质干细胞提取培养, 待细胞生长至70%~80%传代于24孔板种板, 添加浸提液培养12、24、36h, 利用线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞凋亡活性. 以纯镁作为对照组, 进行力学性能测试及细胞活性凋亡测试. 热挤压后合金的组织由细小的再结晶晶粒与变形晶粒组成, 与铸态合金相比, 其组织明显细化. 经挤压加工后, Mg-3Nd-0.2Zn-0.4Zr-0.2Mn合金横截面为细小的等轴晶组织, 组织均匀性好; 纵截面出现了晶粒尺寸相对较大的长条状组织, 组织均匀性稍差. 扫描电镜图显示Mg-3Nd-0.2Zn-0.4Zr-0.2Mn合金中第二相颗粒沿挤压方向被碾碎成更细小的颗粒, 只有非常少量的弥散分布的颗粒状析出相, 而在该合金中有较多被碾碎的第二相, 发生了明显的动态再结晶, 挤压后获得的组织不均匀, 大晶粒被发生再结晶的小晶粒包围. 从X射线衍射图中可以看出该合金铸态组织主要由α-Mg、Mn、Mg12Nd和Y相等这几相组成. 力学性能测试表明, 新型镁合金综合力学性能明显优于纯镁金属. 短期细胞培养中, 新型镁合金无明显细胞毒性, 对细胞生长有积极促进作用. 新型镁合金热挤压后的横截面为细小等轴晶组织, 组织明显细化且均匀性好, 力学性能有极大提升; 在短期细胞培养过程中新型镁合金与纯镁都表现出无细胞毒性, 新型镁合金对细胞活性的提升优于纯镁组.     

芜菁叶汁对环磷酰胺致小鼠突变的拮抗作用

用清洁级ICR小鼠作动物整体试验，通过小鼠髓嗜多染红细胞（PCE）的微核试验，小鼠骨髓染色体畸变试验等方法，测定芜菁叶汁对环磷酰胺（Cyclophsopamide，以下简称CP）引起遗传物质损伤的保护拮抗效应，灌胃（ig)不同剂量叶汁均使小鼠骨髓PCE微核率、骨髓染色体畸变率有所下降，且具有明显的剂量效应，芜菁叶汁对环磷酰胺引起小鼠的损伤具有明显的拮抗作用，提示芜菁叶汁具有一定的抗突变作用。     

浙江萧山、舟山及福建集美臭鼩核型比较研究

对浙江萧山、舟山及福建集美三地臭鼩进行了染色体组型和带型分析,结果表明,三地臭鼩染色体数目均为2n=40,浙江两地常染色体组型为8(m)+2(sm)+10(st)+18(t),集美组型为8(m)+2(sm)+8(st)+20(t),性染色体除萧山标本X染色体为sm外,其余均为m.G带丰富,C带物质普遍缺乏。三地G、C带差异主要表现在性染色体上,尤其是Y染色体变异较大。核型比较初步显示三地臭鼩种群已有不同程度的地理分化,尤以福建集美更为明显。     

脐带血造血干/祖细胞体外扩增制剂及其临床前安全性检测分析

造血干细胞移植（HSCT）可用来治疗多种恶性造血系统疾病．HSCT成功植入的先决条件之一是必须输入足够量的造血干／祖细胞（HS／PCs）．细胞剂量过少会导致植入时间延长,移植失败的可能性增大．从脐带血中直接分离的造血干细胞因数量较少而不能满足临床移植的需要．利用骨髓间充质干细胞作为滋养层联合细胞因子组合（SCF＋G-CSF＋TPO）使脐血造血干／祖细胞体外扩增75．2±15．0倍,CD34^＋细胞扩增33．4±12．3倍．将扩增的细胞收集,重新悬浮于L-15培养液中制成造血干／祖细胞制剂,并在建立相应的检测技术基础上,进行了细胞制剂的无菌检测以及细胞制剂中细菌内毒素、牛血清残留量和干细胞因子残留量的检测．通过上述检测分析,为扩增的造血干／祖细胞制剂服务临床需要,辅助治疗恶性血液病和再生障碍性贫血以及遗传性贫血重建造血功能提供实验依据．     

无机砷影响蛋白核小球藻光合活性的特征研究

采用蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)进行无机砷毒性暴露实验,分析As(Ⅲ)和As(V)对蛋白核小球藻光合活性的影响差异.结果表明:该藻对无机砷具有较强的耐受性,在砷浓度大于37.5mg·L~(-1)暴露条件下,小球藻叶绿素a合成、光系统II(PSII)最大光量子产量(F_v/F_m)、实际光量子产量(Yield)及相关参数与无机砷浓度呈显著负相关,As(Ⅲ)对小球藻光合活性抑制作用显著高于As(V).As(Ⅲ)和As(V)150.0mg·L~(-1)暴露96h对小球藻光系统II影响差异最大,F_v/F_m、Yield、rETR_(max)和线性斜率(α)分别降低了77%,91%,92%,85%和19%,50%,51%,23%.透射电镜进一步表明,小球藻亚细胞结构形态受砷胁迫出现叶绿体片层间空泡化、类囊体基粒片层受挤压、蛋白核缩小及脂质滴.As(Ⅲ)对蛋白核小球藻光系统II(PSII)抑制作用大于As(V),可为深入了解无机砷对淡水微藻光合活性的影响机理提供一定的参考.     

鼠白细胞介素2真核表达质粒的构建及鉴定

利用小鼠IL－2基因构建真核表达质粒,筛选的阳性克隆经限制性内切酶酶切鉴定和基因测序,结果表明小鼠IL－2基因被正确地克隆支pCDNA3真核表达质粒上,将真核心质粒pCDNA2IL-2,转化大肠杆菌细胞,增菌培养后大量提取pCDNA3IL-2质粒,经紫外分光光度计检测其纯度和浓度,为加强控制害DNA疫苗的免疫功能奠定了科学的理论基础。