梭子蟹乳化病的间接荧光抗体快速诊断技术

以梭子蟹乳化病的病原菌-溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)为抗原制备兔抗血清,利用异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔血清建立了梭子蟹乳化病的间接荧光抗体快速诊断技术,并应用该技术对人工感染梭子蟹、养殖现场梭子蟹及养殖水体进行溶藻弧菌检测.结果表明:该技术检测溶藻弧菌有较高的灵敏度,最低检测量为105cfu·mL-1.人工感染24 h后,就能在梭子蟹鳃和血淋巴中检测到溶藻孤菌.现场检测显示表观有病蟹的阳性检出率为90%,表观健康蟹的阳性检出率为20%,说明间接荧光抗体技术不仅可以用于诊断已感染发病的梭子蟹,而且也可检测出带菌但病症不明显的梭子蟹.     

Pb2+胁迫对草鱼过氧化氢酶和髓过氧化物酶的影响

摘要:铅及其化合物是水体中常见的重金属污染源,会对鱼类产生巨大的危害.为了研究铅及其化合物对草鱼血清的抗氧化能力的影响,本文分别用不同浓度的Pb2+溶液处理草鱼,探究草鱼血清中过氧化氢(H2O2)含量的变化以及与草鱼血清中过氧化氢酶(CAT)和髓过氧化物酶(MPO)活性的关系.结果表明,低浓度的Pb2+对草鱼血清中H2O2具有刺激作用,其含量随着Pb2+浓度的增加而升高,当Pb2浓度为0.25 mmol·L-1时达到最高值.与H2O2含量变化相反,草鱼血清中CAT和MPO的活性随Pb2+浓度的增高而降低.在0.01mmol·L-1Pb2+作用时,CAT在48h时活力最强,以后逐渐衰减;而MPO的活力普遍增强,在72h最强,并在96h后维持较强的活力.在高浓度(0.25 mmol· L-1)Pb2+作用时,CAT和MPO活性是受抑制的,其中CAT在48 h最低,然后酶活逐渐恢复,96h时达到正常水平;MPO活力一直没有恢复,在72 h时活力最低.     

污泥基吸附剂对亚甲基蓝和环丙沙星的吸附性能研究

亚甲基蓝和环丙沙星是水体中2种污染物, 对生态环境有潜在危害. 本文以市政剩余活性污泥为原料, 氯化锌为活化剂热解制备污泥基吸附剂, 研究盐酸酸洗浓度、氯化锌浓度、热解温度、热解时间等对污泥基吸附剂吸附水中亚甲基蓝和环丙沙星性能的影响. 结果表明 (1)污泥基吸附剂对亚甲基蓝的吸附性能随盐酸酸洗浓度的增大而增加, 对环丙沙星的吸附性能则随盐酸酸洗浓度的增大呈先降后增趋势, 两者均在1.500mol·L-1盐酸浓度下取得最优值. (2)污泥基吸附剂对亚甲基蓝和环丙沙星的吸附性能随氯化锌浓度和热解温度的增加呈先升后降趋势, 在氯化锌浓度为4.0mol·L-1、热解温度为500℃时有最优值; 随着热解时间的延长, 污泥基吸附剂对亚甲基蓝和环丙沙星的吸附性能分别在500℃热解70min和80min时有最优值. (3)污泥基吸附剂的最佳制备条件为 氯化锌4.0mol·L-1活化2h、500℃热解70min和80min、1.500mol·L-1盐酸酸洗; 以此制得的污泥基吸附剂对亚甲基蓝和环丙沙星的去除率分别为97.7%和96.4%, 平衡吸附量分别为97.9mg·g-1和3.9mg·g-1, 且污泥基吸附剂对亚甲基蓝和环丙沙星的吸附过程均符合准二级动力学方程.     

“三明治”法制备牛血红蛋白分子印迹膜

以牛血红蛋白为模板蛋白、丙烯酰胺为功能单体、N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联单体、过硫酸铵为引发剂,采用"三明治"法制备了牛血红蛋白分子印迹膜.确定了最佳的实验条件,功能单体与交联剂的摩尔配比为40∶1,洗脱剂为1%SDS-10%HAc,其对模板蛋白的洗脱率为47%.结果表明,所制备的蛋白质印迹膜在3.5 h和2.9μmol/L重结合蛋白浓度时,对模板蛋白的吸附量达到最大.该分子印迹膜对模板蛋白的吸附量(0.22 nmol/cm2)明显高于非印迹膜对模板蛋白的吸附量(0.10 nmol/cm2),对血红蛋白、肌红蛋白、溶菌酶和牛血清白蛋白的印迹因子值分别为2.5,1.7,1.3和1.2,说明它对模板蛋白具有一定选择性.     

北美海蓬子胆碱单加氧酶基因CMO的克隆及表达研究

胆碱单加氧酶(CMO)是合成植物小分子非毒性有机渗透调节物质甜菜碱过程中重要的限速酶.文中采用RACE技术以北美海蓬子为实验材料克隆CMO基因的全长c DNA序列(Genbank登录号:KM884944),并做相关的生物信息学分析.研究结果表明,该基因c DNA全长1 834 bp,其中开放阅读框(ORF)有1 317 bp,编码439个氨基酸,预测其蛋白分子量为49.537 k Da,理论等电点(p I)为6.15;序列分析显示北美海蓬子CMO蛋白中含有2个重要的保守域和功能域,不存在跨膜区域;除了与蒺藜苜蓿及水稻的同源性分别为46%和49%外,与其他植物CMO蛋白序列相似性均达到55%以上;系统进化树分析显示,它与欧洲海蓬子的亲缘关系最近;实时荧光定量PCR结果显示,随着Na Cl浓度的升高,北美海蓬子CMO基因的表达量增加,说明该基因可通过盐胁迫诱导表达.     

LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

分别从幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增ltB和hpaA基因,构建ltB-hpaA融合基因及其原核表达系统,鉴定其表达产物的免疫原性、佐剂活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用.采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和ltB基因片段,构建ltB-hpaA融合基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.采用质粒pQE32和宿主菌E.coli M15构建ltB-hpaA融合基因表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导表达.采用western blot和GM1-ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐剂活性.建立HpSS1株感染BALB/c小鼠模型,检测rLTB-HpaA的免疫保护效果.采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况.与GenBank登录的相关序列比较,所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94.25%～99.71%和95.38%～99.19%.所构建的表达系统pQE32-ltB-hpaA-M15的目的重组蛋白(rLTB-HpaA)表达量高达细菌总蛋白的1/3左右.rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能产生特异性抗体.GM1-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合.rH-paA免疫小鼠的保护率仅为66.7%,rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83.3%.81.6%患者血清(102/125)HpaA抗体检测结果阳性,所有菌株均含有HpaA.本文成功地构建了itB-hpaA融合基因高效原核表达系统,所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性,并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用.     

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F₁、R₁和F₂、R₂,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2 200 bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用Sal I线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0 mg·mL^-1 G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12 h取样并添加甲醇,96 h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示：在85 kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37 ℃下培养90 min,再加入IPTG至1 mmol·L^-1后诱导7 h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85 kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46 mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46 mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15 U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15 U·mL^-1。     

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F₁、R₁和F₂、R₂,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2 200 bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用Sal I线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0 mg·mL^-1 G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12 h取样并添加甲醇,96 h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示：在85 kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37 ℃下培养90 min,再加入IPTG至1 mmol·L^-1后诱导7 h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85 kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46 mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46 mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15 U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15 U·mL^-1。     

白补6则

宁波大学学报编辑部多项成果获奖 2000年宁波大学学报编辑部编辑人员有多项科研成果获省、市奖：徐定宝教授的专著《凌濛初研究》和陈依元教授的系列论文《宁波国际性港城文化形象建设》分获宁波市哲学社会科学优秀成果二等奖。季学原主编、徐定宝副主编的《姚江文化史》与陈依元的专著《经济文化一体化》分获浙江省教育厅科研优秀成果二、三等奖。陈依元的《经济文化一体化》一书还获中国版协城市出版委员会优秀图书一等奖。 (路远) 宁波大学基建蓝图 在2001～2002年间,宁波大学将计划建设理学院综合楼12 800平方米;信息大楼8 300平方米;科技学院大楼10000平方米;文科楼5000平方米;国际交流楼4 000平方米;教职工住宅8 800平方米,共约4.9万平方米的基础建设项目。另外,环宁大宁波高教园北区将从论证进入实质性阶段。 沙蚕是对虾的一种优质饵料 根据1981年中科院上海生物化学研究所测定(氨基酸)和上海有机化学研究所分析(粗脂肪),多齿围沙蚕含氨基酸52.05％,粗脂肪23.24％;双齿围沙蚕含氨基酸70.05％,粗脂肪20.5l％。据有关资料记载,沙蚕的氨基酸组成与虾类较为相似,沙蚕还含有丰富的ω2和ω5系列不饱和脂肪酸。有人称沙蚕是对虾的全价生物饵料。 1989年威海市水产研究所利用土池繁殖沙蚕幼体,以沙蚕幼体代替卤虫无节幼体作为对虾蚤状幼体第二期(Zz)到糠虾幼体(M)以及仔虾期(P)的活体饵料。在蚤状期(Z)至糠虾期(M)大量投喂沙蚕担轮纪虫和疣足幼虫,育出的虾苗体质强且成活率高。在对虾仔虾期(P)投喂0.5～1.5 cm长的活体沙蚕刚节幼体,还可以减少发生仔虾相互残食现象。他们搞了360 m3试验水体,单茬育出0.8～1 cm虾苗5 830万尾,平均16.2万尾/m3,最大密度高达32.3万尾/m3,取得对虾育苗的好成绩,而且大大降低了育苗成本。 利用沙蚕成体作为培育越冬虾的饵料,亲虾体质好、成活率高,饵料系数低,亲虾所产的卵数量多、质量好且成活率高,同时又不污染池底。在养虾池塘中投入一定沙蚕亲体和幼体,作为养虾的基础饵料,降低了养殖成本,增产增收。 总之,无论是利用沙蚕幼体或成体,作为对虾育苗或池养对虾摄食所需要的饵料,均可收到明显的效果。 (谷进进) 宁波大学新增6个硕士学位点 根据浙学位[2001]1号文件通知,宁波大学新增6个硕士学位点：民商法学(含：劳动法学、社会保障法学)、英语语言文学、基础数学、理论物理、通讯与信息系统、水产品加工及贮藏工程。加上宁波大学原有的工程力学、水产养殖、国际贸易学3个硕士学位点,现已有硕士学位点9个。 宁波大学首批优秀课程建设项目 ┏━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━┓ ┃学院┃课程名称┃负责人┃ ┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━┫ ┃外语学院┃大学英语┃范谊┃ ┃科技学院┃大学计算机文化基础┃杨相生┃ ┃理学院┃大学数学(A、B、C) ┃张艺┃ ┃文学院┃人文素质教育课程群(文化类) ┃张伟┃ ┃┃中国古代文学┃李亮伟┃ ┃医学院┃人体解剖学┃尹维刚┃ ┃信息学院┃非计算机专业计算机一、二级系列课程┃陈华辉┃ ┃理学院┃大学物理┃王烈衍┃ ┃工学院┃工程图学┃常云发┃ ┃师范学院┃电化教育导论┃叶锡恩┃ ┃法学院┃宪法学与行政法学(课程群) ┃俞德鹏┃ ┃┃邓小平理论概论┃贺秉元┃ ┃建筑学院┃人文地理(课程群) ┃王益澄┃ ┃法学院┃民法学(课程群) ┃刘满达┃ ┃商学院┃国际金融┃孙伍琴┃ ┃体育学院┃大学体育┃刘健┃ ┃生命科学院┃生物化学┃杨文鸽┃ ┗━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┻━━━━┛ “基于多值逻辑的高信息密度集成电路系列研究” 2000年获浙江省科技进步二等奖 以吴训威教授为主的课题组,对基于多值逻辑的高信息密度集成电路系列研究,曾受到国家自然科学基金和省自然科学基金委的11项资助,在国内外学术刊物及国际学术会议上发表了83篇学术论文,出版了一部学术专著,其中有13篇论文被SCI收录,29篇被EI收录。该课题组对基于多值逻辑的高信息密度集成电路进行了4方面的研究：在多值电路的开关级设计上课题组引入开关变量与信号变量来分别描写数字电路中元件的开关状态与电路信号,并由此提出了一种兼考虑二类变量的统一的代数系统,并根据各类集成电路族的工作原理,把"开关信号理论"全面地应用于CNOS、Nmos、TTL、ECL等多值数字电路的设计,提出了相应的设计理论。由于国际上从未解决过开关级设计的问题,课题组在此方面所取得的成果被美国《电话信使报》认为这是"电路设计的突破";在各种电学量表示信号的多值电路上,系统考虑应用不同的电学量(电压、电流、电荷)表示信号,并采用"开关信号理论"提出相应的各种代数系统,分别用于多晶体管电路、I2L、电流型CMOS、CCD等多值电路的设计,由于应用了该课题组自己提出的开关级设计技术,因此不同于以往的同类研究,其在设计理论或设计电路的结构等方面均优于国内外同类研究,国外完全缺乏CCD多值电路的设计研究;在多值电路综合的新方法上,研究了在电路中同时存在二种信号的混值电路综合技术,但国际上的研究仅限于研究二值/多值接口电路,缺乏对混值电路的研究,课题组提出的取模算术运算的电路综合技术是对国际上同类研究的补充,但提出的限界算术运算则属首创,可有效用于电流型电路的综合,并以国际上对竞争冒险以往研究工作为系统,而对渡越冒险的研究属于国际上首次提出;在多值存储元件的设计上,国际上以往多值触发器的设计使用交叉耦合结构,以致一直"未找到合适且不储单元设计"。课题组在分析此结构存在问题的基础上,对多值触发器的存储机理进行了系统的研究,除对传统的主从结构的触发器外,还设计了维持阻塞型触发器,时钟竞争型边沿触发器,以及使用多拍多值触发器,这些设计在国际上均属首次提出,不仅具有理想的逻辑功能,而且具有不复杂的电路结构,从而克服了多值逻辑研究中的一个障碍。