氨基功能化大孔SiO2固定化漆酶

在溶剂热条件下,采用后嫁接法对新型大尺寸Si O2大孔材料进行氨基化改性,以氨基修饰的Si O2大孔材料为载体,借助交联剂戊二醛(GA)使诺维信工业漆酶固定化.研究结果表明:在GA质量分数为3%,p H值为5,漆酶质量浓度为30 mg·m L-1条件下固定化4 h制备得到的固定化漆酶最优,活力达到111.4 U·g-1;比较固定化漆酶和游离漆酶的性质发现,固定化漆酶p H稳定性和热稳定性均优于游离漆酶,固定化漆酶重复使用性好,与底物反复操作10次后,相对活性仍保持70.8%.     

乌骨鸡蛋清与普通鸡蛋清酶解物抗氧化活性

通过对DPPH法、水杨酸法、邻苯三酚自氧化法3种体外抗氧化活性分析方法的条件优化,分别比较了乌骨鸡蛋清和普通鸡蛋清在相同酶消化处理条件下获得的酶解产物的抗氧化活性,确定:DPPH与样品最适溶剂为40%乙醇溶液;水杨酸法反应体系各试剂最适终浓度分别为Fe2+离子(0.6 mmol·L-1),H2O2溶液(0.48 mmol·L-1),水杨酸溶液(1.2 mmol·L-1);邻苯三酚自氧化法反应体系各试剂最适条件为邻苯三酚终浓度(0.2 mmol·L-1),反应pH值（8.2）,反应温度（25℃）。结果表明:各样品DPPH自由基IC50依次为抗坏血酸(0.031μg·mL-1),乌骨鸡蛋清酶解产物(0.732 mg·mL-1)和普通鸡蛋清酶解产物(2.013 mg·mL-1);各样品羟自由基IC50依次为抗坏血酸(0.179 mg·mL-1),乌骨鸡蛋清酶解产物(1.986 mg·mL-1)和普通鸡蛋清酶解产物(5.158 mg·mL-1);各样品超氧阴离子自由基IC50依次为抗坏血酸(0.086 mg·mL-1),乌骨鸡蛋清酶解产物(3.825 mg·mL-1)和普通鸡蛋清酶解产物(10.557 mg·mL-1)。经同等酶解消化处理后,乌骨鸡蛋清相比普通鸡蛋清具有更强的体外抗氧化活性。     

SPSS正交设计优化琼胶酶产生菌的发酵条件

实验以从海洋环境中分离获得的一株琼胶酶产生菌Halomonas sp.DT-3为出发菌株,研究其发酵产酶的最佳培养基组成和发酵条件.以琼胶、蛋白胨、酵母膏、NaCl、K2HPO4、MgSO4、CaCl2为考察因素,发酵液中琼胶酶活力为指标,通过SPSS软件设计L27(37)正交试验.结果表明:通过正交实验得出菌株发酵产酶最佳培养基组成为琼胶0.5%、NaCl3.5%、蛋白胨0.3%、酵母膏0.2%、K2HPO4 0.1mmol·L-1、MgSO4 0.3mmol·L-1、CaCl2 1mmol·L-1,菌株发酵琼胶酶活力稳定在191U·mL-1左右.     

固定化酶反应柱联用流动注射化学发光法测定抗坏血酸

基于抗坏血酸对Luminol-HRP-H2O2体系化学发光反应的抑制作用,结合固定化酶技术,建立了一种简单、快速检测抗坏血酸的流动注射化学发光分析新方法.该方法线性范围为4.0×10-8～4.0×10-4 mol·L-1,检测限为1.6×10-8 mol·L-1,进样频率为50样/h,对4.0×10-7 mol·mL-1抗坏血酸进行10次平行测定,其化学发光强度相对标准偏差为2.4%.该方法用于维生素C片剂中抗坏血酸含量的测定,结果令人满意.     

气单胞菌几丁质酶的性质与发酵条件

从浙江省土样中分离出一株产几丁质酶的好氧菌,经鉴定该菌属于气单胞菌属(Aeromonas sp.),命名为CJ-5菌株.经研究发现,CJ-5菌产生的几丁质酶是一种诱导、分泌型酶,其产酶的最佳发酵条件为起始pH7.0,温度为30℃,几丁质底物质量浓度为2%～2.5%,培养基装量为三角烧瓶总体积的20%.在3 L发酵罐中进行了扩大培养,发酵液的最高几丁质酶活力为0.41 U·mL-1.该酶的酶促反应最适温度为36℃,最适pH为7.0.在进一步的研究中,还发现CJ-5菌株是一株产双酶的菌株,既产几丁质酶,又产壳聚糖酶.     

氯酚对乙酰胆碱酯酶的抑制作用及其动力学研究

研究了2-氯酚(2-CP)及2,4-二氯苯酚(2,4-DCP)对乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的抑制作用及抑制动力学.结果表明,两种氯酚均能显著地抑制AChE的活性,2-CP及2,4-DCP对AChE酶活力的50%抑制浓度(IC50)分别为0.68,0.56mmol·L-1.2-CP及2,4-DCP对AChE的抑制作用类型为混合型的可逆抑制,2-CP对AChE的混合型抑制常数Ki,K′i分别为0.42,2.80mmol·L-1,2,4-DCP对AChE的混合型抑制常数Ki,K′i分别为0.37,0.70mmol·L-1,表明两种氯酚对游离酶的抑制作用均强于其对酶-底物复合物的抑制作用,且后者较前者对乙酰胆碱酯酶的抑制作用更强.     

FK506协同NGF促进缺氧神经细胞突起生长

为探讨免疫抑制药物FK506对缺氧神经细胞的影响和相关保护机制,构建了神经细胞缺氧模型,对比分析并定量检测了常氧与缺氧状态下,不同浓度FK506对类神经细胞PC12细胞突起生长的影响,通过蛋白免疫印迹法检测FK506在常氧与缺氧条件下对PC12细胞热休克蛋白HSP70、缺氧诱导因子HIF-1α表达的影响,探讨FK506保护缺氧性神经元受损的可能性机制.结果表明:在缺氧及常氧状态下,1~1 000nmol·L-1浓度范围内FK506均可协同神经生长因子(NGF)促进PC12细胞突起的生长,其中,FK506 100nmol·L-1与NGF 10ng·mL-1对缺氧后PC12细胞突起生长的协同作用最为显著.该配比的FK506协同NGF对缺氧相关保护蛋白表达具有促进作用,其抗氧化损伤的作用可能与促进HSP70和HIF-1α的表达有关.     

甲壳素脱乙酰酶产生菌的筛选及产酶条件

采用固体平板培养和液体发酵筛选产生甲壳素脱乙酰酶的真菌,并且研究了产酶条件.结果显示在42株真菌中有26株有甲壳素脱乙酰酶活性,最终确定了构巢曲霉和蓝色犁头霉两株产酶活性较高的菌株,它们产生的酶活性分别是343U.mL-1和289U.mL-1.不同的菌株的产酶培养基中的碳源均为含乙酰基的碳源,最适氮源分别为酵母粉和蛋白胨,产酶能力都受Mn2 和Co2 促进,受Cu2 、Fe2 、Fe3 的抑制;构巢曲霉的最适温度、最适pH分别为29℃,7.0~7.5,蓝色犁头霉的最适温度、最适pH分别为31℃,6.5~7.0,最适发酵时间均为96h.     

雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及其机制的研究

探讨雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用及其机制.采用台盼蓝染色法、透射电镜和流式细胞术,分别检测不同浓度和作用时间下,雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡以及对细胞Fas、FasL和NF-κBP65表达的影响.结果表明:0.5～2.5 μmol·L-1浓度雷公藤红素作用24 h,HL-60细胞凋亡率均明显高于不加药物的对照组(P<0.05).当雷公藤红素浓度为1.5 μmol·L-1时,细胞凋亡率最高并呈时间依赖效应.雷公藤红素作用的HL-60细胞,可呈现典型的细胞凋亡形态学改变.1.5 μmol·L-1雷公藤红素可明显提高Fas和FasL阳性HL-60细胞百分率(P<0.05),但抑制细胞NF-κBP65的表达(P<0.05).从而得出结论:雷公藤红素可有效地诱导HL-60细胞凋亡,其机制与雷公藤红素可上调Fas、FasL基因及下调NF-κB基因表达有关.     

阿维菌素的环境雌激素活性和生殖毒性评价

采用0.2, 2.0, 20.0 μg/L阿维菌素暴露雄性金鱼(Carassius auratus) 21 d,以雄鱼卵黄原蛋白产生、生殖腺指数、γ-谷氨酰转移酶和乳酸脱氢酶活性为生物标志物,评价了阿维菌素的环境雌激素活性和生殖毒性.结果表明,阿维菌素不能诱导雄性金鱼分泌卵黄原蛋白,可能不具有环境雌激素活性.但是经阿维菌素暴露21 d后,雄鱼生殖腺指数降低,其中20.0 μg/L暴露组(0.478±0.098)与对照组(0.751±0.325)相比差异显著.阿维菌素还抑制了精巢γ-谷氨酰转移酶活性,20.0 μg/L暴露组((3.07±0.66) U·L-1·mg-1)与对照组((4.61±0.91) U·L-1·mg-1)相比差异显著.阿维菌素降低了雄鱼生殖腺指数、抑制了精巢γ-谷氨酰转移酶活性,表明其对鱼类具有潜在的生殖毒性.     

舟山地区抗Mn~(2+)、Cr~(6+)和产功能酶嗜盐菌的筛选

以浙江舟山地区近海和盐田样品中分离纯化的120株嗜盐菌为材料,筛选产功能酶的菌株,发现其中淀粉酶产生菌有8株,蛋白酶产生菌有5株,脂肪酶产生菌有23株,其中HS238和HS225产量较高,在分离菌株中未检测到纤维素酶活性.选取其中13株进行金属敏感性实验,结果显示菌株HS223,HS239,HS254可以抗2mg·mL-1Mn2+,所有菌株都耐受培养基中10μg·mL-1Cr6+,但没有筛选到产表面活性剂的菌株.     

黄姑鱼幼鱼对硫酸铜和甲醛的耐受性研究

为掌握黄姑鱼幼鱼对硫酸铜和甲醛的耐受性,采用静态试验方法研究了水温在26~28℃条件下,2种药物对体长(1.48±0.35)cm、体重(0.43±0.09)g黄姑鱼幼鱼的急性毒性.结果显示,硫酸铜对黄姑鱼幼鱼的半致死浓度C_(l50)(8 h)、C_(l50)(24 h)、C_(l50)(48 h)、C_(l50)(72 h)、C_(l50)(96 h)分别为1.55,1.27,0.89,0.59,0.57 mg·L~(-1),安全质量浓度值为0.13 mg·L-1;甲醛对黄姑鱼幼鱼的C_(l50)(8 h)、C_(l50)(24 h)、C_(l50)(48 h)、C_(l50)(72 h)、C_(l50)(96 h)分别为295.02,155.98,88.88,50.01,39.48 mg·L-1,安全质量浓度值为8.66 mg·L-1.结果表明,2种药物对黄姑鱼幼鱼的毒性都比较大,使用时存在中毒风险,并且黄姑鱼幼鱼对硫酸铜的敏感度远高于甲醛,生产中应当谨慎使用.     

温泉瓶尔小草离体培养及种质试管保存培养基的筛选

以温泉瓶尔小草新生幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适宜的离体培养和种质试管保存各阶段培养基.结果表明,最适合愈伤组织诱导的培养基为WPM＋ZT0.50 mg·L-1＋2,4-D1.90 mg·L-1,诱导率为96.5%;芽苗分化的培养基为WPM＋ZT1.70 mg·L-1＋NAA0.10 mg·L-1,分化率为99.0%;生根培养基为1/4MS＋IAA0.05 mg·L-1＋IBA0.03 mg·L-1,生根率达97.8%以上;试管保存培养基为WPM＋KT1.10 mg·L-1＋根皮苷3.20 mg·L-1,通过24个月的保存,芽苗生长率仅在6.5%以下.试验结果证明,成功建立了温泉瓶尔小草离体培养体系,常温条件下利用延缓生长的方法在试管内保存温泉瓶尔小草种质是可行的.     

Co-MOF-74衍生介孔碳材料的制备及其电容性能

以含Co的金属有机框架材料Co-MOF-74为前驱体,通过高温碳化和酸洗等步骤,制备了介孔碳材料C-MOF-T,氮气吸脱附测试表明其具有介孔结构,比表面积最高达到1 289 m~2·g~(-1),介孔孔隙率达到96%。采用循环伏安法、恒电流充放电和电化学交流阻抗等电化学方法研究了碳化温度对介孔碳材料电容性能的影响。碳化温度为800℃时制备的碳材料在电流密度为0. 1 A·g~(-1)时比电容可达187 F·g~(-1);电流密度为20 A·g~(-1)时,比电容仍有117 F·g~(-1)。在电流密度1 A·g~(-1)条件下,经4 000次循环后仍能保持95. 7%的比电容,表明了该碳材料具有优异的倍率性能和循环稳定性,在超级电容器领域具有应用潜力。     

免疫多糖对日本溶菌酶和超氧化物歧化酶活性的影响

通过对日本(Charybdis japonica)进行免疫多糖、免疫多糖+溶藻弧菌、溶藻弧菌、生理盐水4种方法的处理,测定日本肝胰腺及肌肉中溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化,探讨免疫多糖对日本溶菌酶和超氧化物歧化酶活性的影响.结果表明：日本肝胰腺中LZM 和 SOD 的酶活均高于肌肉中的酶活,且免疫多糖对肝胰腺的免疫增强效应显著高于肌肉;免疫多糖组肝胰腺和肌肉中LZM酶活,在注射后24 h时显著升高至峰值(P<0.05),分别为(11.2±2.78) U·mg-1和(3.75±1.05) U·mg-1; SOD酶活也在24 h达到最高值,分别是对照组的2.2倍和1.4倍;免疫多糖+溶藻弧菌组在72 h时,肝胰腺和肌肉中的LZM酶活分别高出溶藻弧菌组62.8%和75.2%,2个组织中SOD酶活同样显著高于溶藻弧菌组(P<0.05),是溶藻弧菌组的3.5倍和4.2倍.由此可见,免疫多糖对日本免疫功能有增强作用,可以提高日本的抗病能力.     

RP-HPLC法测定虫草菌丝体益气血口服液中腺苷

建立反相液相色谱法测定虫草菌丝体益气血口服液中腺苷的含量.色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为甲醇-乙腈-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(5:5:90),流速1.0 mL·min-1,检测波长260 nm.腺苷在(8～200)μg·mL-1具有良好的线性关系,相关系数0.999 8,平均回收率96.8%.     

琼脂糖酶产生菌Brevundimonas sp.发酵条件探讨

为研究微生物发酵法获取高产量、高活性的琼脂糖酶, 以海洋细菌Brevundimonas sp.为实验菌株, 首先采用单因子分析法对发酵条件进行初步研究, 然后用部分析因试验设计方法选出2个显著因子热休克时间和发酵时间, 用中心组合设计方法进行试验设计及其发酵条件优化, 最后建立二次响应面回归模型. 从该模型可获得适宜发酵条件: 接种量1.5%, 热休克时间31s, 初始pH 7.5, 摇床转速120r·min-1, 发酵时间28.4h, 发酵温度23.5℃. 发酵条件优化后可产最大酶活502.2U·mL-1, 产酶活力较优化前提高了35%.     

固定化新月菱形藻的制备及其对N、P吸收的影响

为优化固定化新月菱形藻(Nitzschia closterium)在污水中去氮、磷的效果, 以褐藻酸钠为固定化载体, 采用单因子试验方法, 研究了不同包埋藻细胞密度(0、0.27×107、0.81×107、1.35×107、1.89×107、2.43×107 cells?mL-1), 不同藻球直径(2.5、3.0、3.5、4.0mm), 3% CaCl2溶液不同加固时间(0、1、2、4、6、8h)、不同藻球用量(0、7.5、15.0、22.5、30.0、37.5g?L-1)和不同加固时间下反复使用次数对氮、磷的去除效果. 结果表明: 包埋藻细胞密度为1.35×107 cells?ml-1时单位藻细胞去除NH4+-N和PO43--P的效果较好. 藻球规格对NH4+-N和PO43--P去除效率的影响不显著(P>0.05). CaCl2加固时间2~8h对藻球中藻细胞生长、NH4+-N和PO43--P去除率没有显著影响(P>0.05), 但均显著高于加固1h, 未经加固的藻球极易破损. 藻球投放质量越大, NH4+-N和PO43--P的去除速度越快, 投放量为30g?L-1, 培养9d后, NH4+-N和PO43--P去除率可达80%以上. 固定化藻球反复使用3次以上, 其NH4+-N和PO43--P的去除效率下降. 由此得出: 固定化新月菱形藻球包埋藻细胞密度以1.35×107 cells?mL-1, 藻球直径3.5mm为佳; 藻球制作时在3% CaCl2溶液中加固最佳时间为2h; 藻球用量为30g?L-1; 对藻球定期(9d)进行加固, 有利于增加藻球使用寿命, 并保持其较好的氮、磷去除率.     

鲭鱼中组胺降解酶产生菌的分离筛选和基本酶学性质研究

鲭鱼亚目的海洋鱼类在捕获后易产生组胺,导致鲭鱼中毒．为研究组胺消长与微生物的关系,通过平板分离和摇瓶发酵,以荧光光度法测定酶活力,从鲭鱼（Pneumatophorus japonicus）皮肉、内脏和腮中分离筛选组胺降解菌,并对所产组胺降解酶的酶学性质进行研究和分析．结果表明：自内脏中分离筛选到一株组胺降解酶活力较高的革兰氏阴性杆菌,从生长产酶曲线推测该酶为初级代谢产物．该酶反应的最适温度为35℃,最适pH为7．2．在pH6．0～8．0和温度20～35℃范围内有较好的稳定性．Mn^2＋、Ca^2＋、Na^-、Mg^2＋、K^＋等金属离子存在时酶活力增加。Zn^2＋、Al^3＋、Fe^3＋、Fe^2＋、Cu^2＋等金属离子存在时,酶活力下降,在EDTA存在条件下酶活力完全丧失．对其动力学研究表明,在甘氨酸-NaOH缓冲反应体系中,最大反应速度Vmax=156．25U·mL^-1,米氏常数Km=0．22mg·mL^-1．组胺降解菌国内还朱见报道,研究结果对进一步研究水产品组胺生物控制技术具有重要意义．     

大蒜素对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响及机制

探讨大蒜素(DT)对人上皮性卵巢癌SKOV-3/DDP细胞的增殖抑制及诱导其细胞凋亡的分子机制。用人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:①正常对照组;②DT组:于培养基中加入DT(终浓度分别为5、10、20、40μg·mL-1)分别作用细胞24、48和72h;③顺铂(DDP)组(5μg·mL-1);④DT+DDP组(20μg·mL-1 DT和5μg·mL-1 DDP)。MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白表达。与正常对照组比较,DT组SKOV-3/DDP细胞增殖抑制率与凋亡率均有显著的增加(P0.05),且作用呈剂量和时间依赖性,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调(P0.05);与DT或DDP组比较,DDP+DT组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P0.05),且Bax mRNA及蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调的程度大于单用组(P0.05)。大蒜素对SKOV-3/DDP细胞有显著的抑制增殖和促凋亡的作用,增加SKOV-3/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与大蒜素调控Bax/Bcl-2蛋白表达有关。