碱性蛋白质毛细管电泳分离研究

碱性蛋白质毛细管电泳分离研究任吉存，邓延倬，程介克（武汉大学化学系分析测试科学系，武汉，４３００７２）关键词毛细管电泳，碱性蛋白质，吸附，精氨酸，赖氨酸蛋白质的吸附作用严重影响了毛细管电泳分离蛋白质的重现性［１］．为此，人们寻找各种途径来克服蛋白质的...     

金纳米微粒修饰毛细管电泳分离蛋白质的研究

报道了金纳米微粒(Au NP)修饰毛细管电泳分离蛋白质的方法.采用物理吸附法将Au NP修饰在熔融石英毛细管内表面,制备成Au NP修饰毛细管.探讨了修饰剂Au NP的浓度对电渗流及蛋白质分离的影响.结果表明,Au NP修饰的毛细管能有效地抑制电渗流及蛋白质在毛细管内壁上的吸附,提高分离效率.在优化的实验条件下,实现了...     

聚合物涂层技术在毛细管电泳分离蛋白质中的应用

影响毛细管电泳分离蛋白质效率和重现性的主要原因是毛细管壁对蛋白质的吸附.本文综述了解决这一问题的途径,包括极端pH值法、添加小分子添加剂、对毛细管内壁改性等方法,重点介绍并比较了用于毛细管内壁改性的两类聚合物涂层-化学键合和物理吸附的涂层.分别讨论了两类涂层在对电渗流的抑制和调节、对蛋白质吸附的阻止等方面的作用效果,并且对同种涂覆机理下不同聚合物的涂覆效果做了相关比较.总体上说,物理吸附的涂层比化学键合的涂层性能优越,因此在毛细管涂覆领域更受欢迎.尽管目前该领域的工作取得了较大进展,但仍未找到一种对所有种类蛋白质的分离都有效的普适性涂层,因此未来的一段时间内分离复杂组分的蛋白质仍面临着挑战.     

径向电场调制毛细管电泳法用于蛋白质分离

利用自制的双向电场控制毛细管电泳新系统,考察了蛋白质的分离情况.结果发现,在低pH值下,通过施加径向电场,不仅可改变电渗流的大小和方向,而且能抑制蛋白质的吸附,进而实现对蛋白质分离效率和分离速度的调控.研究结果表明,可通过物理化学方法实现毛细管电泳的动态或随机调控,这对许多生物样品分离有实际意义.     

电场方式对毛细管电泳分离DNA的影响

以羟乙基纤维素为筛分介质, 在直流、方波脉冲、反向脉冲电场中对0.1～10.0 kbp范围的DNA样品进行分离, 改变脉冲电场调制深度, 探讨电场方式对毛细管电泳分离DNA的影响. 研究发现, 其它实验条件一定时: (1)直流电场下, 小片段DNA (<1.0 kbp)可以被有效分离, 大片段DNA (>1.0 kbp)迁移时几乎重叠在一起; (2)方波脉冲电场下, 增大调制深度可提高大片段DNA (>1.0 kbp)分离效果, 但降低了部分小片段DNA (0.6～1.0 kbp)的分离度; (3)反向脉冲电场下, 可以实现0.1～8.0 kbp范围内各个DNA片段的有效分离, 改变调制深度会影响样本DNA的分离时间. 并将反向脉冲电场应用于毛细管电泳分离λ-DNA的EcoT14 I/Bgl II限制性内切酶酶切片段. 结果表明, 反向脉冲毛细管电泳技术具有快速、准确、重复性高等特点, 可用于宽分子量范围DNA片段分离.     

高效毛细管电泳分离手性物质

本文对近年来发展起来的高效毛细管电泳技术（ＨＰＣＥ）在手性分离方面的工作做了评述，讨论了高效毛细管电泳手性对映体的分离方式和定量方面，并对在这一重要领域中可能的发展趋势做了展望。     

电解质溶液组成对低分子量阴离子毛细管电泳分离的影响

研究了毛细管电泳间接紫外检测法测定低分子量阴离子时电解质溶液中背景电解质、电渗流改性剂、ｐＨ值、有机溶剂等对分离的影响；比较了铬酸根、邻苯二甲酸根、苯甲酸根３种背景离子对不同迁移率阴离子分离的影响，并对间接紫外检测的定量基础及灵敏度进行了讨论；考察了３种不同长链烷基三甲基季铵盐电渗流改性剂浓度对阴离子迁移时间和电渗迁移率的影响，结果表明电渗流的改性效果与烷基链的长度有关；ｐＨ影响阴离子的有效迁移率     

聚合物涂层在毛细管电泳分离蛋白中的研究进展

毛细管电泳具有分析时间短,分离效率高,样品消耗量少等优点,在生物样品分离,特别是蛋白质分析领域有重要应用。然而,毛细管内壁硅羟基的解离给分离结果带来诸多不良影响。聚合物涂层能够抑制蛋白质在毛细管内壁的吸附以及调控电渗流,故对毛细管内壁进行有效修饰能够提高其对蛋白质的分离效率及分离稳定性。该文主要综述了动态及静态聚合物涂层毛细管的最新研究进展,并概述了近些年基于多巴胺/聚多巴胺发展起来的涂层毛细管的研究进展,最后展望了聚合物涂层毛细管的发展趋势。     

聚乙类吡咯烷酮动态涂敷毛细管电泳柱分离碱性蛋白质

以聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）为添加剂对毛细管柱进行动态修饰,用于碱性蛋白分离。对４种碱性蛋白质进行分离,实验结果表明聚乙烯吡咯烷酮能够很了地抑制电不渗流（ＥＯＦ）及碱性蛋白在石英毛细管壁上的吸附作用。在ｐＨ４．０,ＰＶＰ浓度（Ｗ／Ｖ）为０．４％时,ＥＯＦ仅为１．３５×１０＾－９ｍ＾２／Ｖ．ｓ,平均柱效可达５×１０＾５理论塔板数／ｍ。每次运行之间（ｎ＝６）,天与天之间（ｎ＝６）,迁移时间的相对标准偏差     

新型共聚物涂层毛细管电泳柱及其分离蛋白质的研究

 研究新型共聚物——ＺＢ系列表面键合剂在毛细管电泳中的应用。采用物理吸附的方法制备了ＺＢ－００４,ＺＢ－０１４,ＺＢ－０１６等３种涂层毛细管柱,在ｐＨ３～５范围内,３种涂层均能有效地降低管壁对蛋白质的吸附作用和电渗流,其中亲水性较弱的ＺＢ－００４涂层的分离性能最好。在ｐＨ＜５时,涂层具有较高的稳定性和良好的分析重复性,但在更高的ｐＨ值条件下,仍然存在着峰形畸变和电渗流迅速增加的现象。     

高效毛细管区带电泳法分离人血清蛋白质的研究

 研究了高效毛细管区带电泳分离人血清蛋白质的电泳行为及实验条件 ,建立了分离血清蛋白质的高效毛细管区带电泳法。血清样品经硼酸缓冲液 (5 0 mmol/L,p H8.80 )稀释后 ,以 0 .1 mol/L硼酸缓冲液 (p H9.3 5 ,含4g/L PEG80 0 0 )为电泳介质 ,在 5 0 μm i.d.× 3 7cm弹性石英毛细管柱 (有效柱长为 3 2 cm)中进行电泳分离 ,以2 0 0 nm紫外波长检测。方法简便、快速、重复性好 ,1 2 min内便可完成对血清中蛋白质的电泳分离。     

毛细管电泳技术对手性药物西酞普兰的拆分方法研究

利用手性试剂磺化β-环糊精(S-β-CD),建立了对药物西酞普兰的毛细管电泳(CE)拆分方法。实验考察了背景电解液(BGE)组成及浓度、pH值、手性拆分试剂种类及其浓度对拆分结果的影响。优化后的分离条件为:BGE采用20 mmol/L柠檬酸+0.04%S-β-CD(pH=5.50),采用压力进样0.5psi、5s,分离电压为+20kV,紫外检测波长为205nm。结果表明:CE对西酞普兰的两个对映体的检出限均为90μg/L,迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)都低于3.0%(n=5),在0.05~100mg/L范围内有良好的线性关系,其线性相关系数(R2)都大于0.998。该方法可成功用于商品药物来士普的质量检测,回收率在103%~108%之间。     

毛细管区带电泳分离小麦种子醇溶蛋白的研究

利用毛细管区带电泳（ＣＺＥ）检测了在不同电泳条件下分离小麦种子醇溶蛋白的效果。结果显示,用碱性缓冲液（０．０６ｍｏｌ／Ｌ硼酸钠,ｐＨ９．０,并含有２０％乙腈和１％ＳＤＳ）及４７ｃｍ×５０μｍｉ．ｄ．毛细管柱,在１５ｋＶ电压和３０℃的条件下可获得较高的分辨度和重复性。     

几种标准蛋白质的毛细管区带电泳的分离及其迁移行为

本文采用毛细管区带电泳分离了几种标准蛋白,研究了不同的清洗方式,不同ＰＨ的缓冲溶液等对迁移行为及分离的影响,并同时考察了迁移时间和相对迁移时间与操作电压的关系。     

对映异构体的高效毛细管电泳分离与测定

高效毛细管电泳是８０年代发展起来的一种高效、快速的新型分离技术，在对映异构体分离方面有着广泛的应用前景，本文介绍了这一新型分离技术用于对映体分离的基本原理，并列举了一些对映异构体分离的实例。     

奶制品中蛋白质测定的毛细管电泳法研究

本文利用毛细管电泳法研究了奶制品中蛋白成分的分离与测定。采用柠檬酸缓冲体系,对牛奶中的α-乳白蛋白(-αLa)、β-乳球蛋白(-βLg)、α-酷蛋白(-αCN)、β-酪蛋白(-βCN)、酪蛋白(-κCN)五种蛋白进行了很好的分离,其迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别小于0.2%和5%;检出限分别为0.01、0.03、0.02、0.02、0.02 mg/mL;加标回收率范围为84%~103%。应用该法测定了多种奶制品中的蛋白质含量。本法简便、快速、准确,为牛奶及奶制品质量的监控提供了一种新的手段。     

非水溶液毛细管电泳手性分离

对非水溶液毛细管电泳中手性分离的研究现状和发展趋势进行了简要的评述。主要是以手性分离中所用的手性试剂为线索，对它们在非水溶液中的应用情况及其对分离度、柱效和分离选择性的影响进行综述并与水溶液中的情况作了比较。对于在水溶液中已经得到应用而在非水溶液中未被使用的部分试剂也进行了简要地解释。     

毛细管区带电泳法研究肾上腺素类药物的手性分离

使用β－环糊精（β－ＣＤ）及β－ＣＤ－羧甲基（ＣＭ－β－ＣＤ）作为手性选择剂,采用毛细管区带电泳法（ＣＺＥ）对去甲肾上腺素、肾上腺素和异丙肾上腺素的手性分离进行了研究。对影响这类药物手性分离的主要因素〔手性选择剂、背景电解质（ＢＧＥ）、分离体系的酸度和温度〕进行了讨论,并对手性识别机理进行了探讨。     

毛果芸香碱对映体的毛细管电泳手性分离

采用β-环糊精及其衍生物作为手性选择剂对毛果芸香碱对映体进行了分离,研究了环糊精类型和浓度对分离的影响,同时考察了背景电解质pH、操作电压和温度等因素对对映体分离的影响;结果表明,采用羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)可以使毛果芸香碱对映体达到基线分离,优化条件下手性分离度可达2．79,为此类药物提供了一种简便、快速的毛细管电泳手性分离分析方法。