急性力竭运动对大鼠下丘脑氨基酸神经递质的影响

用激光诱导荧光检测的高效毛细管电泳结合微透析技术测定急性力竭运动前后的大鼠下丘脑区细胞外液中的氨基酸神经递质的含量。实验结果表明，急性力竭运动后大鼠下丘脑区的细胞外液中的6种氨基酸（精氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、丙氨酸、γ－氨基丁酸）有统计意义的增加，这一结果显示了下丘脑区的氨基酸在应激过程中很可能起着重要的作用。     

大鼠血浆中痕量氨基酸的柱前衍生-高效液相色谱串联质谱测定

以1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)作为柱前荧光衍生试剂,在Hypersil BDS C18(4.6mm×200mm,5μm)反相色谱柱上,荧光检测波长为390nm(激发波长为333nm),采用梯度洗脱实现了20种氨基酸标准品衍生物的分离检测。20种组分的线性范围为51.6fmol~105.6pmol,线性回归系数均大于0.9995;检出限为6.3~177.6fmol(S/N=3∶1)。经柱后串联质谱电喷雾电离源(ESISource)实现了各组分的质谱鉴定,并以酪氨酸(Tyr)衍生物为例进行了质谱裂解机理解析。对A、B、C三组(A:安静对照组;B:运动力竭即刻组;C:力竭恢复12h组)24只大鼠血浆中氨基酸的定量测定结果表明,运动力竭即刻较安静状态大鼠血浆氨基酸含量明显增加;力竭恢复12h后血浆氨基酸水平基本恢复到运动前状态。方法的灵敏度高、重现性好,为大鼠血浆中氨基酸的测定提供了一种新方法。     

家兔下丘脑与腰髓间的直接联系

本文将辣根过氧化物酶(HRP)注射于7例家兔的腰6段内以后,追踪了下丘脑中的标记.除观察了逆行标记细胞的分布外,还发现了明确的顺行标记纤维及终枝. 下丘脑-脊髓投射细胞主要分布于注射侧的下丘脑后区、背侧区、外侧区及室旁核中;穹窿周围核中也有一些;少见或偶见于结节区、乳头体上核及视上核之背侧方. 脊髓-下丘脑投射主要终止于对侧,经两条入路:(1)背侧纵束,分布于下丘脑后区,可能还至乳头体上核;(2)在乳头体丘脑束的腹侧方由外向内侧横行,止于下丘脑内、外侧区的背侧部,少量散入腹侧区。     

川芎嗪对脑缺血下大鼠纹状体区痕量氨基酸类神经递质的影响

采用脑内微透析技术结合激光诱导荧光检测的高效毛细管电泳研究了脑缺血下盐酸川芎嗪注射液对大鼠纹状体区氨基酸类神经递质含量的影响.在优化的分离条件下,各氨基酸在1×10^-6-1×10^-8mol/L的浓度范围内与荧光强度呈良好的线性关系,线性相关系数达到0.99以上,检测限低于1.6×10^-9mol/L,适合于大鼠纹状体区微透析样品中的痕量氨基酸类神经递质的测量.实验结果表明,脑缺血时,使用盐酸川芎嗪注射液可显著降低细胞外兴奋性氨基酸神经递质谷氮酸(G lu)和天门冬氨酸(Asp)的浓度(P<0.05),同时可显著升高抑制性氨基酸神经递质γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(G ly)的浓度(P<0.05).这一结果将对阐明盐酸川芎嗪注射液治疗缺血性脑血管疾病的有关机理提供帮助.     

操作式条件反射训练对大鼠脑海马区游离氨基酸的影响

利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生-反相高效液相色谱(HPLC)分离-荧光检测的分析方法测定了海马区细胞外液中游离氨基酸的含量,对少至5μL的微透析液中的18种氨基酸进行了定性和定量分析。当信噪比为3时,各氨基酸的最小检出量在0.5～6.0pmol之间。实验结果表明,操作式条件反射学习训练和与之形成的巩固记忆可使海马区递质氨基酸及其它游离氨基酸的释放和/或代谢量增强。这一结果支持海马是与学习记忆有密切关系的脑神经核团的看法。     

大鼠端脑中神经递质的荧光衍生化高效液相色谱质谱联用法研究

以1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)作为柱前荧光衍生试剂,在Hypersil BDS C18(4.6 mm×100 mm,5 μm)反相色谱柱上,荧光检测波长为390 nm(激发波长为333 nm)下,采用梯度洗脱实现了5种神经递质标准品(谷氨酸、γ-氨基丁酸、多巴胺、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸)衍生物的同时分离检测.5种组分的线性范围为24 fmol～200 pmol,线性回归系数均大于0.9997;检出限为4.0～12.6 fmol(S/N=3∶1).在柱后在线质谱电喷雾电离源(ESI Source)正离子模式下实现了各组分的快速质谱鉴定,对其二级质谱裂解碎片峰进行了归属,并以5-羟色胺衍生物为例进行了质谱裂解机理解析.对A、B两组(A:安静对照组,B:运动训练组)4种取样状态(安静、运动1 h、力竭即刻、力竭后恢复12 h)下的64只大鼠端脑组织中5种神经递质的定量测定结果表明,长期中等强度的运动训练能够有效提高大鼠的运动能力及耐力运动后疲劳恢复能力.方法的灵敏度高、重现性好,为大鼠端脑中氨基酸类和单胺类神经递质的同时测定建立了一种新方法.     

镧对大鼠海马神经元瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流动力学的影响

利用全细胞膜片钳技术, 在急性分离的大鼠海马锥形细胞上研究了La³⁺对快速激活与失活的瞬时外向钾电流IA和平台电流IK的影响. 结果发现, 随着细胞外液中La ³⁺浓度的增加, La ³⁺对IA的抑制率逐渐增大, 而且具有电压依赖性; 10^-5 mol/L La ³⁺可改变IA激活曲线和失活曲线的半数激活电压Vh值, 使激活曲线和失活曲线左移, 但不改变其斜率因子k值. 细胞外液中 La ³⁺对IK及其激活曲线都没有明显作用. 这可能是镧导致海马神经元异常的作用机制之一.     

固相萃取-高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术分析大鼠血浆中的氨基酸及其在电离辐射损伤动物模型中的应用

建立了基于高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI MS/MS)与固相萃取(SPE)相结合的大鼠血浆中氨基酸的分析方法。以硅胶基质的强阳离子交换固相萃取柱(SCX-SPE)提取血浆中的氨基酸和降低基质效应,HPLC-ESI MS/MS进行测定。对SPE处理的样品pH值进行了优化,发现pH 2.8时SCX-SPE提取氨基酸的回收率和重现性比较令人满意。除赖氨酸和鸟氨酸外,氨基酸的总体回收率在33.6%～107.7%之间;除精氨酸外,氨基酸标准曲线的线性相关系数r2＞0.99; 25种氨基酸测定的日内精密度和日间精密度较好,相对标准偏差(RSD)分别低于9.0%和19.1%。此外,将该分析方法用于电离辐射对大鼠血浆氨基酸代谢的影响研究。结果表明,辐射可导致血浆中氨基酸代谢紊乱,并且其紊乱程度与电离辐射损伤程度正相关。研究结果为筛选新的急性辐射损伤标记物研究提供了实验依据。     

微乳液毛细管电动色谱法测定大鼠滑膜细胞中雷公藤甲素的含量

建立微乳液毛细管电动色谱法快速测定大鼠滑膜细胞内外液中雷公藤甲素含量的方法.在雷公藤甲素不同给药时间孵育条件下,将滑膜细胞分为空白对照组和给药组,测定滑膜细胞内外液中雷公藤甲素含量,并比较了细胞外液中雷公藤甲素在不同给药时间的含量变化.毛细管电泳运行缓冲液组成:1％(w/V)SDS,3％(V/V)正丁醇,1％(V/V)乙酸乙酯,96％(V/V)5 mmol/L硼砂-10 mmol/L磷酸盐溶液,pH 9.0;运行电压:25 kV;压力进样:0.5 psi×6 s;电泳操作温度:25℃;检测波长:214 nm.结果表明,细胞内外液中的雷公藤甲素所呈现的线性关系良好,相关系数分别为0.9995和0.9991.当给药24h时,细胞内外液中的雷公藤甲素浓度分别为0.736和20.745 μg/mL.本方法简单准确、灵敏度高、精密度好,可用于滑膜细胞内外液中雷公藤甲素浓度的动态变化规律研究,为进一步研究中药有效成分对滑膜细胞功能和活性的影响提供方法学基础.     

基于~1HNMR的代谢组学方法对大鼠砒霜给药后血清的研究

运用代谢组学方法研究了Wistar大鼠灌胃给药砒霜2和10 mg/kg剂量血清代谢的变化。通过核磁共振技术检测大鼠血清的代谢指纹图谱,然后利用主成分分析法分析空白组和砒霜给药组的代谢物差异,研究不同剂量砒霜在大鼠体内的急性生物效应。结果表明,砒霜对大鼠的急性靶向器官是肝脏,随着剂量增大,毒性增强;低剂量给药导致氧化应激,高剂量给药诱导细胞凋亡;低和高剂量给药均出现糖、氨基酸及脂质代谢紊乱,且能量代谢异常。     

大鼠小肠壁细胞葡萄糖转运蛋白一级结构及功能的研究

应用序列同源性cDNA作探针,从大鼠小肠壁细胞cDNA文库中筛选出了葡萄糖转运蛋白cDNA克隆。经双脱氧法测定该克隆的cDNA全序列为2466bp,翻译区1566bp,编码522个氨基酸。从氨基酸全序列分析得到12个疏水区段,每区段为21个氨基酸。此葡萄糖转运蛋白可能在细胞膜上跨膜12次,构成葡萄糖通道。     

微透析-HPLC测定甘草次酸对雄黄染毒小鼠海马细胞外液中Cys和Hcy含量的影响

建立微透析-HPLC测定小鼠海马细胞外液中Cys和Hcy含量的方法 ,探讨甘草次酸对雄黄染毒小鼠海马细胞外液中Cys和Hcy含量的影响.结果表明,所建方法准确、可靠,具有连续活体取样、实时动态检测的优势.此外,甘草次酸对雄黄引起的小鼠海马细胞外液中Cys和Hcy含量的降低有保护作用.     

高氯酸镱对大鼠背根神经元细胞毒性及膜上钾通道的影响

研究了高氯酸镱(Yb(ClO4)3)诱导大鼠背根神经(DRG)元凋亡、引起胞内钙离子浓度变化以及对膜上钾离子通道的影响.急性分离大鼠DRG细胞,用不同浓度的Yb(ClO4)3处理DRG细胞24和96h,采用流式细胞仪和激光共聚焦法,检测细胞的凋亡和细胞内钙离子荧光强度的变化.利用全细胞膜片钳法,记录Yb(ClO4)3对细胞膜上不同钾通道电流的影响.结果表明,10,100,1000μmol/L Yb(ClO4)3处理DRG神经元24h,细胞基本不表现凋亡;处理96h,细胞出现明显的凋亡(P0.05～0.01),尤其是1000μmol/L Yb(ClO4)3,凋亡率达到了(55.23±3.76)%(P0.01).经Yb(ClO4)3孵育的DRG神经元胞内的Ca2+的荧光强度显著增大;Yb(ClO4)3抑制背根神经节纤维和神经元突起的生长.Yb(ClO4)3抑制DRG神经元膜上的钾电流,胞内和胞外的Yb(ClO4)3作用钾通道的部位不同.细胞外液中的Yb(ClO4)3不同程度地阻断了瞬间外向钾电流IA,对延迟整流钾电流几乎没影响;往电极内液中加入同样浓度的Yb(ClO4)3对IA影响很小,却特异性地阻断了延迟整流钾电流IK.10μmol/L Yb(ClO4)3使IA的激活和失活过程都显著右移,延长了瞬间外向钾电流达到峰值的时间和快速失活时间常数,增加神经元的兴奋性.     

黄芪黄酮干预脾虚水湿不化大鼠血浆代谢组学研究

采用高效液相色谱结合飞行时间质谱检测正常大鼠、脾虚水湿不化证大鼠及黄芪黄酮组分干预后大鼠血浆内源性代谢物变化,获取大鼠血浆代谢图谱,研究黄芪黄酮组分干预脾虚水湿不化证的作用机制.采用高脂低蛋白饮食加负重游泳力竭建立脾虚水湿不化证大鼠模型,选择Halo C18色谱柱,流动相为0.05％甲酸-水与0.05％甲酸-乙腈,梯度洗脱,利用液相色谱-串联质谱分析测定大鼠血浆样品.利用主成分分析法对造模前后大鼠血浆样本进行代谢轮廓分析,结合变量投影重要性及显著性分析等筛选对分组贡献最大的差异标志物及相关通路,阐明药物的作用机制.结果表明, 黄芪黄酮组代谢轮廓异于模型组,而接近于正常组,共鉴定出了包含甘油磷脂类、鞘酯类、氨基酸类等在内的11种潜在生物标志物,其代谢通路包括三羧酸循环、甘油磷脂代谢、脂肪酸代谢及氨基酸代谢等,主要涉及体内能量代谢和脂肪代谢.黄芪黄酮干预脾虚水湿不化证大鼠后, 宏观指标(如体重、自主活动)和微观指标(如代谢标志物、血脂)均明显回调,表明黄芪黄酮可能主要通过调节能量代谢、脂肪代谢等途径而发挥健脾利水作用.     

硅酸铜分离微生物发酵液中的氨基酸

采用硅酸铜对微生物发酵液中的氨基酸进行了分离研究.通过静态吸附试验考察了硅酸锌和硅酸铜对微生物发酵液中氨基酸的吸附影响.结果表明,硅酸铜比硅酸锌更适合分离发酵液中的氨基酸,并确定了以硅酸铜为填料的分离条件:上柱发酵液pH=2,流速0.2BV/h,洗脱液为1mol/L的NH4Cl.在该条件下能够一次性将3种不同的氨基酸较好的分离.     

给药硝酸镨后大鼠尿液和血清的核磁共振代谢组学研究

采用基于核磁共振的代谢组学方法,分析了腹腔注射给药2,10和50 mg/kg体重剂量硝酸镨(Pr(NO3)3) 168 h内Wistar大鼠尿液和血清的核磁共振氢谱.由尿液及血清中内源性代谢物如柠檬酸、琥珀酸、α-酮戊二酸、肌酸酐、N-氧三甲胺、氨基酸、乳酸、牛磺酸及葡萄糖等的浓度变化,并结合大鼠血清指标研究了轻稀土化合物Pr(NO3)3在大鼠体内的急性生物效应.结果表明,Pr(NO3)3急性毒性的靶向器官为肝脏和肾脏,但以肝脏为主,且呈现明显的剂量-反应关系.低、中剂量组的Pr(NO3)3会通过改变大鼠体内酶代谢而造成肝脏线粒体中的能量代谢(脂肪、糖代谢)紊乱;同时,Pr(NO3)3还会影响肾脏的正常功能,改变肾脏中渗透质的平衡,影响肾脏对氨基酸的重吸收和利用.     

用溶出伏安法测定蛋白胨细胞生长液中易变形态铜

采用阳极阶梯溶出伏安法 ,测定了蛋白胨细胞生长液中的易变形态铜 ,并获得了总铜量中易变形态的摩尔分数以及易变形态的表观稳定常数。通过使用交换介质法 ,较好消除了由于蛋白胨细胞生长液中各种氨基酸或其它组分吸附在汞膜表面而引起的干扰     

雄黄染毒后大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化

研究了雄黄对大鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的影响.将32只Wistar大鼠随机分为对照组(0.5%CMC-Na)以及低剂量(0.3g/kg)、中剂量(0.9g/kg)、高剂量(2.7g/kg)雄黄染毒组,通过连续灌胃给予雄黄混悬液两周.采用高效液相色谱-柱前衍生化法测定了大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化.结果表明,与对照组比较,低剂量组大鼠脑组织中丝氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸含量明显增加.中、高剂量组大鼠脑组织中同型半胱氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸和天冬氨酸含量明显比对照组的低.总体而言,雄黄可对大鼠脑组织氨基酸类神经递质产生影响,氨基酸类神经递质可能是雄黄毒性作用的靶点之一.     

细菌胞外液生物合成纳米硒的理化性质及抗菌活性研究

本文以一株海洋菌株Bacillus sp.Q72的胞外液为还原体系,实现了Se(Ⅳ)到纳米硒(SeNPs)的生物转化。利用FTIR、UV-Vis、XRD、SEM、TEM、XPS、拉曼光谱、粒度分析等对生物合成SeNPs的理化性质进行了研究,随后考察了SeNPs的抗菌活性和细胞毒性。结果表明,菌株Bacillus sp.Q72胞外液生物合成的SeNPs为球型,平均粒径为187.6nm,其表面包覆着蛋白质、核酸等生物大分子。SeNPs对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均表现出较好的抑菌活性,同时具有较低的细胞毒性。利用细菌胞外液生物合成纳米硒,避免了利用菌体直接还原在分离过程中的繁琐操作,为SeNPs的生物合成提供了新方法。     

核磁共振技术测试不同性别大鼠尿液代谢物的研究

采用核磁共振波谱技术测试不同性别大鼠尿液代谢物,分析性别因素对大鼠尿液代谢成分的影响.大鼠尿液核磁共振氢谱（1HNMR谱）结果采用主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（orthogonal to partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA）方法分析,得到不同性别大鼠尿液中的差异性代谢物.PCA分析结果显示2组尿液代谢成分有明显的差异,进一步进行OPLS-DA分析可以判别出2组尿液中具有差异性的代谢物.结果显示,雌性大鼠尿液中的丙氨酸、缬氨酸、鸟氨酸等氨基酸类以及乙酸、硫胺、氨基马尿酸、苯乙胺、氧氨嘧啶等代谢物含量高于雄性大鼠,差异有统计学意义（p〈0.05）.雄性大鼠尿液中的甲胺、二甲胺、三甲胺、肌酸酐、尿囊素、延胡索酸、甲酸等代谢物则明显高于雌性大鼠,差异有统计学意义（p〈0.05）.性别因素对大鼠尿液中的代谢成分有一定的影响.