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家福捕鸟蛛(Selenocosmia jiafu)是一种生活在中国广西、云南等边远山区、中等个体、产毒量较大和毒性较强的蜘蛛新种。为了对家福捕鸟蛛粗毒成分进行初步探索,采用反相高效液相色谱、基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对粗毒多肽和蛋白质的多样性进行了分析。结果表明:家福捕鸟蛛粗毒经色谱分离后得到40多个色谱峰,经质谱鉴定得到238个多肽,且多肽的相对分子质量呈现出双峰分布,其中62.5%的多肽的相对分子质量分布在3000~4500 之间,33.2%的多肽的相对分子质量分布在1000~3000之间。这种相对分子质量的分布模式不同于其他已经报道的蜘蛛粗毒中多肽的分布模式。电泳分析结果表明:除了相对分子质量在10000以下的多肽分子,粗毒在50、72和90 kD附近有3条明显的条带,粗毒电泳条带经液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱鉴定,主要是一些血蓝蛋白、钾离子通道蛋白、钙蛋白酶等。说明家福捕鸟蛛粗毒中多肽和蛋白质种类丰富。 相似文献
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虎纹捕鸟蛛毒中次黄嘌呤核苷的分离与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
本文从虎纹捕鸟蛛粗毒中经高效液相色谱分离纯化出一种组分,通过场解吸质谱和电子电离质谱鉴定为次黄嘌呤核苷,其含量为3.9%。同时,进一步用标准样品进行紫外、液相色谱对照验证,并对次黄嘌呤核苷以毒液中的一种成分的形式存在的作用进行了简单的讨论。 相似文献
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东亚钳蝎4个软瘫型抗昆虫神经毒素的纯化及其分子特征 总被引:3,自引:0,他引:3
本文首次直接用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对东亚钳蝎(Buthus martensi Karsch)粗毒进行了分离,获得了至今关于该毒神经毒素组分的最佳分离和高回收得率的图谱,如本法可将哺乳动物毒素(包括兼有哺乳动物毒性的昆虫毒素)和只有昆虫毒性的昆虫毒素分成两个区,并从后一区中纯化了多至5个抗昆虫毒素(分别将它们定名为BmK IT1至IT5)。毒性检测、氨基酸组成分析及N-端3肽序列测定结果表明,除其中的BmK IT1应为前文报道的BmK IT(挛缩型抗昆虫毒素)外,BmK IT2至IT5则都是新发现的软瘫型抗昆虫毒素。该4个毒素都是偏碱性的、由约61个氨基酸残基组成的单链多肽,等电点均在8.3至8.5之间。当BmK IT2分子被荧光物质标记修饰后,生物毒性便丧失。揭示这类毒素分子表面带正电荷的残基对维系其生物活性应同样是至关重要的。 相似文献
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东亚钳蝎昆虫毒素BmK IT的初级结构研究 总被引:4,自引:0,他引:4
从中国产东亚钳蝎(Buthus martensi Karsch)毒中纯化的一个昆虫毒素BmK IT经还原和羧甲基化处理后,分别用TPCK-胰蛋白酶和金黄色葡萄球菌蛋白酶进行用TLC-薄膜分离酶解的肽段并分别测定了它们的氨基酸顺序。将BmK IT及其酶解肽段的氨基酸顺序的测定结果与由非洲产蝎Androctonus australis Hector毒中纯化的昆虫毒素AaH IT的初级结构进行参照对比,我们发现两种昆虫毒素的分子结构中仅有16个残基部位发生了变异,其同源性高达75%以上。这一结果为探讨蝎昆虫毒素的分子结构特征以及结构与功能的相互关系提供了重要资料,也为这类毒素的开发利用,如作为神经生物科学研究中的工具物或探讨作为生物杀虫剂的可能性等提供了必要的分子基础。 相似文献
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化学合成虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ的色谱行为及分离纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
利用反相高效液相色谱 (RP HPLC)和离子交换色谱 (IEC)比较研究了固相化学合成的多肽类神经毒素虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )与其对应的天然产物的色谱行为差异及分离纯化方法。发现在完全相同的实验条件下 ,复性处理后的合成HWTX Ⅰ的谱峰有别于还原变性后又复性的天然HWTX Ⅰ的谱峰 ,主要表现为扩散度较大 ,对称性较差 ,说明合成产物存在更大分子构象的不均一性。推测除了在合成HWTX Ⅰ复性过程中有少数分子发生二硫键错配外 ,还有部分分子在固相合成中发生了消旋作用 ,需要交替采取多种色谱法才能完全分离纯化复性后的合成多肽产物。 相似文献
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阿基瑞林,又称乙酰基六肽-8、六胜肽等。它作为肉毒毒素的安全替代品,具有显著的抗皱活性,是美妆市场上需求潜力很大的抗皱多肽原料。当前阿基瑞林主要是通过固相合成方法得到的,由于所使用的Rink Amide AM树脂单价高、上载量低,造成了阿基瑞林原料价格高昂,不利于其大规模生产及推广应用。本文中使用固-液相结合的方法,首先用高上载量、单价低的2-CTC树脂合成六肽片段,六肽片段再经酰胺化处理得阿基瑞林粗品,粗品经纯化后得纯度95%以上的阿基瑞林,收率59.77%。本方法成本低、收率高,为C端酰胺化多肽的合成提供了一种新思路。 相似文献
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高效阳离子交换法分离纯化蛋清中的溶菌酶 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了用高效阳离子交换分离纯化蛋清中溶菌酶的新方法 ,讨论了纯化的工艺条件。蛋清样品匀浆后 ,用氯化钠初步纯化 ,然后用弱阳离子交换柱XIDACE WCX分离。结果表明 ,被纯化的溶菌酶和杂蛋白得到很好分离。经活性检测 ,溶菌酶过柱后的活性回收率为 10 7% ,蛋白的比活为 15 4 6 7U/mg ,纯化倍数提高了 5 6倍。用尺寸排阻 (SEC)鉴定 ,得到的溶菌酶呈均一性。该法较传统软基质低压离子交换分离速度快 ,纯化效率高。 相似文献
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Perkins等[1]用MALDI/TOF/MS对不同种类蛇毒中神经毒素进行了分析,彭嘉柔等[2,3]对江浙蝮蛇和蛇毒粗组份进行了初步质谱表征.但蛇毒蛋白纯化困难,因此对单一组份的研究较少且不系统.本文以白眉蝮蛇蛇毒(AgkistrodonblomhoffiiUssurensis,ABUV)为原料,纯化得到了精氨酸酯酶(Arginineesterase,AEase)、磷脂酶A2(PhospholipaseA2,PLA2)、纤溶酶(fibrinolyticenzyme)和L-氨基酸氧化酶(L-aminoacidoxidase),并且用MALDI/TOF/MS法对它们和蛇毒粗毒进行了系统研究.1 实验部分1.1 仪器和药品 激光解吸质谱仪为美国Molecular公司L… 相似文献
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利用离子交换色谱快速纯化α-淀粉酶 总被引:1,自引:0,他引:1
本文开发了一个用强阴离子高效液相色谱分离纯化α-淀粉酶的的新方法。详细讨论了纯比的最佳条件*在给定的条件下纯化工业α-淀粉酶,其活性回收率达96%,比活性为388u/mg蛋白,纯化倍数提高30倍,经SDS-PAGE分析,得到分子量分别为58K和33K两条α-淀粉酶谱带。此法纯化α-淀粉酶简单,快速,效率高。不仅能纯化工业粗酶,也可纯化其它来源的α-淀粉酶。 相似文献
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本文开发了一个用强阴离子高效液相色谱分离纯化α-淀粉酶的的新方法。详细讨论了纯比的最佳条件*在给定的条件下纯化工业α-淀粉酶,其活性回收率达96%,比活性为388u/mg蛋白,纯化倍数提高30倍,经SDS-PAGE分析,得到分子量分别为58K和33K两条α-淀粉酶谱带。此法纯化α-淀粉酶简单,快速,效率高。不仅能纯化工业粗酶,也可纯化其它来源的α-淀粉酶。 相似文献
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将固相萃取和凝胶色谱技术相结合,建立了以野外采集的水华蓝藻为原料提取和纯化微囊藻毒素-RR(MC-RR)的有效方法。用70%的甲醇溶液溶解35 g藻浆,经离心等系列处理,得粗提液,旋转蒸发去除甲醇;粗提液经HLB柱固相萃取后,得到7.5 mL洗脱液,然后将其浓缩至2 mL,再用Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离纯化,洗脱液分管收集,用紫外分光光度计测定每管洗脱液在238 nm的吸收值,并绘制洗脱曲线。使用高效液相色谱对峰值组分进行鉴定,同时利用紫外分光光度计对毒素的光谱特征进行鉴定。最终获得3.65 mg纯度超过90%的MC-RR样品,产品得率为74.1%。其紫外吸收光谱在238 nm处有特征吸收,证明所纯化的样品为MC-RR。 相似文献