山奈素与蛋白质相互作用的电化学行为研究

应用循环伏安法研究山奈素在活化玻碳电极上的电化学行为及其与人血清白蛋白(HSA)的相互作用,建立差示脉冲伏安法测定HSA的新方法.在pH4.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中,山奈素可与HSA形成超分子复合物,导致前者在0.468V处的氧化电流峰下降,其下降值与HSA浓度在0.05～0.25mg/L范围呈线性关系,检出限为0.008mg/L,可应用于血清样品测定.     

测定人血清白蛋白的电化学研究及分析应用

以电化学方法研究了pH 3.2的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中变色酸2R与蛋白质的相互作用。变色酸2R在-0.43 V(vs.SCE)有1个良好的极谱还原峰,加入人血清白蛋白(HSA)后,其峰电位不变而峰电流下降。峰电流的下降值同HSA的浓度在(1.5~30.0)×10-8moL/L范围内呈线性关系,其线性方程为ΔIp″(nA)=-338.38+191.9c(moL.L-1),r=0.997。应用于实际人血清样品的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G_250光度法一致。由实验结果求得人血清白蛋白和变色酸2R的结合比为1∶3,结合常数K为1.55×105。     

同步荧光光谱法测定蛋白质

在模拟生理条件下,由于核苷类药物中间体氰基乙基尿嘧啶(CEU)与血清白蛋白相互作用,血清白蛋白的内源荧光发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中血清白蛋白的浓度呈线性关系,据此提出以氰基乙基尿嘧啶为探针,用固定波长同步荧光光谱法测定人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)的方法.在最佳试验条件下,体系的荧光强度与HSA和BSA的质量浓度分别在1.38～496.2 mg·L-1和1.56～624.0 mg·L-1范围内呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.045 mg·L-1和0.051 mg·L-1.方法应用于人血清及牛血清中HSA及BSA的测定,并以此样品为基体分别加入HSA及BSA标准溶液作回收试验,测得回收率在95.1%～102.5%之间,相对标准偏差(n=6)在0.43%～2.72%之间.     

茜素黄R与蛋白质相互作用的线性扫描极谱法研究及分析应用

以电化学方法研究了在pH3.2的Britton Robinson(B R)缓冲溶液中茜素黄R与蛋白质的相互作用。茜素黄R在-0.43V(vs.SCE)有一个良好的极谱还原峰,加入人血清白蛋白(HSA)后,其峰电位不变而峰电流下降,利用峰电流的下降可以测定蛋白质。优化了结合反应条件和电化学测定条件,在最佳条件下,峰电流降低值同HSA的质量浓度在4.0～40.0mg L范围内呈线性关系,其线性方程为ΔI″p(nA)=-5.48 72.28ρ(mg L),r=0.993。将该方法应用于人血清样品的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G 250光度法一致,回收率在97%～103%之间。此方法还可应用于牛血清白蛋白、牛血红蛋白、卵清白蛋白等蛋白质的测定。     

对乙酰基偶氮羧-铈(Ⅲ)-人血清白蛋白体系的吸收光谱性质及其分析应用

在pH 2.0~3.0的B-R缓冲介质中,对乙酰基偶氮羧(p-ACA)与铈(Ⅲ)生成蓝色配合物,其吸收峰在727nm处,而显色剂本身吸收峰在577nm处,对比度达150mm。在此显色体系中加入人血清白蛋白(HSA)时,发生消光反应,呈现在波长727nm处吸光度的减弱。试验表明:HSA的质量浓度在10~120mg·L-1范围内与相应的吸光度减弱程度(ΔA)之间呈线性关系。显色体系对HSA的表观摩尔吸光率为5.14×105L·mol-1·cm-1。加入TX-100使该体系的灵敏度提高45%。应用上述方法测定了3份人血清样品中HSA的含量,测定值与考马斯亮蓝法的测定结果一致。     

一种新型的分子内电荷转移荧光探针测定人血清白蛋白

由于人血清白蛋白(HSA)与一种分子内电荷转移(ICT)化合物1-酮-2-(对二甲氨基苯亚甲基)-四氢萘(KDTN)的结合反应,引起KDTN荧光的增强,其荧光强度的增强与HSA的浓度在13.6~272.0 mg.L-1范围内呈线性关系。据此提出了以KDTN为探针测定人血清白蛋白的荧光方法。方法的检出限(3S/N)为0.136 mg.L-1,用标准加入法对方法的回收率作了试验,测得平均回收率为104.4%,测定值的相对标准偏差(n=7)为4.1%。     

蛋白质电化学检测的新体系研究及应用

在pH 3.5B-R缓冲溶液中以溴百里香酚蓝为电化学探针建立了蛋白质测定新体系.溴百里香酚蓝在-0.458 V(vs.SCE)有一个灵敏的极谱伏安还原峰,加入人血清白蛋白(HAS)后,其峰电位不变而峰电流下降.峰电流的下降值同HAS质量浓度在1.0～40.0 mg·L-1范围内呈线性关系,其回归方程为△I"p=133.52 C-3.72,r=0.999,定量下限为1.0 mg·L-1.由试验结果求得蛋白质与溴百里香酚蓝相互作用的结合比为1:4,结合常数βs=1.43×10 19.应用于实际人血清样品的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G-250光度法一致.此方法还可应用于牛血清白蛋白、牛血红蛋白、卵清白蛋白等的测定.     

酸性铬蓝K-蛋白质结合反应体系的极谱分析

酸性铬蓝K(ACBK)在pH3.0Britton Robinson(B R)缓冲溶液中,于-0.41V(vs.SCE)产生一个灵敏的线性扫描二阶导数极谱峰。当在上述溶液中加入人血清白蛋白(HSA)后,由于HSA带正电,而ACBK带负电,两者之间主要通过静电引力形成一种超分子复合物,该复合物无电化学活性,使ACBK在溶液中的游离浓度降低,相应其在-0.41V处的极谱峰电流降低。优化了结合反应的条件和电化学测定条件。在最佳条件下,峰电流的降低值与HSA的加入量在3.0～20.0mg·L-1范围内呈线性关系,应用于人血清样品的测定,试验结果同考马斯亮蓝光度法一致。     

刚果红与血清白蛋白相互作用的极谱分析

在pH4．7HAc-NaAc缓冲溶液中，刚果红与蛋白质(BSA或HSA)作用形成络合物，使刚果红-0．35V(vs SCE)的还原峰电流下降，峰电流的降低值同所加的BSA或HSA质量浓度在一定范围内呈线性关系；BSA和HSA的线性范围分别为0．5～12mg／L和0．5～11mg／L，检出限分别为0．25和0．20mg／L；运用该法测定了人血清白蛋白样品，结果令人满意。     

钍试剂线扫极谱分析法测定蛋白质的研究

在0.2 mol/L pH 3.0的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中,钍试剂于-0.49 V(vs.SCE)产生一个灵敏的线性扫描二阶导数极谱还原峰。当在上述溶液中加入人血清白蛋白(HSA)后,钍试剂在-0.49 V处的峰电流降低,而峰电位基本没有变化,这是由于HSA与钍试剂会发生结合反应,使溶液中游离的钍试剂浓度降低,相应的还原峰电流也降低。对结合反应条件和电化学测定条件进行了优化。在最佳条件下,峰电流的降低值同HSA的浓度在1.0~12.0 mg/L范围内呈线性关系。将本法应用于人血清样品的测定所得结果同考马斯亮蓝G-250光度法一致。此方法还可应用于牛血清白蛋白、卵清白蛋白等蛋白质的测定。