MAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的光谱及电化学研究

提出了间氨基酚(MAP)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2O2氧化MAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离HRP的线性范围为1.0×10-8～1.0×10-6g/L,检测限达3.8×10-9g/L.制备出了HRP催化H2O2氧化MAP的产物纯品,并应用电化学分析,高效液相色谱,元素分析,紫外-可见光谱,红外光谱,1H核磁共振谱,13C核磁共振谱及质谱等技术对体系酶促反应进行了深入的研究.在选择的酶促反应条件下,生成的产物为2-氨基-5-[(3-羟苯基)氨基]-2,5-环己二烯基-1,4-二酮.提出了酶催化反应机理及其产物的电极还原过程.     

伏安酶联免疫分析体系测定南方菜豆花叶病毒

本文提出用邻氨基酚 ( OAP) - H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( HRP)伏安酶联免疫分析体系测定 HRP和南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)。该方法是将 HRP催化 H2 O2 与 OAP的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物在滴汞电极上的还原反应相偶合 ,在 BR缓冲溶液中 ,在 - 0 .87V( vs.SCE)左右产生灵敏的伏安峰。利用该极谱波对 HRP的检测限为 5× 10 -12 g/m L,线性范围为 6.0× 10 -12～ 4 .0× 10 -9g/m L。用该方法测定南方菜豆花叶病毒取得了令人满意的结果。     

OAP-H2O2-HRP酶促产物的固体电极法研究及应用

采用电化学方法和紫外-可见光谱法对邻氨基酚(OAP)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)酶联免疫分析体系的反应产物进行了较为详细地研究.紫外-可见光谱实验表明HRP的加入极大地催化了H2O2氧化OAP的反应.循环伏安实验结果表明,其酶促产物在玻碳电极上发生可逆的氧化还原反应,峰电流与扫描速率的平方根成线性关系;微分脉冲伏安曲线表明酶促产物在-0.336 V左右(一8.0 B-R缓冲溶液中)产生了1个峰形良好的还原峰,峰电流随HRP浓度的增大而增大,借助此还原电流可用于测定HRP.用微分脉冲伏安法对酶促产物的测定条件进行了优化.在最佳条件下测定游离HRP的线性范围为8.0×10-11～4.0×10-9-g/mL.检出限为6.9×10-11g/mL.     

MAP-H~2O~2-HPR伏安酶联免疫分析新体系和光谱及电化学研究

提出了间氨基酸(MAP)-H~2O~2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H~2O~2氧化MAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离HRP的线性范围为1.0x10^-^8-1.0x10-6/L,检测限达3.8x10^-^9g/L.制备出了HRP催化H~2O~2氧化MAP的产物纯品并应用电化学分析,高效液相色谱,元素分析,紫外-可见光谱,红外光谱,^1H核磁共振谱,^1^3C核磁共振谱及质谱等技术对体系酶促反应进行了深入的研究.在选择的酶促反应条件下,生成的产物为2-氨基-5-[(3-差苯基)]-2,5-环己烯基-1,4-二酮.提出了酶催化反应机理及其产物的电极还原过程。     

MAP-H~2O~2-HPR伏安酶联免疫分析新体系和光谱及电化学研究

提出了间氨基酸(MAP)-H~2O~2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H~2O~2氧化MAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离HRP的线性范围为1.0x10^-^8-1.0x10-6/L,检测限达3.8x10^-^9g/L.制备出了HRP催化H~2O~2氧化MAP的产物纯品并应用电化学分析,高效液相色谱,元素分析,紫外-可见光谱,红外光谱,^1H核磁共振谱,^1^3C核磁共振谱及质谱等技术对体系酶促反应进行了深入的研究.在选择的酶促反应条件下,生成的产物为2-氨基-5-[(3-差苯基)]-2,5-环己烯基-1,4-二酮.提出了酶催化反应机理及其产物的电极还原过程。     

以3,3′,5,5′-四甲基联苯胺为底物的伏安酶联免疫分析体系研究

对 3 ,3′,5 ,5′ 四甲基联苯胺 (TMB) H2 O2 辣根过氧化物酶 (HRP)伏安酶联免疫分析体系进行了研究。HRP催化H2 O2 氧化TMB ,其氧化产物在汞电极上可以发生还原反应 ,在B R缓冲溶液中 ,-0 .76V(vs.SCE)处产生较为灵敏的伏安波。将此伏安波应用于测定HRP和HRP的标记物。测定HRP的线性范围为 6.0×1 0 - 1 1 ～ 5 .0× 1 0 - 9g mL ,检测限为 5 .0× 1 0 - 1 1 g mL。对该体系酶催化反应机理及产物的电极还原过程进行了探讨     

OPD-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析体系酶催化反应的研究

应用电化学分析、高效液相色谱、紫外-可见光谱、红外光谱和核磁共振等技术对邻苯二胺(OPD)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析体系的酶催化反应进行了详细深入的研究.用化学方法制得了HRP酶催化H2O2氧化OPD的产物纯品.伏安法和高效液相色谱实验说明,在所选择的酶催化反应条件下,酶催化反应只生成一种产物;经紫外-可见光谱,红外光谱和13C核磁共振谱鉴定,产物为2,3-二氨基吩嗪.写出了酶催化反应过程,同时对酶催化反应产物的电极还原过程也进行了研究.     

OAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白

本文提出邻氨基酚 (OAP)-H2O2-辣根过氧化物酶（HRP）伏安酶联免疫分析体系并用于人血清中甲胎蛋白(αFP)的测定。该方法是将HRP催化H2O 2 氧化 OAP 的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物(邻苯醌亚胺)在滴汞电极上的还原反应相偶合, 在BR缓冲溶液中, 在-0.87 V (vs.SCE) 左右产生灵敏的极谱波。根据测定标记在甲胎蛋白抗体上的HRP的量, 求得发生免疫反应的αFP的含量。该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为1.25～400 mg/L。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定, 并与酶联免疫吸附测定光度法(ELISA)进行对照,二者相关性很好。     

ODA-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出邻联茴香胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系,并用于测定HRP和HRP标记物.该方法是将HRP催化H_2O_2氧化邻联茴香胺的酶催化反应与邻联茴香胺的氧化产物的电极还原反应相偶合,在BR缓冲溶液中,在-0.56V(SCE)左右产生灵敏的极谱波.应用此极谱波测定HRP的检测限为3.7×10~(-12)g/mL,线性范围为1.O×1O~(-11)～2.0×10~(-9)g/mL.对邻联茴香胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的偶合反应机理及电极还原过程进行了较详细的探讨.     

以OT为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

以玻碳电极为工作电极研究了邻联甲苯胺(OT)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶(HRP)及其标记物的方法。HRP能够催化H2O2氧化OT,其反应产物在玻碳电极上-0.58V(vs.Ag/AgCl)左右被还原产生一个灵敏的还原峰,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大,借助此还原电流可以测定HRP,并进而可用于以HRP为标记物的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究,在最佳实验条件下测定游离HRP的线性范围是2.0×10-9～4.0×10-8g/mL,检出限为1.6×10-9g/mL;测定游离的酶标记物(IgG HRP),稀释范围为1∶2000～1∶400000,最大稀释比为1∶400000。     

白藜芦醇作辣根过氧化物酶底物的布氏杆菌抗体酶联免疫传感器研究

一种纯天然产物白藜芦醇用作辣根过氧化物酶(HRP)底物。对其化学性质的研究证实,白藜芦醇在空气中较稳定,对HRP、H2O2的电化学响应性能优于传统HRP底物,对人体无毒害。白藜芦醇在HRP催化下可被H2O2氧化成醌,产物醌在电极上于-376 mV处可被还原,其电流的大小与HRP的浓试在一定浓度范围内呈线性相关。将兔布氏杆菌抗原包埋在石墨-石蜡基质中制备了测定兔布氏杆菌抗体的电化学酶联免疫传感器,该传感器测定兔布氏杆菌抗体的线性范围为3×10-4~1.65×10-2g/L;检出限为1×10-4g/L;RSD为4.6%。本方法制备免疫传感器的电化学性能稳定,抗原活性保持良好。     

2-氨基-3-羟基吡啶-过氧化氢-辣根过氧化物酶伏安酶联免疫体系分析人血清癌胚抗原

以氮杂环化合物为电化学分析底物的2-氨基-3-羟基吡啶-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫体系测定人血清癌胚抗原(CEA).HRP催化H2O2氧化2-氨基-3-羟基吡啶的酶促反应产物,在缓冲液中-0.36 V处产生一个灵敏的伏安还原峰,借助此峰可以测定游离的HRP,进而可用于以HRP为标记物的酶联免疫分析.对酶促反应条件和测定条件的优化反应条件为:以B-R缓冲液(pH 6.0)为反应介质,在10 mL总反应液中含有1.0 mL 0.2 mol/L B-R缓冲液、3.0 mL 8.0 mmol/L 2-氨基-3-羟基吡啶溶液以及1.5 mL 0.5 mmol/L H2O2溶液,反应温度37 ℃,反应时间30 min.最佳测定条件为:B-R缓冲液(pH 7.0)为支持电解质,在10 mL总测定溶液中含有5 mL上述总反应液、1.0 mL 0.2 mol/L B-R缓冲液.测定仪器条件:起始电位0.00 V,终止电位-0.80 V,电位扫描速度400 mV/s,滴汞静止时间7 s.在最佳的反应条件和测定条件下,新体系测定游离HRP的线性范围为4.0×10-4～1.0 μg/L; 对HRP的检出限为0.12 ng/L.新体系对CEA测定的线性范围为0.50～80.0 μg/L; 检出限为0.50 μg/L.为经典ELISA法的检出限的1/10.     

OT-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系

本文首次提出了邻联甲苯胺(OT)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系。本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2O2氧化OT的产物, 用于游离HRP和各种HRP标记物测定, 灵敏度比经典的ELISA光度法分别高两个至四个数量级。测定游离HRP的检测限达到1.8×10^-^1^2 g/mL, 线性范围为5.0×10^-^1^2-1.0×10^-^8 g/mL。对此伏安酶联免疫分析新体系的偶合反应机理及电极还原过程也进行了详细的研究。     

循环连续流动分析法测定辣根过氧化物酶的活性

基于H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)-邻苯二胺(OPDA)催化反应体系,建立了测定游离及固定化HRP酶活性的循环连续流动分析法(CCFA).CCFA实现了反应液、反应过程的循环连续检测.用CCFA法对酶催化反应条件进行研究,得到的最佳反应条件是:pH 5.0,反应温度27 ℃, 66.0 μmol/L H2O2 , 2 mg/L OPDA,缓冲液为0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液; 测定游离HRP的线性范围为0～10 U/L,检出限为0.21 U/L,RSD＜1.03%.使用CCFA法测定了固定化HRP的活性,并对HRP酶促动力学进行了研究,得到的游离HRP的米氏常数为0.078 mmol/L,最大反应速度为0.26 mmol/(L min),催化常数为5.2 × 104 min-1.CCFA法操作简便、准确度高、节省试剂、易于实现自动化.     

以1-萘胺为底物伏安法测定辣根过氧化物酶

提出了1-萘胺-过氧化氢-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析体系应用于HRP的伏安法测定.在pH 7.0的KH2>PO4-Na2>HPO4缓冲溶液中,HRP催化过氧化氢氧化1-萘胺生成电活性产物,在极谱仪上进行二阶导数伏安线性扫描,该产物在滴汞电极上发生还原反应,于-0.43 V(vs.SCE)左右产生一灵敏的还原峰.HRP浓度在3.0×10-7～5.0×10-5>g·L-1范围内与线性扫描峰电流的二阶导数值(△I"p)呈线性关系,检出限为2.5×10-7g·L-1.     

甲基红-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析法测定HRP及其标记物

提出了一种新的辣根过氧化物酶的底物-甲基红,它本身具有电化学活性,能够在静汞电极上发生还原反应,产生灵敏的伏安电流信号.以H2O2为氧化剂,HRP能催化氧化还原反应的发生,使甲基红被氧化分解,其平衡浓度降低,对应的还原峰电流降低,峰电流的降低值与HRP的质量浓度在5.0×10-8～5.0×10-7g/mL之间呈线性关系,对2.0×10-7g/mL HRP进行11次测定的相对标准偏差为4.6%,方法的检出限为1.8×10-8g/mL.应用于IgG-HRP和Avidin-HRP的测定.     

OAP-H~2O~2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清铁蛋白

首次提出邻氨基酚(OAP)-H~2O~2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系并用于人血清中铁蛋白的测定.本方法以线性扫描二阶导数伏安法栓测HRP催化H~2O~2氧化OAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游HPR的线性范围为1.0x10^-^1^2-4.0x10^-^9g/mL,检测限达6.0x10^-^1^3g/mL.本法对铁蛋白测定的线性范围为0.2-320ng/mL,用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA显色光度法进行对照,二者相关性很好.对此伏安酶联免疫分析新体系的电极还原过程也进行了详细的研究.     

以变色酸2R为底物测定辣根过氧化物酶的研究

变色酸 2R(CT2R)是一种具有电化学活性的物质 ,在碱性条件下 ,该物质在滴汞电极上 - 6 6 0mV(vs.SCE)左右产生还原波 ,加入H2 O2 和辣根过氧化物酶 (HRP)后 ,该物质被氧化生成具有非电化学活性的物质 ,导致溶液中游离的CT2R浓度降低 ,相应还原波波高降低 ,HRP在一定含量范围内与伏安峰的降低值具有良好的线性关系。通过测定波高的降低值可测定HRP ,测定游离HRP的线性范围是 4 .0× 10 -5～ 4 .0× 10 -3 g/L。对酶促反应的动力学进行了研究 ,反应的米氏常数Km =1.38mmol/L ,最大反应速率Vmax=5 3.9nA/min。     

基于固体酶催化反应电化学测定酶含量

提出了以固体辣根过氧化物酶(HRP)对过氧化氢氧化邻苯二胺的催化作用为基础的测定HRP及其标记物的电化学方法.测定中以Au-Pt/PAN/GCE为工作电极,并详细叙述其制备过程.将一定浓度的HRP按规定方法固定在上述修饰电极上制得HRP/Au-Pt/PAN/GCE修饰电极,将此电极浸入含5.0×10-3mol·L-1邻苯二胺及2.5×10-3mol·L-1过氧化氢的磷酸盐缓冲溶液(pH 5.0)中,反应10 min后将电极取出,记录溶液中酶催化反应产物的方波伏安峰及峰电流.结果表明:酶催化反应前,底物在工作电极上于-0.488 V(vs.SCE)处有明显的还原峰,在酶催化反应后,在-0.584 V处出现一个更大的还原峰,电位负移160 mV,且峰电流明显增大.峰电流值(Ip)与修饰在Au-Pt/PAN/GCE电极上的HRP的含量在1.0×10-2～2.0×102μg·L-1之间呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为3.0 ng·L-1.     

生物酶HRP催化H~2O~2氧化间苯二胺反应的研究

应用电化学分析,高效液相色谱(HPLC),紫外-可见光谱(UV-vis),红外光谱(IR)和核磁共振(NMR)等技术对辣根过氧化物酶(HRP)催化H~2O~2氧化间苯二胺(MPD)的反应进行了研究。伏安法和高效液相色谱实验说明,在所选择的酶催化反应条件下,酶催化反应生成一种产物。用化学方法制得了HRP酶催化H~2O~2氧化MPD的产物纯品。经UV-vis,IR和^1HNMR谱鉴定,产物为2,7-二氨基吩嗪。写出了酶催化反应过程,同时对酶催化反应产物的电极还原过程也进行了研究。