补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法将50只小鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组和两药联用组,每组10只,其中缺血再灌注后1d和7d各5只。首先制备小鼠大脑中动脉缺血模型,TUNEL法观察神经细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法观察小鼠大脑皮质神经元Bcl、Bax-2和Caspase-3表达阳性细胞数。结果与模型组比较,补阳还五汤组、依达拉奉组、两药联用组小鼠脑神经细胞AI值均明显降低（P＜0.05）,Bcl-2/Bax比值明显升高（P＜0.05）,Caspase-3表达阳性细胞数明显减少（P＜0.05）,其中又以两药联用组更为明显（P＜0.05）。结论两药联用能降低脑缺血再灌注损伤后神经细胞的凋亡,降低促凋亡基因Caspase-3的表达,协同发挥脑保护作用。     

藤黄酸诱导肺癌细胞H1975凋亡的机制研究

目的 研究藤黄酸（GA）诱导人肺癌细胞H1975凋亡的分子机制,探讨氧自由基（ROS）和JNK信号通路在GA杀伤 肺癌细胞中的作用。方法 以人肺癌细胞H1975为研究对象,MTT法测定GA抑制细胞增殖的作用,Annexin V/PI 双染法测定细胞凋亡率,DCFH-DA 法测定ROS 含量,JC-1探针染色分析线粒体膜电位（MMP）,Western blot检测JNK 信号通路的激活和线粒体凋亡途径相关蛋白表达的变化。结果 GA 呈剂量依赖性抑制H1975细胞的增殖,各实验组细胞存活率与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05 或0.01）。1、2.5 和5滋mol/L GA 作用24h 后,细胞凋亡率分别为25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 和cleaved PARP 的表达随GA 浓度增高而显著增加,与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05或0.01）。GA 作用2h 后H1975细胞ROS 含量显著升高,磷酸化JNK（p-JNK）表达上调（P＜0.05或0.01）。GA 作用16h后各实验组细胞MMP 均明显降低（均P＜0.05）。GA 作用24h后实验组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bak、Bik表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达与空白对照组相比明显下降（P＜0.05 或0.01）。结论 GA 具有诱导H1975 细胞凋亡的作用,其可能机制是上调细胞内ROS含量,激活JNK 信号通路,进而引起MMP 降低和线粒体凋亡途径激活。     

酪酸梭菌抗阿司匹林致小鼠胃溃 疡作用的初步研究

目的 观测酪酸梭菌是否对阿司匹林导致的胃溃疡具有预防效应,并对其机制进行初步探讨。方法 取30只健康 雄性ICR 小鼠,随机分成3 组,每组各10 只,即模型组、酪酸梭菌组、奥美拉唑组。酪酸梭菌组以6×108cfu/ 只的菌量,模型组和奥美拉唑组均予以相同体积的无菌培养基,灌胃4d 后再饥饿处理48h,然后以250mg/kg 剂量的阿司匹林灌胃造模,奥美拉唑组小鼠于造模前30min,腹腔注射奥美拉唑（13mg/kg）。造模4h 后,取胃组织分别测定SOD、CAT 活力、MDA 含量;进行常规HE 染色观察胃黏膜组织结构变化,PAS染色判断黏液量的变化,免疫组化法测定Bcl-2、Bax 表达水平。结果 模型组的SOD、CAT 活性明显降低,MDA 含量显著增加,而酪酸梭菌预处理后逆转了该趋势（P＜0.01）,与奥美拉唑组比较无统计学差异。HE染色观察,酪酸梭菌能减轻胃黏膜的病理损伤,与奥美拉唑组无统计学差异。PAS 结果提示酪酸梭菌能够增加黏液量。酪酸梭菌组的Bcl-2 表达较模型组显著增多,同时Bax 表达显著减少。结论 酪酸梭菌预处理通过抗氧化应激、增加胃黏液量、上调Bcl-2/Bax 表达比例,减轻阿司匹 林造成的胃溃疡损伤。     

钙蛋白酶-10 基因SNP-19 与多囊卵巢综合征相关性研究

目的 探讨钙蛋白酶-10 基因（CAPN-10）单核苷酸多态性-19（SNP-19）与多囊卵巢综合征（PCOS）的相关性。 方法 采用聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术,对107 例PCOS患者（PCOS 组）及111 例健康体检者（对照组）的CAPN-10 SNP-19 进行分析,并测定其性激素和生化指标。PCOS组再根据BMI与胰岛素抵抗（IR）稳态模型指数（HOMA-IR）分为肥胖组与非肥胖组、IR 组与非IR 组,分析CAPN-10 SNP-19 与其关系。结果 与对照组相比,PCOS 组BMI、空腹血糖（FPG）、TG、TC、LDL、黄体生成素（LH）、黄体生成素/ 卵泡刺激素（LH/FSH）、睾酮（T）均升高（均P＜0.01）。PCOS 组CAPN-10 SNP-19 1等位基因及1/2基因型频率均高于对照组（均P＜0.05）;且CAPN-10 SNP-19 1/2基因型PCOS 发病风险较1/1、2/2 基因型增加约2倍（OR=1.9,95％CI=1.1~3.3,P＜0.05）。CAPN-10 SNP-19 1、2等位基因频率PCOS 肥胖组与非肥胖组、IR 组与非IR组比较均无统 计学差异（均P＞0.05）;PCOS 肥胖组和IR组CAPN-10 SNP-19 1/2基因型频率分别高于非肥胖组和非IR 组,但差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 CAPN-10 SNP-19 与PCOS 遗传易感性有关,可能与PCOS 肥胖及IR 无关。     

血清反应因子在心血管疾病中的作用

血清反应因子（serum response factor,SRF）属于MADS转录因子家族的成员之一,是高度保守且广泛表达的转录因子。SRF在成年或发育期的心肌组织中均有表达,主要与下游靶基因启动子上特定DNA序列CArG盒[血清反应元件（SRE）的组成部分,CC（A/T）6GG box]结合,调控抗凋亡或促细胞增殖等基因（如IEGs：c-fos、mcl-1、Egr-1）的表达,对外界因素（如：缺血、缺氧等）刺激表现出快速的基因响应,影响心肌细胞的发育、分化、增殖及凋亡[1-2]。许多辅助转录调节因子蛋白（co-activator/co-repressor,如TCF家族成员Elk-1和MRTFs家族等）与SRF/SRE发生相互作用,激活与心肌分化、增殖及凋亡相关基因的转录。因此,对SRF-CArG box依赖基因转录的调控,是影响心肌凋亡/生存的关键因素之一[3]。另外,研究表明skeletal a-actin、b-MHC、car原diac a-actin、MLC-2v、dystrophin等收缩类蛋白[4-6]及非收缩类蛋白,诸如参与心脏功能的ANF、肌质网Ca-ATPase（SERCA2）、Na+/Ca2+交换离子通道 NCX1[7-8]均为SRF依赖的基因。由此可见,SRF在调控收缩蛋白基因和收缩功能器官的重要作用充分说明SRF在心脏功能中发挥着重要的调控作用。     

鸦胆子素D 对人胰腺癌细胞株 Panc-1体外增殖的抑制作用

目的 探讨鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1 体外增殖的影响。方法 人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度 （0、5、10、20、40、60滋mol/L）鸦胆子素D分别作用24、48、72 h 后,应用CCK-8 法检测鸦胆子素D 对Panc-1细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测Panc-1细胞凋亡情况;Western blot 检测Panc-1 细胞经0、5、10、20、30、60滋mol/L 的鸦胆子素D 处理24h 后以及20滋mol/L的鸦胆子素D处理24、48、72 h后,细胞中Bax 及Bcl-2 的表达。结果鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性,60滋mol/L时对Panc-1作用24、48、72 h后细胞存活率分别为54.44%、33.00%、21.63%,凋亡率分别为47.29%、63.80%、72.16%;0、5、10、20、30、60滋mol/L 的鸦胆子素D 作用于Panc-1 细胞72h 后的细胞存活率是100%、71.60%、60.37%、46.78%、39.98%、21.63%,凋亡率分别为0、26.63%、45.62%、56.18%、62.21%、72.16%;随着鸦胆子素D 作用时间的延长或浓度的增加Bax 蛋白的表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论鸦胆子素D 可显著抑制人胰腺癌Panc-1 细胞生长,并促进其凋亡,在一定的浓度和时间范围内,其作用呈明显浓度和时间依赖性,其作用机制可能是通过促进Bax 的表达,降低Bcl-2 的表达 实现的。     

宫颈癌中EGFR蛋白表达及其临床病理意义

目的探讨表皮生长因子受体1（EGFR）蛋白表达在宫颈癌发生、发展中的临床病理意义。方法采用免疫组化EnVision法检测120例宫颈癌组织、49例高级别上皮内瘤变（CIN2~3）、40例低级别上皮内瘤变（CIN1）、37例正常宫颈组织中EGFR蛋白的表达,并进行比较分析。结果（1）正常宫颈、CIN1、CIN2~3、宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率分别为10.8%（4/37）、12.5%（5/40）、42.9%（21/49）、89.2%（107/120）。宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率显著高于CIN2~3、CIN1及正常宫颈组织（均P＜0.01）;EGFR蛋白在CIN2~3中表达显著高于CIN1和正常宫颈组织（均P＜0.01）;CIN1和正常宫颈组织之间EGFR蛋白表达阳性率无统计学差异（P＞0.05）。（2）肿瘤浸润深度更深的宫颈癌患者宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率高于浸润深度较浅的患者（P＜0.01）。结论EGFR在宫颈癌进展过程中起了重要作用,有望成为抗宫颈癌治疗的一个潜在生物学标志。     

HBsAg 对健康成人外周血单核细胞来源树突状细胞Tim-3信号通路的影响

目的 探讨HBsAg 对健康成人外周血单核细胞来源树突状细胞（MD-DCs）的免疫活性及对T细胞免疫球蛋白黏 蛋白分子3（Tim-3）和下游信号分子核因子-κB（NF-κB）蛋白表达的影响。方法 分离健康成人外周血单核细胞,经GM-CSF、IL-4 联合诱导为树突状细胞（DCs）,流式细胞术检测DCs 表面标志物表达水平。MD-DCs 分4 组添加不同浓度HBsAg（0、1、2、5滋g/ml）,分别设为对照组、+1滋g/ml 组、+2滋g/ml 组、+5滋g/ml 组,Western 印迹法检测Tim-3、NF-κB 信号蛋白表达,细胞增殖与毒性检测试剂检测MD-DCs 刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA 法检测细胞因子分泌水平。结果 外周血来源单核细胞成功诱导分化为DCs。与对照组相比,+2滋g/ml 及+5滋g/ml 组MD-DCs Tim-3 及NF-κB 表达水平均上调,刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力均增强,炎症因子IL-6、IL-10、IFN-γ 分泌水平均增高（均P＜0.05）,而+1滋g/ml 组较对照组无统计学差异（均P＞0.05）。与其他3 组相比,+5滋g/ml 组MD-DCs Tim-3、NF-κB、炎症因子分泌水平增高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强（均P＜ 0.05）。结论 HBsAg 上调MD-DCs Tim-3 及NF-κB表达水平,增强MD-DCs 免疫活性,且刺激作用随HBsAg 浓度的增高而增强。     

硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响。方法以单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将54只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（UUO）组（B组）、U-UO+硒组（C组）,每组18只。C组给予亚硒酸钠0.2mg/（kg·d）灌胃。A、B组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃。术后第7、14、21天各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE、Masson染色评定肾间质纤维化程度,免疫组织化学半定量法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）的表达。Western印迹法检测肾组织CTGF蛋白表达。化学比色法检测肾组织氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH- Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达水平。结果术后各时点C组肾间质纤维化程度较B组明显减轻（P＜0.05）,肾组织CTGF和α- SMA的表达强度明显低于B组（P＜0.05或0.01）、GSH- Px和SOD水平明显高于B组（P＜0.05）,MDA含量明显低于B组（P＜0.05）。B组肾组织中CTGF、a- SMA表达量之间呈正相关（P＜0.05）,CTGF和a- SMA表达量与肾间质纤维化病变程度呈正相关（P＜0.05）。结论硒可以减轻UUO模型大鼠肾间质纤维化程度,其机制可能与硒的抗氧化作用、下调肾组织CTGF的表达、抑制肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分化有关。     

VEGF、EGFR 及Parkin 蛋白在 鼻咽癌中的表达及三者间的相关性研究

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子受体（EGFR）及Parkin 蛋白在鼻咽癌（NPC）中的表达情况以 及三者间的相关性。方法 应用免疫组化SP 法检测48 例NPC 组织和34例正常鼻咽部上皮组织中VEGF、EGFR 及Parkin蛋白的表达,并探讨三者间的相关性。结果 NPC组织中VEGF和EGFR蛋白表达阳性率明显高于正常鼻咽部上皮组织,Parkin蛋白表达阳性率则明显下降,且均有统计学差异（均P＜0.05）。NPC组织中VEGF蛋白表达与NPC患者有无淋巴结转移及临床TNM 分期密切相关（均P＜0.05）,而与患者的年龄、性别、病理类型、T 分期均无关（均P ＞0.05）;EGFR 和Parkin 蛋白表达与NPC 患者有无淋巴结转移密切相关（均P＜0.05）,而与患者的年龄、性别、病理类型、T分期、临床TNM分期均无关（均P ＞0.05）。NPC组织中VEGF和EGFR 蛋白的表达呈正相关（P＜0.05）,Parkin和VEGF、EGFR蛋白的表达无相关性（均P＞0.05）。结论 VEGF、EGFR 及Parkin 蛋白与NPC发生、发展有关,VEGF、EGFR 及Parkin蛋白表达可作为NPC 的预后判断指标,NPC 中VEGF 和EGFR可能起协同作用,而Parkin 则可能单独发挥作用。