Stopped-flow- und fluorescenzspektrometrische Untersuchungen des Bindungsverhaltens von Dansylsarkosin an Albumin in Nativserum

Zusammenfassung Mit Humanserumalbumin (HSA) von 12 gesunden mÄnnlichen Spendern, mit Aktivkohle behandelten Seren und mit aus Citratplasma isoliertem Albumin wurden Stopped-flow- und fluorescenzspektrometrische Untersuchungen der Bindung von Dansylsarkosin (DS) an HSA durchgeführt. Die AffinitÄtskonstanten sind für alle untersuchten Seren vergleichbar (K _A=5,93 · 10⁵M^–1). Die AffinitÄtskonstante des Anlagerungskomplexes ist für die 12 Spenderseren (K _A=4,31 · 10⁴M^–1) etwas höher als für mit Aktivkohle behandelte Seren und isoliertes Albumin (K _A=2,9 · 10⁴M^–1). Dagegen ist die Geschwindigkeit der Umlagerung in den stabilen DS-HSA-Komplex (t _1/2=2,4 ms für isoliertes Albumin) erniedrigt (t _1/2=3,4 ms). Die Bindungskonstanten für die DS-HSA-Komplexierung sind für die 12 Spenderseren fast identisch (Standardabweichung 15%), die Dissoziationshalbwertszeit ist für alle untersuchten Seren etwa 46 ms. Aus den Ergebnissen kann gefolgert werden, da\ sich DS im Serum ausschlie\lich an HSA bindet. In nicht mit Aktivkohle behandeltem Serum vorhandene endogene Substanzen beeinflussen allosterisch den DS-HSA-Komplex.

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Stopped-flow and fluorescence spectrometric investigations of the binding behaviour of dansylsarcosine to albumin in native serum

Summary In serum of 12 healthy men, in charcoal treated serum and with isolated albumin the binding of dansylsarcosine (DS) to human serum albumin (HSA) has been investigated by fluorescence and stopped-flow measurements. The affinity constants for all sera (K _A=5.93×10⁵M^–1)were comparable. The constant of the low affinity DS-HSA complex is in the 12 seras (K _A=4.31×10⁴M^–1) somewhat higher than in charcoal treated sera and isolated albumin (K _A=2.9×10⁴M^–1), conversion into the high affinity complex (t _1/2=3.4 ms) is faster (t _1/2=2.4 ms) for isolated albumin. Dissociation half-life of the DS-HSA complex was for all investigated sera 46 ms. HSA is probably the only acceptor for DS in serum. Endogenous substances in untreated serum are affecting DS-HSA complexation allosterically.