| 亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达 |
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| 引用本文： | 何冬兰,牧野圭祐.亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达[J].中南民族大学学报(自然科学版),2002,21(3):4-7. |
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| 作者姓名： | 何冬兰 牧野圭祐 |
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| 作者单位： | 何冬兰(College of Chem and Life Science ,SCUFN);牧野圭祐(Institute of Advanced Energy,Kyoto University,Kyoto611-0011,Japan) |
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| 基金项目： | 国家留学基金委留学基金 |
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| 摘 要： | 酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链(bZIP)结构结合DNA的蛋白质之一，当GCN4二聚体与DNA结合时，亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构，而其基区由无规线团结构变为α螺旋．为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理，设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段，并将其克隆到Escherichia coli BL21，讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件．在蛋白质的小量表达试验中，重组子Escherichia coli BL21于5mL含有50μg／mL氨节青霉素和34μg／mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期，加入不同浓度的IPTG，继续培养以诱导蛋白质的表达，在不同的时间(如：诱导前，诱导2，4，6，8h)取样100μL到1．5mL离心管中、离心收集沉淀，将沉淀悬浮于样品缓冲液中，用10％SDS-PAGE检测；在10L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达，根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间．结果表明：含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时，0．1-0．8mmol的IPTG均可在2-10h内诱导该蛋白质表达；而大量培养时，0．2mmol和0．4mmol的IPTG在37℃均不可能诱导表达，只在28℃时才表达；小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4-6h，诱导剂IPTG的浓度为0．2mmol，大量表达的温度为28℃而不是37℃．
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| 关 键 词： | 亮氨酸拉链结构 诱导 蛋白质 大肠杆菌 酵母转录因子 亮氨酸拉链蛋白 DNA 重组子 |
Study on Expression Condition of a Leucine-Zipper Protein in the Recombinant Escherichia coli |
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| Abstract.Study on Expression Condition of a Leucine-Zipper Protein in the Recombinant Escherichia coli[J].Journal of South-Central Univ for,2002,21(3):4-7. |
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| Authors: | Abstract |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | leucine zipper protein expression induce |
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