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| 氧氟沙星噬菌体库的构建、筛选及抗体结构模拟 | |
| 作者姓名： | 张秀媛 何扩 杜新军 王俊平 杨青 |
| 作者单位： | 河北北方学院;天津科技大学教育部食品营养与安全重点实验室; |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.20905058);张家口市科技攻关项目(No.1311018C-3)资助~~ |
| 摘 要： | 应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗氧氟沙星单链抗体(scFv)库,筛选获得氧氟沙星特异性噬菌体scFv以及同源模拟其三维结构。将从氧氟沙星杂交瘤细胞提取的总RNA,用RT-PCR反转录合成cDNA,以针对鼠源重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的兼并引物,扩增获得VH和VL可变区基因,通过SOE-PCR法将VH基因和VL基因通过柔性多肽Linker(Gly4Ser)3拼接成全长scFv基因片段,将双酶切后的scFv基因片段插入T7噬菌体,经体外包装后转化宿主菌BLT5403,成功构建库容量为3×105pfu/mL的抗体库,经4轮吸附-洗脱-扩增的富集,采用直接竞争ELISA筛选到4个特异性噬菌体scFv,运用Expasy软件模拟特异性scFv的三维结构。为进一步大量表达氧氟沙星单链抗体奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 氧氟沙星 单链抗体 噬菌体展示 酶联免疫分析 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |